本文選題：急性髓細(xì)胞白血病　切入點(diǎn)：PRDM16　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：研究背景:急性髓細(xì)胞白血病是成人急性白血病的常見(jiàn)形式,約占兒童急性白血病的15~20%,發(fā)病率隨著年齡增加而升高;進(jìn)展迅速,致死率高。急性髓細(xì)胞白血病(AML)是一種未成熟髓系細(xì)胞的惡性克隆性增殖性、遺傳學(xué)異質(zhì)性疾病,發(fā)生于骨髓、外周血以及偶見(jiàn)于其他組織。主要特征是快速生長(zhǎng)的異常白細(xì)胞集聚于骨髓并擾亂了正常血液細(xì)胞的生成。盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多白血病的發(fā)病危險(xiǎn)因素和染色體異常以及基因突變,但是白血病的特異性病因跟其他癌癥一樣仍然未知。遺傳學(xué)上反復(fù)發(fā)生的染色質(zhì)異常和基因突變、表觀遺傳學(xué)調(diào)控(如DNA甲基化、組蛋白修飾和microRNA)等均被認(rèn)為是AML發(fā)病的重要機(jī)制。隨著白血病機(jī)制研究的深入,很多研究證實(shí)蛋白質(zhì)翻譯后修飾在白血病的發(fā)生過(guò)程中呈現(xiàn)出多樣而重要作用。近年來(lái)的大量研究深入揭示了SUMO化修飾過(guò)程積極廣泛參與了白血病的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的過(guò)程。已有很多研究表明PRDM16是一個(gè)非常重要的轉(zhuǎn)錄輔助因子和聯(lián)系上下游的一個(gè)重要節(jié)點(diǎn)基因,對(duì)于很多種類(lèi)細(xì)胞的干性維持和分化導(dǎo)向具有重要作用,值得關(guān)注的是PRDM16與造血系統(tǒng)及白血病有多種多樣的相關(guān)性。然而sPRDM16及SUMO化修飾的sPRDM16對(duì)于急性髓細(xì)胞白血病發(fā)生發(fā)展的作用和機(jī)制仍未可知。研究目的:1.探索sPRDM16在急性髓細(xì)胞白血病中的生物學(xué)作用;2.研究sPRDM16的SUMO化修飾對(duì)于其促腫瘤活性的作用及機(jī)制;3.小鼠人急性髓細(xì)胞白血病模型體內(nèi)驗(yàn)證SUMO化的sPRDM16對(duì)于白血病的促進(jìn)作用。4.sPRDM16的SUMO化修飾對(duì)于急性髓細(xì)胞白血病下游分化相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控。研究方法:1.通過(guò)外源性轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及蛋白質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證sPRDM16的SUMO化修飾及de-sumo化修飾;通過(guò)點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)構(gòu)建sprdm16-k568r的基因序列2.通過(guò)腫瘤研究相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究sprdm16的促腫瘤活性:通過(guò)增殖實(shí)驗(yàn)研究sprdm16的sumo化修飾對(duì)白血病細(xì)胞的增殖作用;通過(guò)體外軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn),研究sprdm16的sumo化修飾的對(duì)非錨定性生長(zhǎng)的白血病細(xì)胞腫瘤克隆形成能力;通過(guò)體外pma誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)探索sprdm16的sumo化修飾對(duì)急性白血病分化能力的影響。3.通過(guò)小鼠人急性髓細(xì)胞白血病動(dòng)物移植模型實(shí)驗(yàn)研究探索sprdm16的sumo化修飾在體內(nèi)的生物學(xué)作用。4.通過(guò)rna-sequence測(cè)序,大規(guī)模尋找sprdm16的sumo話(huà)修飾影響的下游分化相關(guān)基因和信號(hào)通路。5.通過(guò)quantitivereal-timepcr驗(yàn)證測(cè)序找到的靶基因,證明sprdm16的sumo化修飾對(duì)下游基因的影響。研究結(jié)果:1.在體外,sprdm16、prdm16可以發(fā)生sumo化修飾,prdomain并不會(huì)影響其發(fā)生sumo化修飾;sprdm16的k568位是sumo修飾位點(diǎn);senp1介導(dǎo)了sprdm16的de-sumo化。2.sprdm16對(duì)于人急性髓細(xì)胞白血病具有明顯的促腫瘤活性,提高其增殖能力,促進(jìn)其克隆形成,并抑制了腫瘤分化的傾向。3.sumo化修飾對(duì)于sprdm16的促腫瘤活性是不可或缺的,不能發(fā)生sumo化修飾的sprdm16-k568r克隆形成能力降低,部分回復(fù)了腫瘤被誘導(dǎo)分化能力。4.sprdm16-k568r在體外似乎使腫瘤獲得更快的增殖速度,sumo化修飾對(duì)于sprdm16的促腫瘤增殖速度具有某種程度的影響,可能為多種機(jī)制的合力結(jié)果。5.sprdm16的sumo化修飾在小鼠移植人急性髓細(xì)胞白血病模型具有重要影響,sumo化的sprdm16使白血病細(xì)胞的移植后生長(zhǎng)更快,伴隨體重降低及血紅蛋白降低程度更甚,極可能與分化能力降低有關(guān)系。6.sprdm16-wild和sprdm16-k568r在體外pma誘導(dǎo)分化過(guò)程中影響了一系列分化相關(guān)基因,如klf10、lif、bcl3、hdac9、ccl5、il6r、numb等。本文的主要結(jié)論:sprdm16在急性髓細(xì)胞白血病的發(fā)生中具有明顯的促腫瘤活性,而sumo化修飾在其影響急性髓細(xì)胞白血病的過(guò)程中具有不可或缺的正性促進(jìn)作用。體外和體內(nèi)的一系列研究都證明sPRDM16的SUMO化修飾從多個(gè)方面影響著急性髓細(xì)胞白血病的生物學(xué)表型。我們進(jìn)一步通過(guò)mRNA測(cè)序?qū)ふ也⒆C實(shí)了SUMO化修飾的sPRDM16影響多個(gè)下游分化相關(guān)基因KLF10、LIF、BCL3、HDAC9、CCL5、IL6R、NUMB等,這也表明sPRDM16的SUMO化修飾參與分化過(guò)程可能影響了多個(gè)信號(hào)通路。
[Abstract]:Abstract : Acute myeloid leukemia is a common form of acute leukemia in adults , which accounts for 15 - 20 % of acute leukemia in children , and the incidence of acute myeloid leukemia ( AML ) is an important mechanism in the pathogenesis of acute myeloid leukemia . In vitro and in vivo studies have shown that the SUMO modification of sPRDM16 affects the biological phenotype of acute myeloid leukemia .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R733.71

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本文編號(hào)：1675472