發(fā)布時間：2018-04-01 12:15

  本文選題：腎癌　切入點：G250單克隆抗體　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：腎癌(renal cell carcinoma,RCC)的診斷和治療仍存在亟待解決的難題。超聲微泡作為超聲造影劑,不僅可使組織增強(qiáng)顯影,還可作為靶向給藥的載體,在超聲輻照下能定向釋放藥物,具有診斷和治療雙重功效,為解決RCC診治面臨的困難提供了可能。我們前期已制備了能穿過腫瘤血管進(jìn)入組織間隙的納米微泡(nanobubble,NB),證實其可增強(qiáng)組織顯影,并可攜載藥物和治療基因。在此基礎(chǔ)上,本研究擬制備靶向于RCC的納米級超聲微泡,通過在微泡上連接針對RCC相關(guān)抗原G250的單克隆抗體(McAb)實現(xiàn)微泡的靶向性,驗證超聲輻照下腫瘤組織特異性增強(qiáng)顯影效果,為RCC的診斷和靶向治療提供新方法。本研究分為三部分。第一部分空白納米微泡和靶向納米微泡的制備目的制備穩(wěn)定的空白納米微泡及靶向納米微泡,為體內(nèi)外實驗研究奠定基礎(chǔ)方法應(yīng)用機(jī)械振蕩法制備空白脂質(zhì)納米微泡,生物素-親和素連接技術(shù)將G250單克隆抗體連接于空白納米微泡表面從而制備成靶向納米微泡,采用免疫熒光技術(shù)驗證靶向納米微泡是否構(gòu)建成功;采用血球計數(shù)儀和馬爾文激光粒徑儀測量兩種微泡制備后的1、3、5、10天的濃度及粒徑大小變化情況。結(jié)果成功制備空白納米微泡,在此基礎(chǔ)上制備了靶向納米微泡,免疫熒光技術(shù)證實G250 McAb與納米微泡連接緊密。制備的納米微泡在5天之內(nèi)可以保持性狀的穩(wěn)定。第二部分驗證靶向納米微泡對RCC細(xì)胞尋靶能力的體外實驗?zāi)康尿炞C攜載G250單克隆抗體的靶向納米微泡是否具有特異性的尋靶能力。方法細(xì)胞免疫熒光技術(shù)鑒定786-O和ACHN兩種RCC細(xì)胞G250抗原表達(dá)情況;靶向細(xì)胞結(jié)合實驗驗證兩種納米微泡對兩種細(xì)胞的特異性結(jié)合能力。結(jié)果攜載G250單克隆抗體的靶向納米微泡能夠特異性地和G250抗原表達(dá)陽性的786-O細(xì)胞結(jié)合,不能與G250抗原表達(dá)陰性的ACHN細(xì)胞結(jié)合;空白納米微泡與兩種RCC細(xì)胞均未結(jié)合。第三部分靶向納米微泡增強(qiáng)RCC裸鼠移植瘤超聲顯影的體內(nèi)實驗?zāi)康某曒椪諆煞NRCC裸鼠移植瘤,觀察靶向納米微泡增強(qiáng)RCC移植瘤超聲顯影的能力。方法8只BLBA/c裸鼠分為兩組,每組四只,一組裸鼠皮下種植786-O細(xì)胞,另外一組裸鼠種植ACHN細(xì)胞。待裸鼠成瘤大小約為1cm時,行超聲造影實驗。用iu22超聲診斷儀和50mm超寬頻線陣探頭IL12-5在B型模式下尋找最大腫瘤切面并且固定探頭,將1.0x107的空白納米微泡從尾靜脈注射入體內(nèi),采集圖像信息;然后用超純水沖洗血管殘留微泡,將1.0x107靶向納米微泡注入裸鼠尾靜脈,再次采集圖像信息。圖像信息數(shù)據(jù)由QLab 8.1軟件處理分析。結(jié)果體內(nèi)超聲顯像從平均值和最大值分析,靶向納米微泡和空白微泡在786-O裸鼠模型的顯影效果存在顯著差異[超聲均值:(11.74±0.52)vs(16.34±0.40),P=0.001;超聲最大值:(13.07±0.94)vs(18.09±0.82),P=0.003];在ACHN裸鼠模型中,靶向納米微泡和空白納米微泡的數(shù)據(jù)均無統(tǒng)計學(xué)差異[超聲均值9.01±0.99 vs 9.82±0.67(P=0.204);超聲最大值13.04±0.42 vs 13.05±0.30(P=0.866)]。結(jié)論本研究成功制備了攜載G250單克隆抗體的靶向納米微泡,證實其在體外能夠特異性地結(jié)合G250表達(dá)陽性的RCC細(xì)胞,在動物體內(nèi)能夠顯著增強(qiáng)RCC移植瘤的超聲顯像效果。
[Abstract]:A nanobubble capable of targeting to RCC was prepared by means of immunofluorometric technique . The results showed that the targeted nanovesicles carrying the G250 monoclonal antibody were successfully prepared in vitro , and the results showed that the targeted nanovesicles carrying the G250 monoclonal antibody were successfully prepared in vitro .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

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本文編號：1695529