發(fā)布時(shí)間：2018-03-08 14:26

  本文選題：基因　切入點(diǎn)：BMI1P1　出處：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:一,假基因臨床研究B細(xì)胞特異性莫尼氏鼠白血病病毒插入點(diǎn)1基因1(BMI1P1)是干細(xì)胞基因BMI1的假基因之一,研究假基因BMI1P1在急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表達(dá)態(tài)勢(shì)并探討其相關(guān)性以及臨床意義。二,假基因功能研究POU結(jié)構(gòu)域5類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子1B基因(POU5F1B)是干細(xì)胞基因OCT4的假基因之一,探索POU5F1B在肝細(xì)胞癌(HCC)中的致病機(jī)制。方法:1.應(yīng)用RQ-PCR方法檢測(cè)36例對(duì)照和144例初診AML患者中BMI1P1假基因的轉(zhuǎn)錄本含量,并分析其臨床相關(guān)性。2.構(gòu)建POU5F1B過(guò)表達(dá)的Hep3B穩(wěn)定細(xì)胞株以及POU5F1B敲除的Hep3B細(xì)胞株,應(yīng)用RQ-PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染HCC細(xì)胞中的POU5F1B表達(dá)情況。3.進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、生存實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、凋亡實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、腫瘤球形成實(shí)驗(yàn)以及耐藥實(shí)驗(yàn),觀察POU5F1B轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖、生存、遷移、抗凋亡、自我更新能力以及耐藥性能力。4.運(yùn)用Target Scan、Miranda、DIANA以及mi RDB靶向預(yù)測(cè)程序預(yù)測(cè)可以靶向POU5F1B的mi RNA,并運(yùn)用RQ-PCR技術(shù)檢測(cè)POU5F1B轉(zhuǎn)染細(xì)胞中mi RNA的表達(dá)差異,以及運(yùn)用RQ-PCR檢測(cè)OCT4、NANOG以及MYC的表達(dá)水平,另采用Western blot技術(shù)檢測(cè)POU5F1B轉(zhuǎn)染細(xì)胞中OCT4以及MYC的表達(dá)狀況。結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,AML患者存在BMI1P1的低表達(dá),差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。通過(guò)接收者操作特征曲線(xiàn)(ROC)分析表明BMI1P1表達(dá)水平能有效鑒別AML患病組和健康對(duì)照組(AUC=0.895)。BMI1P1高表達(dá)組的原始細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于低表達(dá)組(P=0.008),高表達(dá)組化療后完全緩解率較低表達(dá)組顯著增高(P=0.023)。此外,Kaplan Meier生存分析表明,在所有AML病例以及非M3型AML病例中,與BMI1P1高表達(dá)組相比,低表達(dá)組有著較低的無(wú)病生存時(shí)間(LFS,P=0.002和P=0.01)和總體生存時(shí)間(OS,P0.001和P=0.011)。多因素分析也指示了BMI1P1的過(guò)表達(dá)可以作為所有AML病例以及非M3病例的獨(dú)立的預(yù)后影響因素(P=0.019和P=0.027)。26例初診AML患者在獲得完全緩解后BMI1P1表達(dá)水平均有所升高(P0.001)。2.POU5F1B在HCC細(xì)胞中的功能研究:(1)POU5F1B-Hep3B細(xì)胞和MockHep3B兩組細(xì)胞中,POU5F1B轉(zhuǎn)染細(xì)胞的POU5F1B表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P0.01)。(2)POU5F1B-Hep3B細(xì)胞生長(zhǎng)速度均明顯快于Mock-Hep3B細(xì)胞(P0.01);POU5F1B-Hep3B細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)不良的體外環(huán)境下的體外擴(kuò)增能力明顯高于對(duì)照組(P0.01);平板克隆形成實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了POU5F1B-Hep3B組細(xì)胞增殖能力明顯比對(duì)照強(qiáng)(P0.01);(3)POU5F1B-Hep3B細(xì)胞的遷移能力明顯高于對(duì)照組細(xì)胞(P0.01),在36h時(shí)POU5F1B-Hep3B細(xì)胞已能愈合,而對(duì)照組則沒(méi)有。(4)Mock-Hep3B細(xì)胞比POU5F1B-Hep3B細(xì)胞更易發(fā)生凋亡(P0.01)。(5)POU5F1B-Hep3B組的細(xì)胞在干細(xì)胞培養(yǎng)液中能夠聚集形成較大腫瘤球,而對(duì)照組的細(xì)胞大多散在;干細(xì)胞腫瘤球形成率在POU5F1B組明顯升高(P0.01)。(6)POU5F1B-Hep3B細(xì)胞對(duì)于化療藥阿霉素以及5-氟尿嘧啶的抵抗顯著高于對(duì)照組(P0.05);但是卻不能增加對(duì)順鉑的抵抗性。(7)在POU5F1B轉(zhuǎn)染細(xì)胞中OCT4以及MYC的表達(dá)含量均顯著高于對(duì)照組(P0.01)。(8)Target Scan,Miranda,DIANA以及mi RDB預(yù)測(cè)程序預(yù)測(cè)可以靶向POU5F1B的共同mi RNA為hsa-mi R299-3p,POU5F1B的過(guò)表達(dá)可能競(jìng)爭(zhēng)性捕獲hsa-mi R299-3p,使OCT4逃逸與mi R-299-3p等抑癌mi RNA的結(jié)合,從而使OCT4表達(dá)的增加。結(jié)論:1.假基因BMI1P1在AML中下調(diào)。假基因BMI1P1可作為生物標(biāo)志物用于檢測(cè)AML。BMI1P1可作為AML的重要預(yù)后標(biāo)志物以及療效評(píng)價(jià)的重要標(biāo)志物。2.構(gòu)建POU5F1B-Hep3B、Mock-Hep3B、si-POU5F1B-Hep3B以及si-Mock-Hep3B細(xì)胞株;3.POU5F1B能夠在體外促進(jìn)Hep3B細(xì)胞的增殖、遷移、集落形成并具有抗凋亡作用,且能夠促進(jìn)腫瘤球的形成并參與耐藥;4.POU5F1B可能充當(dāng)競(jìng)爭(zhēng)性誘餌通過(guò)捕獲mi R-299-3p等抑癌的mi RNA,使OCT4逃逸這些抑癌mi RNA的綁定,而表達(dá)增加,從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R733.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Qing Yang;Ren-Wen Zhang;Peng-Cheng Sui;Hai-Tao He;Lei Ding;;Dysregulation of non-coding RNAs in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年39期

2 Miriam J Alter;;Epidemiology of hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2007年17期

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本文編號(hào)：1584273