本文選題：肺腺癌　切入點(diǎn)：組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景和目的目前,肺癌是我國(guó)最常見(jiàn)且死亡率最高的惡性腫瘤之一,并且發(fā)病率仍呈上升趨勢(shì)。根據(jù)肺癌的病理特征,有非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)兩大類(lèi),目前NSCLC占確診肺癌病例的75%-80%;NSCLC又可細(xì)分為鱗癌、腺癌、腺鱗癌及大細(xì)胞癌等病理類(lèi)型,其中肺腺癌約占NSCLC的50%。目前,肺癌已被廣泛認(rèn)為是一種全身性的疾病,雖然手術(shù)治療在早中期肺腺癌治療方案選擇上處于不可撼動(dòng)的地位,但是多學(xué)科的綜合治療越來(lái)越受重視。因此,深入研究肺腺癌的發(fā)病機(jī)理,篩選鑒定病理演進(jìn)過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)和關(guān)鍵分子,研發(fā)具有臨床治療價(jià)值的新型靶向藥物以改善患者的預(yù)后具有重要的科學(xué)和臨床價(jià)值。研究證實(shí),表觀遺傳調(diào)控異常與原癌基因的激活、抑癌基因表達(dá)的缺失高度相關(guān),且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用,其中組蛋白甲基化修飾是細(xì)胞調(diào)控基因表達(dá)的重要途徑之一,參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。組蛋白甲基化是一個(gè)可逆的動(dòng)態(tài)修飾過(guò)程,由特異的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去甲基酶協(xié)調(diào)完成。組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a屬于SET域家族,催化組蛋白H3K9的單甲基化和二甲基化,其在肝癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等多種腫瘤中有異常表達(dá)現(xiàn)象,可使腫瘤發(fā)生惡性進(jìn)展導(dǎo)致預(yù)后不良。本研究擬通過(guò)體外實(shí)驗(yàn),以人肺腺癌細(xì)胞作為疾病模型,利用小分子靶向抑制劑BIX-01294干擾G9a的甲基轉(zhuǎn)移酶活性,觀察腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖的變化和凋亡情況,同時(shí)檢測(cè)凋亡信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平的變化,G9a催化產(chǎn)物H3K9me、H3K9me2的表達(dá)水平;應(yīng)用pan Caspases抑制劑Z-VAD-FMK預(yù)處理細(xì)胞,研究BIX-01294靶向抑制G9a誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡是否是Caspase途徑依賴(lài)性的;深入探討B(tài)IX-01294抑制人肺腺癌細(xì)胞增殖的作用效應(yīng)及分子機(jī)制。方法培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞A549、H1650和H1975,MTT實(shí)驗(yàn)分析BIX-01294作用細(xì)胞24h對(duì)其生長(zhǎng)的影響,BIX-01294作用7d,集落形成實(shí)驗(yàn)分析A549、H1650和H1975細(xì)胞的增殖能力;BIX-01294作用24h,Annexin V-FITC/PI雙染法分析A549和H1975細(xì)胞凋亡率的變化;BIX-01294作用24h,Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)G9a催化產(chǎn)物H3K9me、H3K9me2和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的水平;進(jìn)一步應(yīng)用pan Caspase抑制劑Z-VAD-FMK預(yù)處理A549細(xì)胞2h,抑制內(nèi)源性Caspase的活性,研究Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)在BIX-01294誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡、及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)中的作用。結(jié)果BIX-01294呈劑量依賴(lài)關(guān)系抑制肺腺癌細(xì)胞A549、H1650和H1975的增殖,不同濃度BIX-01294(1、2.5、5和10μM)作用24h,A549細(xì)胞的存活率分別為106.3%±7.2%、81.1%±4.8%、52.9%±5.6%和 19.8%±3.6%;H1650 細(xì)胞的存活率分別為 91.2%±4.4%、78.2%±5.1%、41.6%±4.8%和 16.8%±3.5%;H1975 細(xì)胞的存活率分別為 102.4%±6.3%、73.3%±4.3%、36.4%±2.8%和 12.5%±2.4%。集落形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),BIX-01294(10μM)作用A549細(xì)胞7d,空白對(duì)照組的集落形成數(shù)為172.7±23.0,BIX-01294組為42.5±8.7,顯著抑制A549細(xì)胞集落克隆的形成(p0.05);BIX-01294(10μM)作用H1975細(xì)胞7d,空白對(duì)照組的集落形成數(shù)為205.1±42.8,BIX-01294組為35.7±6.5,顯著抑制肺腺癌細(xì)胞H1975集落克隆的形成(p0.05)。Annexin V-FITC/PI 雙染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,BIX-01294(10μM)作用24h,A549細(xì)胞的凋亡率由7.2%±3.6%上升至47.6%±8.4%,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);H1975細(xì)胞的凋亡率由8.9%±5.2%上升至62.8%±8.2%,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。BIX-01294作用24h,A549和H1975細(xì)胞中G9a催化產(chǎn)物H3K9me、H3K9me2的表達(dá)均顯著下降;線粒體凋亡途徑蛋白Bax、Bak和cleaved caspase9表達(dá)上調(diào),抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下降,凋亡執(zhí)行蛋白cleaved caspase3和cleaved PARP表達(dá)顯著上調(diào)。pan Caspase抑制劑Z-VAD-FMK預(yù)處理A549細(xì)胞,顯著抑制BIX-01294誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和cleaved caspase3和cleaved PARP蛋白的表達(dá)。結(jié)論小分子化合物BIX-01294靶向抑制組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶G9a具有抑制肺腺癌細(xì)胞增殖的作用效應(yīng),其分子機(jī)制是上調(diào)促凋亡蛋白Bax和Bak的表達(dá),凋亡抑制蛋白Bcl-2表達(dá)下降,激活線粒體凋亡途徑,進(jìn)而啟動(dòng)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
，

本文編號(hào)：1674798