本文選題：芹菜素　切入點：非小細(xì)胞肺癌　出處：《廣東藥科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：首先,采用MTT法研究了芹菜素、順鉑單獨和聯(lián)用對六種人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549、SPC-A-1、H1299、H1650、LTEP-a2、H460)的增殖抑制作用,結(jié)果表明,芹菜素對于A549、H460、H1650、H1299、SPC-A-1、LTEP-a2細(xì)胞作用不同時間(24 h、48 h、72 h),其IC50分別是55.17、34.58、26.41μM,47.37、33.28、23.94μM,67.72、34.11、22.87μM,130.98、50.07、34.36μM,125.25、55.11、28.00μM,60.26、37.19、20.85μM,說明其具有較好的抗非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的作用,且呈一定的劑量和時間依賴性;與順鉑單獨作用肺癌細(xì)胞相比,芹菜素與順鉑聯(lián)用具有很好的協(xié)同增敏效果。其次,采用細(xì)胞計數(shù)法、平板克隆形成實驗、Hoechst 33258染色、流式細(xì)胞術(shù)等方法分別檢測芹菜素作用后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H460細(xì)胞增殖、凋亡和周期分布等的變化。細(xì)胞計數(shù)結(jié)果表明,用不同濃度(0、20、40、80μM)的芹菜素孵育肺癌細(xì)胞H460不同時間(24、48、72 h)后,細(xì)胞增殖抑制作用與作用劑量和作用時間呈正相關(guān);同樣,體外細(xì)胞克隆形成實驗結(jié)果顯示細(xì)胞集落形成數(shù)與作用劑量呈負(fù)相關(guān)。熒光染色結(jié)果顯示,與陰性對照組(Control)相比,不同濃度的芹菜素(20、40、80μM)分別作用H460細(xì)胞株不同時間(6 h和12 h)后,明場下觀察細(xì)胞會出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化,如出現(xiàn)皺縮的細(xì)胞核,邊緣不清晰的細(xì)胞膜,甚至出現(xiàn)破碎的細(xì)胞核。在倒置熒光顯微鏡紫外波段的激發(fā)光下觀察,腫瘤細(xì)胞染成藍(lán)色,活細(xì)胞染色較淺,死細(xì)胞染色較深。隨著芹菜素作用濃度增加和作用時間的延長,H460細(xì)胞染色逐漸加深,細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,凋亡小體數(shù)量增加。AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測芹菜素作用H460細(xì)胞凋亡率的影響,可發(fā)現(xiàn)H460細(xì)胞隨著芹菜素作用濃度和作用時間增加而出現(xiàn)更多的凋亡細(xì)胞。細(xì)胞周期檢測結(jié)果表明,H460細(xì)胞大部分處于G0/G1期。與Control組相比,隨著芹菜素的濃度增加,細(xì)胞在G2/M期的數(shù)量增加,和芹菜素的劑量和時間呈一定的依賴性,說明芹菜素能通過阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程,從而影響H460細(xì)胞的增殖。最后,初步探究芹菜素協(xié)同增敏順鉑抗非小細(xì)胞肺癌的作用機(jī)制。采用western blot和qRT-PCR實驗方法檢測不同濃度(0、20、40、80μM)的芹菜素孵育H460細(xì)胞株24 h,從蛋白和mRNA表達(dá)水平變化等方面檢測Nrf2、ARE抗氧化反應(yīng)的元件(NQO1、HO-1、GSTA1)表達(dá)的變化(相對于骨架蛋白β-actin、骨架基因GAPDH)。此外,選取叔丁基對苯二酚(tert-butyl hydroquinone,t-BHQ)作為Nrf2的激動劑,增加t-BHQ 50μM,芹菜素40μM+t-BHQ 50μM兩組作用H460細(xì)胞株24 h。結(jié)果表明,芹菜素能下調(diào)H460細(xì)胞中Nrf2、NQO1、HO-1、GSTA1蛋白和mRNA的表達(dá),且與作用劑量呈正相關(guān)。與Control組相比,t-BHQ 50μM組的Nrf2蛋白和mRNA表達(dá)上調(diào),且差異有顯著性(p0.05),其他的蛋白上調(diào)作用不明顯,沒有顯著性差異,但是誘導(dǎo)了mRNA的表達(dá)。與t-BHQ 50μM組相比,芹菜素40μM+t-BHQ 50μM組的Nrf2的蛋白和基因表達(dá)明顯下調(diào)。與芹菜素40μM組相比,芹菜素40μM+t-BHQ 50μM組Nrf2的蛋白和基因表達(dá)有些上調(diào),說明t-BHQ能逆轉(zhuǎn)芹菜素抑制Nrf2表達(dá)的作用。但是Nrf2下游的分子可能受多個核因子調(diào)控,故表現(xiàn)出不太一致或者趨勢不明顯的結(jié)果。以上結(jié)果說明芹菜素具有下調(diào)Nrf2表達(dá)的作用,其可能與芹菜素協(xié)同增敏順鉑抗非小細(xì)胞肺癌作用有關(guān)。綜上所述,芹菜素具有抗肺癌細(xì)胞增殖的作用,并能阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。小劑量的芹菜素還具有協(xié)同增敏順鉑抗肺癌作用,其可能與抑制Nrf2-ARE信號通路有關(guān)。本論文旨在研究芹菜素與順鉑化療藥物聯(lián)用協(xié)同增強(qiáng)藥物治療效果,為肺癌的聯(lián)合治療提供新的方法。
[Abstract]:The effects of apigenin and cisplatin on proliferation , apoptosis and cycle distribution of human non - small cell lung cancer cell lines A549 , SPC - A - 1 , 1299 , H1650 , LTE2 , H460 were studied by MTT assay . H460 cells were mostly in G0 / G1 phase . As the concentration of apigenin increased , the number of cells in G2 / M phase increased , and the dose and time of apigenin increased , suggesting that apigenin could inhibit the proliferation of H460 cells by blocking cell cycle progression . Compared with control group , the expression of Nrf2 , NQO1 , HO - 1 , GSTA1 protein and mRNA in 50 渭M of apigenin decreased significantly . The results showed that apigenin could decrease the expression of Nrf2 , NQO1 , HO - 1 , GSTA1 and Nrf2 in the 50 渭M group .

【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1695778