本文選題：神經(jīng)膠質(zhì)瘤　切入點：軟骨素聚合因子　出處：《腫瘤》2017年11期

【摘要】：目的 :探討沉默軟骨素聚合因子(chondroitin polymerizing factor,CHPF)基因?qū)δX膠質(zhì)瘤U87細胞增殖及侵襲的影響,及可能的作用機制。方法 :構(gòu)建攜帶有靶向CHPF基因sh RNA(CHPF-sh RNA)的重組慢病毒并感染膠質(zhì)瘤U87細胞。采用實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測CHPF m RNA及蛋白表達水平的變化,CCK-8法檢測細胞的增殖情況,FCM法檢測細胞周期及細胞凋亡率,Transwell小室侵襲實驗檢測U87細胞侵襲能力的變化;蛋白質(zhì)印跡法檢測沉默CHPF基因表達后對單核細胞趨化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1,又稱CCL2)表達水平的影響。最后,采用脂質(zhì)體法將特異性針對CCL2基因的CCL2-si RNA轉(zhuǎn)入U87細胞,用蛋白質(zhì)印跡法檢測對CHPF蛋白表達的影響。結(jié)果 :實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果表明,感染CHPF-sh RNA后U87細胞中CHPF m RNA和蛋白的表達水平均明顯被抑制(P值均0.05),成功建立了穩(wěn)定沉默CHPF基因表達的U87細胞。與空白對照組及陰性對照組比較,CHPF-sh RNA感染組細胞的增殖速度明顯下降,細胞周期阻滯在G0/G1期,凋亡率明顯增高(P值均0.05);CHPF-sh RNA感染組U87細胞,穿過小室膜的細胞數(shù)明顯減少,侵襲能力下降(P0.05);CHPF-sh RNA感染組U87細胞中CCL2的表達水平明顯下調(diào)(P0.05)。沉默CCL2基因表達后,U87細胞中CHPF m RNA的表達水平無明顯變化(P0.05)。結(jié)論:下調(diào)CHPF基因表達后,可能通過調(diào)控CCL2抑制腦膠質(zhì)瘤細胞的增殖及侵襲能力,并促進細胞凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of silencing chondroitin polymerizing factor-CHPF1 gene on the proliferation and invasion of glioma U87 cells. Methods: recombinant lentivirus carrying target CHPF gene sh RNA(CHPF-sh RNAs was constructed and infected with glioma U87 cells. The expression of CHPF m RNA and protein was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting. The cell cycle and apoptosis rate were detected by FCM and the invasion ability of U87 cells was detected by Transwell chamber invasion assay. The effect of silencing CHPF gene expression on the expression of monocyte chemoattractant protein 1(monoeyte chemoattractant protein 1 (also known as CCL2) was detected by Western blot. Finally, the specific CCL2-si RNA targeting CCL2 gene was transfected into U87 cells by liposome method. Results: Real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot were used to detect the expression of CHPF protein. The expression levels of CHPF m RNA and protein in U87 cells after infection with CHPF-sh RNA were significantly inhibited (P = 0.05). U87 cells with stable silence of CHPF gene expression were successfully established. Compared with control group and negative control group, U87 cells infected with CHPF-sh RNA were successfully established. The rate of proliferation decreased significantly, The cell cycle was blocked in G0/G1 phase, the apoptosis rate was significantly increased (P = 0.05) and the number of cells passing through the ventricular membrane decreased significantly in the U87 cells infected with CHPF-sh RNA. The expression level of CCL2 in U87 cells was significantly down-regulated by P0.05 RNA infection, but the expression level of CHPF m RNA in U87 cells did not change after CCL2 gene expression was silenced. Conclusion: after down-regulating CHPF gene expression, the expression of CHPF m RNA in U87 cells was significantly decreased. CCL2 may inhibit the proliferation and invasion of glioma cells and promote apoptosis.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科;撫州市第一人民醫(yī)院神經(jīng)外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(編號:81760446) 江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究資助項目(編號:GJJ160253,GJJ160166)~~
【分類號】：R739.41

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本文編號：1655331