發(fā)布時(shí)間：2018-04-02 15:23

  本文選題：M-CSF　切入點(diǎn)：糖代謝　出處：《南華大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:探討巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞糖代謝的影響及其機(jī)制。方法:胞質(zhì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染M-CSF的MCF-7細(xì)胞(MCF-7-M)系由實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建。常規(guī)培養(yǎng)MCF-7-M細(xì)胞、親本MCF-7細(xì)胞。ATP檢測試劑盒分析MCF-7-M細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的ATP生成。葡萄糖測定試劑盒、乳酸測試盒測定MCF-7-M細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的葡萄糖消耗和乳酸分泌情況。蛋白印跡法分析在PI3K抑制劑和AKT抑制劑預(yù)處理前后,M-CSF對MCF-7細(xì)胞的糖酵解關(guān)鍵酶HK2和PKM2,葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體GLUT-1表達(dá)的影響。MTT法觀察在ATP消耗劑預(yù)處理前后,MCF-7和MCF-7-M細(xì)胞對5-FU敏感性的變化情況。結(jié)果:ATP檢測分析顯示:MCF-7-M細(xì)胞的ATP水平顯著高于MCF-7細(xì)胞(p0.05),糖酵解抑制劑2-DG降低MCF-7細(xì)胞(p0.05)和MCF-7-M細(xì)胞的(p0.01)ATP水平,與MCF-7細(xì)胞比較,2-DG降低MCF-7-M細(xì)胞ATP的效應(yīng)更明顯。氧化磷酸化抑制劑OLIG和溶媒分別對MCF-7細(xì)胞和MCF-7-M細(xì)胞的ATP水平影響均不明顯(p0.05)。葡萄糖攝取和乳酸分泌實(shí)驗(yàn)顯示:MCF-7-M細(xì)胞的糖攝取能力顯著高于MCF-7細(xì)胞(p0.01),MCF-7-M細(xì)胞乳酸分泌含量分別顯著高于對應(yīng)的MCF-7細(xì)胞(p0.01);經(jīng)API-2處理后,MCF-7細(xì)胞(p0.05)和MCF-7-M細(xì)胞(p0.01)葡萄糖消耗均降低,乳酸分泌量均顯著減少(p0.01)。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)顯示:MCF-7-M細(xì)胞GLUT-1(p0.05)、HK2(p0.05)和PAM2(p0.01)的表達(dá)顯著高于MCF-7細(xì)胞;LY294002或API-2均可抑制MCF-7-M細(xì)胞GLUT-1的表達(dá)(p0.05)。MTT實(shí)驗(yàn)顯示:用3-Br PA預(yù)處理,MCF-7-M細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞對5-FU的藥物敏感性顯著增強(qiáng)(p0.01)。結(jié)論:胞質(zhì)M-CSF通過誘導(dǎo)GLUT-1、HK2和PKM2的蛋白表達(dá),活化MCF-7細(xì)胞糖酵解途徑,PI3K/AKT信號通路參與胞質(zhì)M-CSF活化MCF-7細(xì)胞糖酵解途徑。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of macrophage colony stimulating factor (M-CSF) on glucose metabolism of human breast cancer MCF-7 cells and its mechanism.Methods: the cytoplasmic stable transfected MCF-7 cells MCF-7-M were constructed by laboratory.MCF-7-M cells were cultured routinely. The ATP production of MCF-7-M cells and MCF-7 cells was detected by MCF-7 assay kit.Glucose consumption and lactate secretion in MCF-7-M and MCF-7 cells were measured by glucose assay kit and lactate test kit.Effects of M-CSF on the expression of HK2 and PKM2 in MCF-7 cells before and after pretreatment with PI3K inhibitor and AKT inhibitor, and GLUT-1 expression of glucose transporter. MTT assay was used to observe the effect of MCF7 and MCF-7-M cells on 5-FU before and after pretreatment with ATP expensor.A change in sensitivity.Results the level of ATP in MCF-7-M cells was significantly higher than that in MCF-7 cells. The glycolytic inhibitor 2-DG decreased the level of p0.05 in MCF-7 cells and MCF-7-M cells. Compared with MCF-7 cells, 2-DG decreased the ATP level of MCF-7-M cells more significantly than that of MCF-7 cells.The effects of oxidative phosphorylation inhibitor OLIG and solute on the ATP level of MCF-7 cells and MCF-7-M cells were not significant (P 0.05).The glucose uptake and lactate secretion of MCF-7-M cells were significantly higher than those of MCF-7 cells, the lactate secretion levels of MCF-7-M cells were significantly higher than those of MCF-7 cells, and the glucose consumption of MCF-7 cells and MCF-7-M cells were decreased after API-2 treatment.The secretion of lactic acid decreased significantly (P 0.01).Conclusion: cytoplasmic M-CSF induces the expression of GLUT-1 hk2 and PKM2, and activates the glycolysis pathway of MCF-7 cells via PI3K / AKT signaling pathway, which is involved in the activation of glycolysis pathway of MCF-7 cells by cytoplasmic M-CSF.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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本文編號：1701000