發(fā)布時間：2018-04-01 04:47

  本文選題：Ishikawa細胞系　切入點：裸鼠　出處：《青島大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1.建立子宮內膜癌(Endometrial carcinoma,EC)裸鼠移植瘤模型;2.探討應用小干擾RNA(small interference RNA,siRNA)沉默CXCR4和/或CXCR7基因表達后對EC裸鼠移植瘤生長的影響及其可能機制。方法:1.將Ishikawa細胞懸液(腫瘤細胞濃度為5×107/ml)移植到SPF級雌性裸小鼠肩胛背部皮下建立EC裸鼠移植瘤模型,每只裸鼠注射所用Ishikawa細胞懸液體積均為0.2 ml。2.設計并合成化學修飾(2’Ome+5’Chol)的CXCR4-siRNA、CXCR7-siRNA和Negative-siRNA;當移植瘤的最大直徑為5~7 mm時,將全部載瘤裸鼠隨機分成如下五組(每組6只):CXCR4-siRNA治療組、CXCR7-siRNA治療組、CXCR4-siRNA+CXCR7-siRNA聯合治療組、Negative-siRNA陰性對照組以及生理鹽水對照組,對各實驗組每只裸鼠的皮下移植瘤體內給予注射CXCR4-siRNA和/或CXCR7-siRNA、Negative-siRNA或生理鹽水,注射液體積均為50μl,每3 d一次,共治療6次。3.實驗過程中,每日觀察所有載瘤裸鼠的生活狀況及皮下移植瘤生長情況,每3d使用游標卡尺測量各移植瘤的長徑a和短徑b,按照公式(V=a×b2/2,mm3)計算移植瘤體積大小,并繪制各實驗組移植瘤體積生長變化曲線。4.6個治療周期結束后,脫頸處死所有荷瘤裸鼠,超凈工作臺上完整剝離所有移植瘤,游標卡尺和電子稱分別測得各移植瘤的長、短徑(mm)和瘤體質量(g),并計算抑瘤率(%)。5.采用SYBR GREEN實時熒光定量RT-PCR、Western Blotting以及免疫組織化學技術檢測各移植瘤中CXCR4、CXCR7的mRNA或蛋白表達水平,以驗證CXCR4-siRNA與CXCR7-siRNA對相應基因的沉默效果;并采用PCNA染色法和TUNEL法檢測各實驗組移植瘤組織中EC細胞增殖能力和凋亡水平的差異。結果:1.采用Ishikawa細胞懸液接種法成功建立了EC裸鼠皮下移植瘤模型。2.CXCR4-siRNA與CXCR7-siRNA單獨或聯合治療均可顯著抑制EC裸鼠移植瘤的生長,3個治療組的移植瘤體積和體質量的生長速度均明顯小于2個對照組(P0.01);相比于生理鹽水對照組,CXCR4-siRNA治療組、CXCR7-siRNA治療組、CXCR4+CXCR7-siRNA聯合治療組的抑瘤率分別為58.77%、56.61%和55.85%,而陰性對照組的抑瘤率僅為9.24%,并且2個對照組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.實時熒光定量RT-PCR、Western Blotting以及免疫組織化學技術檢測結果分析均得出:移植瘤體內直接注射2’Ome+5’Chol修飾的CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA可明顯下調移植瘤組織中相應基因mRNA與蛋白的表達(P0.01)。4.PCNA染色法檢測分析顯示:移植瘤體內單獨或聯合注射CXCR4-siRNA與CXCR7-siRNA后,EC細胞增殖能力均顯著下降(P0.01),但3個治療組中腫瘤細胞的增殖抑制效果相當(P0.05),即CXCR4與CXCR7二者聯合沉默不能產生更的增殖抑制效應;而TUNEL法凋亡檢測結果提示各實驗組移植瘤中EC細胞凋亡率的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:采用siRNA靶向沉默CXCR4和/或CXCR7基因表達后,子宮內膜癌Ishikawa細胞裸鼠移植瘤的生長速度明顯減緩,可以顯著抑制EC細胞的增殖能力。實驗結果提示CXCR4與CXCR7在EC發(fā)生發(fā)展過程中起著極其重要的作用,有望成為EC基因治療的新靶點。
[Abstract]:Objective : 1 . To establish a model of transplanted tumor of nude mice with endometrial carcinoma ( EC ) in nude mice . The effects of CXCR4 - siRNA , CXCR4 - siRNA and negative - siRNA on the growth of transplanted tumor in nude mice were studied by using SYBR green real - time fluorescence quantitative RT - PCR , Western Blotting and immunohistochemistry . The results showed that the growth rate of tumor cells in the transplanted tumor cells was significantly lower than that in the control group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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本文編號：1694050