本文選題：血腦屏障模型　切入點：小鼠　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對小鼠體外血腦屏障模型功能的影響[目的]建立體外血腦屏障模型 (blood-brain barrier model, BBBM),觀察非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC) A549細(xì)胞對其功能的影響。[方法]早上將周細(xì)胞(pericytes, PC)接種到Transwell膜下表面,星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocytes, AS)接種到12孔板內(nèi),8h后將Transwell置入12孔板內(nèi),再將小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)接種到transwell膜上表面,建立血腦屏障模型。模型建立后每天進(jìn)行試漏試驗及跨內(nèi)皮電阻(transendothelial electrical resistance,TEER)測定,鑒定是否成模。成模后分為對照組與實驗組,將A549細(xì)胞接種到實驗組BBBM內(nèi)室,共培養(yǎng)體系置于培養(yǎng)箱,分別于24h、48h、72h后進(jìn)行電阻測定及辣根過氧化物酶滲透試驗,以評估BBBM的功能。分別于滲透試驗進(jìn)行至2小時、6小時時取樣,根據(jù)樣本中辣根過氧化酶濃度計算表觀滲透系數(shù)(apparent permeability coefficient,Papp)。[結(jié)果]1.部分血腦屏障模型在建立后3天成模,4天可全部成模。2. A549細(xì)胞加入BBBM內(nèi)室共培養(yǎng),(1)實驗組TEER值與對照組比較:1天后無顯著變化(p0.05) ; 2天后降低出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05) ; 3天后降低具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(p0. 01) ; (2)滲透試驗與對照組比較:1天后,2h及6h滲透試驗實驗組Papp均降低,但無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05) ; 2天后實驗組Papp升高,2h滲透試驗差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05) ,6h滲透試驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05) ; 3天后實驗組Papp升高,2h及6h滲透試驗均具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(p0. 01)。[結(jié)論]小鼠體外血腦屏障模型的功能可被人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞影響。體外共培養(yǎng)體系可用于研究肺癌腦轉(zhuǎn)移過程中腫瘤細(xì)胞與腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞間相互作用的分子機制。第二部分人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞epsin1、ZO-1表達(dá)的影響[目的] :觀察A549人類非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)細(xì)胞對 bEnd.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)epsin1及zo-1表達(dá)的影響。[方法]:將小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞接種到75cm2斜頸培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)4天,BMEC融合為單層并充分形成緊密連接后,隨機分為bEnd.3 單獨培養(yǎng)組、bEnd.3+人支氣管上皮細(xì)胞(human bronchial epithelial cell,HBEC)共培養(yǎng)組、bEnd.3+A549 共培養(yǎng)組,bEnd.3+HBEC 共培養(yǎng)組、bEnd.3+A549共培養(yǎng)組分別加入HBEC和人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549細(xì)胞)進(jìn)行共培養(yǎng),共培養(yǎng)48h后,以抗小鼠內(nèi)皮細(xì)胞選擇性粘附分子(endothelial cell-selective adhesion molecule,ESAM)作為分選抗體,采用流式細(xì)胞技術(shù)分選出bEnd.3,將分選出來的bEnd.3接種到12孔板內(nèi)培養(yǎng),動態(tài)觀察細(xì)胞生長狀況,分別于培養(yǎng)12h、36h及4d時DAPI染色計數(shù)單位面積(每400倍視野)內(nèi)細(xì)胞數(shù),評估細(xì)胞增殖速度;培養(yǎng)12h時進(jìn)行epsin1免疫熒光染色觀察epsin1表達(dá)情況及細(xì)胞形態(tài)、大小;培養(yǎng)4d時bEnd.3再次融合為單層后進(jìn)行epsin1和ZO-1免疫熒光染色,觀察epsin1和Z0-1表達(dá)情況。[結(jié)果]:1.在bEnd.3、HBEC、NSCLC這三種細(xì)胞中anti-mouse ESAM對bEnd.3具有特異性,作為抗體分選bEnd.3純度bEnd.3+HBEC組平均為96.86%, bEnd.3+A549組平均為96.36%,兩組間比較純度無統(tǒng)計學(xué)差異。2. bEnd.3經(jīng)共培養(yǎng)、分選后細(xì)胞活力好,細(xì)胞增殖速度bEnd.3單獨培養(yǎng)組與bEnd.3+HBEC組比較無顯著差異,bEnd.3+A549組經(jīng)共培養(yǎng)及分選后細(xì)胞收縮變圓,與另外兩組相比細(xì)胞增殖速度明顯增快。3. epsin1表達(dá)bEnd.3單獨培養(yǎng)組與bEnd.3+HBEC組比較無顯著差異(P0.05 ),bEnd.3+A549組增強,與另外兩組比較差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。組內(nèi)兩個時間點進(jìn)行比較,三組均有統(tǒng)計學(xué)差異,提示bEnd.3處于增殖狀態(tài)時epsin1表達(dá)較功能狀態(tài)時增強。4. Z0-1免疫熒光染色bEnd.3單獨培養(yǎng)組和bEnd.3+HBEC組,熒光呈致密條帶狀位于相鄰細(xì)胞間,互相連接形成網(wǎng)格狀,而bEnd.3+A549組熒光條帶疏松、增寬,并可見位于胞質(zhì)內(nèi)的熒光。[結(jié)論]:人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞與小鼠BMEC共培養(yǎng)可使BMEC形態(tài)和分子表達(dá)發(fā)生變化,細(xì)胞收縮變圓,epsin1上調(diào),ZO-1異位表達(dá)于細(xì)胞內(nèi),這些改變可能與NSCLC細(xì)胞侵襲穿透BBB及轉(zhuǎn)移瘤血管生成相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 ;The 150 most important questions in cancer research and clinical oncology series:questions 6 14[J];Chinese Journal of Cancer;2017年03期

2 蔣軍;魏偉宏;馮彥林;周育超;羅偉軍;袁建偉;張國儀;呂志倩;;~(99)mTc-DTPA斷層顯像在全腦放療血腦屏障通透性研究中的應(yīng)用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年02期

3 謝英,葉麗亞,張小濱,侯新樸,婁晉寧;血腦屏障體外實驗?zāi)Ｐ偷慕J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年04期

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本文編號：1589581