發(fā)布時(shí)間：2018-03-27 15:05

  本文選題：膀胱癌　切入點(diǎn)：石蒜堿　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景膀胱癌是常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤,原發(fā)病例中75%屬于淺表性膀胱癌(TIS、Ta或T1期),浸潤性膀胱癌占了原發(fā)病例中的25%(T2-T4期)。淺表性膀胱癌的治療手段,主要包括兩種方法預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā):腔內(nèi)切割手術(shù)治療,術(shù)后膀胱灌注化療。而目前浸潤性膀胱癌的主要治療手段,選取的是膀胱根治性全切除術(shù),聯(lián)合術(shù)后輔助化療。盡管膀胱癌的治療手段五花八門多種多樣,50%-70%的淺表性腫瘤患者中,依然出現(xiàn)復(fù)發(fā)和浸潤性腫瘤向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的難題。5年生存率的數(shù)據(jù)證實(shí),浸潤性膀胱癌患者僅有14-30%。在臨床對(duì)膀胱癌的治療中,出現(xiàn)化療藥物的耐藥性,總體而言,膀胱癌的治療療效目前仍然難以令人滿意。所以,新的靶向藥物治療膀胱癌能否找到,并解決其治療膀胱癌的中出現(xiàn)耐藥性,這問題十分重要。石蒜堿是一種芐基苯乙胺類生物堿,英文名為lycorine,分子量為287.313,可從我國傳統(tǒng)中藥--石蒜中分離得到,森島庫太(日本)在1937年最早分離出來。研究表明,石蒜堿類衍生物具有抗炎、抗寄生蟲、抗瘧疾以及抗病毒作用。除此之外,還可抑制乙酰膽堿酯酶活性、心血管保護(hù)功能,抑制腫瘤細(xì)胞生長。最近還發(fā)現(xiàn)其有導(dǎo)致破骨細(xì)胞抑制生成的生物學(xué)作用。石蒜堿類衍生物在近年來,國內(nèi)外合成了多種。目前出現(xiàn)的有鹽酸石蒜堿,英文名為Lycorine hydrochloride,氧化石蒜堿,英文名為Lycobetaine,二氫石蒜堿,英文名為Dihydrolycorine,偽石蒜堿,英文名為Pseudolycorine等。雖然石蒜堿已經(jīng)在多種腫瘤中做了各種作用及機(jī)制的研究,目前石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞,尚未有較系統(tǒng)的研究。目的探討石蒜堿對(duì)人膀胱癌細(xì)胞T24及移行上皮細(xì)胞SVHUC的作用,觀察石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞與移行上皮細(xì)胞的細(xì)胞抑制作用,探索石蒜堿可能的作用機(jī)制;為治療人膀胱癌尋找新的思路。方法一、石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24及移行上皮細(xì)胞SVHUC生長抑制作用的影響1.1采用MTS法檢測(cè)石蒜堿對(duì)人膀胱癌細(xì)胞T24的生長抑制率1.2 hoechst33342檢測(cè)石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24及移行上皮細(xì)胞SVHUC凋亡細(xì)胞的比例二、石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24作用機(jī)制初探2.1實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析凋亡相關(guān)通路基因轉(zhuǎn)錄水平的變化2.2 Western-blot分析凋亡相關(guān)通路蛋白的變化2.3免疫熒光檢測(cè)石蒜堿對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株T24細(xì)胞內(nèi)P-Akt和cleaved-caspase-3 表達(dá)的影響三、石蒜堿對(duì)人膀胱癌細(xì)胞T24皮下成瘤能力的影響結(jié)果1石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24生長抑制作用的影響1.1石蒜堿對(duì)T24細(xì)胞作用12h,24h,48h,72h的半數(shù)抑制濃度分別為46.9,14.7,7.5,and 3.6 uM。1.2 hoechst33342測(cè)得細(xì)胞凋亡比例:T24實(shí)驗(yàn)組(46%),T24對(duì)照組(1%),SVHUC 實(shí)驗(yàn)組(5%),SVHUC 對(duì)照組(3%)。2石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24作用機(jī)制初探2.125uM石蒜堿處理T24細(xì)胞后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),Bax基因表達(dá)下降,Bcl-2表達(dá)升高,Akt無顯著性改變。2.2不同濃度石蒜堿處理T24細(xì)胞后,Western-blot結(jié)果顯示25μmol/L及50μmol/L的石蒜堿即能上調(diào)PTEN、cleaved-caspase-3表達(dá),而下調(diào)P-Akt、caspase-3的表達(dá)。而Akt蛋白水平則變化不大。2.3免疫熒光結(jié)果顯示:PBS作用后,P-AktSer473在膀胱癌細(xì)胞T24中呈強(qiáng)熒光著色;而與DMSO組相比較,25μg/ml石蒜堿處理后,T24細(xì)胞內(nèi)熒光著色逐漸減弱。相反,cleaved-caspase-3在膀胱癌細(xì)胞T24中呈弱熒光著色;而與PBS組相比較,25μg/ml石蒜堿處理后,T24細(xì)胞內(nèi)熒光著色明顯增強(qiáng)。3石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24皮下成瘤能力的影響石蒜堿對(duì)前列腺癌細(xì)胞皮下成瘤能力的影響:與PBS對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組(5mg)及實(shí)驗(yàn)組(10mg)均能顯著抑制移植瘤的生長速度和腫瘤體積(p0.05),而實(shí)驗(yàn)組(5mg)和實(shí)驗(yàn)組(10mg)注射組組間亦有顯著性差異(p0.05)。結(jié)論1.石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24有生長抑制作用2.石蒜堿對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24有凋亡誘導(dǎo)作用。3.石蒜堿可能通過抑制P-Akt及相關(guān)信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)膀胱癌細(xì)胞T24的抗腫瘤作用。4.石蒜堿可顯著抑制膀胱癌細(xì)胞T24的皮下成瘤能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.14

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本文編號(hào)：1672029