本文選題：穿膜肽　切入點：抗菌肽　出處：《蘭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：腫瘤是嚴重危害人類生命和生活的重大疾病之一�；熓悄壳爸委熁驕p緩腫瘤生長的主要方法。然而大多數(shù)傳統(tǒng)的小分子抗腫瘤藥物因選擇性差、毒副作用強、易引發(fā)多藥耐藥性等缺點嚴重影響了臨床療效。另一方面,大分子藥物(例如,蛋白質(zhì)或基因)相比目前的小分子抗癌藥物由于其強效和特異性而引起人們巨大的興趣。但是,這些大分子藥物的細胞內(nèi)遞送卻是一個巨大的挑戰(zhàn)。發(fā)展具有高選擇性、新的作用機制和作用靶點、不易引起多藥耐藥性的新型抗腫瘤藥物已成為迫切需要解決的問題。在這方面,藥物遞送系統(tǒng)(DDS)一直在探索之中,以解決這些藥物治療所面臨的困境。在過去幾十年中,新開發(fā)的許多生物材料由于其在各種領域具有的潛在用途而引起了人們極大的興趣,包括在醫(yī)學,生物學,化學和組織工程等領域。迄今為止,這些生物材料已經(jīng)在癌癥治療領域產(chǎn)生了顯著的影響。在抗癌藥物遞送中,以穿膜肽(CPPs)為代表的陽離子多肽因它們獨特的作用機制以及在腫瘤治療中表現(xiàn)出的巨大前景而受到廣泛關注。本論文分別以穿膜肽TAT和抗菌肽CAMEL為模板,通過對其結構進行再設計,使其能夠更加高效運輸小分子藥物CPT或基因治療藥物,并對它們在腫瘤治療中的應用進行了嘗試與探索。1.TAT-CPT共軛物的抗腫瘤活性研究。我們將穿膜肽TAT與傳統(tǒng)抗腫瘤藥物CPT綴合。一方面,與TAT結合后,CPT藥物的水溶性得到提升,經(jīng)修飾后的CPT在體內(nèi)的穩(wěn)定性增強;同時,CPT又能增加TAT的疏水性,可以增強TAT的穿膜活性,進而將更多CPT分子攜帶進入腫瘤細胞中。針對TAT中引入CPT的適合位點,以及連接鍵篩選,我們對TAT和CPT進行了不同方式的連接,如CPT與TAT不同位點的連接,以及變換不同的連接鍵(二硫鍵/酯鍵),在此基礎上設計合成了一系列TAT共軛類似物,并對它們的穿膜活性和抗腫瘤效果進行了檢測與評估,以探索TAT-CPT綴合物的最佳構建模式。實驗結果表明,共軛物整體疏水性增強后,促使TAT攜帶較多CPT內(nèi)化進入腫瘤細胞,藥物濃度得到提升,與CPT相比抗腫瘤效果增強;而在連接子的酶解穩(wěn)定性方面,酯鍵與二硫鍵相比更加穩(wěn)定。2.SP7作為抗腫瘤基因藥物遞送載體的研究。CAMEL是一種同時具有抗革蘭氏陽性和陰性細菌活性的雜合抗菌肽。研究證明CAMEL可以穿透細胞并作用于線粒體導致細胞死亡,表明CAMEL具有作為藥物遞送載體的潛能。SP,是一種含有11個氨基酸殘基的神經(jīng)肽,能夠通過與速激肽-1(NK-1)受體特異性結合而迅速內(nèi)化。而NK1受體在許多類型的癌癥中高表達,比如乳腺癌、星形細胞瘤、膠質(zhì)母細胞瘤等。因此,在本文中,我們將CAMEL與SP連接在一起而構建一種具有腫瘤靶向的嵌合肽SP7。并通過在其N末端連接十八烷酸,以期構建高效的基因運輸載體。實驗結果表明:CAMEL與SP7偶聯(lián)十八烷酸后都能增強質(zhì)粒的胞內(nèi)輸送能力;與CAMEL相比,18-SP7的穿膜活性對NK1受體高表達的細胞表現(xiàn)出選擇性;18-SP7能夠選擇性的將基因運輸?shù)礁弑磉_NK1受體的細胞內(nèi)。
[Abstract]:Tumor is one of the most serious diseases endangering human life and life. Chemotherapy is the main method for the treatment or to slow tumor growth. However, most of the traditional small molecule anti-tumor drugs due to poor selectivity, strong side effects, easy to cause the disadvantages of multi drug resistance has seriously affected the clinical effect. On the other hand, macromolecular drugs (for example, proteins or genes) compared to small molecular current anticancer drugs due to its potent and specific and attracted great interest. However, these large molecules for intracellular delivery is a huge challenge. The development of high selectivity, and the mechanism of the new target, is not easy to cause the new anti-tumor drug multidrug resistance has become an urgent problem to be solved. In this regard, drug delivery system (DDS) has been explored, in order to solve these difficulties facing the drug treatment in the past few. In ten years, many new biological materials developed a great interest due to its potential applications in various fields, including in medicine, biology, chemistry and tissue engineering and other fields. So far, the biological material has produced a significant impact in the field of cancer. Anticancer drug delivery, to membrane penetrating peptide (CPPs) cationic peptides represented has attracted widely attention due to their unique mechanism of action and show great prospects in the treatment of cancer. This study was based on a membrane penetrating peptide TAT and peptide CAMEL as template, and then through the design of its structure, to make it more efficient transportation or CPT gene therapy of small molecule drugs, and their application in tumor therapy of anti tumor activity study and exploration of.1.TAT-CPT conjugate. We will membrane penetrating peptide TAT and traditional anti-cancer drugs with CPT . on the one hand, when combined with TAT, CPT improves the water solubility of drugs, the modified CPT enhanced in vivo stability; at the same time, CPT can increase the hydrophobicity of TAT, TAT can enhance the penetrating activity, then more CPT molecules carry into tumor cells. According to the introduction of CPT TAT the suitable site, and linkage screening, we performed different ways of connecting TAT and CPT, such as CPT and TAT connection of different sites, and the transformation of different connectors (two disulfide / ester bond), based on the design and synthesis of a series of TAT conjugated analogues, and the penetrating activity and their anti-tumor effects were detected and evaluated, in order to build the best model to explore TAT-CPT conjugates. The experimental results show that the overall hydrophobic conjugate enhanced, prompting TAT to carry more CPT internalization into tumor cells, the drug concentration increased, compared with CPT anti tumor effect Guo Zengqiang; and in the linker enzyme stability, compared with two disulfide ester bond of.CAMEL.2.SP7 as a more stable anti-tumor gene drug delivery vector is a kind of both anti gram positive and negative bacteria activity of hybrid antimicrobial peptides. The study shows that CAMEL can penetrate the cell and the role of the mitochondria leads to cell death., show that CAMEL has potential as a drug delivery carrier is.SP, containing a 11 amino acid neuropeptide, can with tachykinin -1 receptor (NK-1) specific binding and internalization of NK1 receptor and cancer rapidly. In many types of high expression, such as breast cancer, astrocytoma, glioblastoma blastomas. Therefore, in this paper, we combine CAMEL and SP together to construct a chimeric peptide SP7. with tumor targeting and in its N terminal connected by eighteen alkyl acid, in order to build an efficient gene. Transport carrier. The experimental results show that the coupling of CAMEL and SP7 eighteen alkyl acid can enhance plasmid intracellular delivery capacity; compared with CAMEL, 18-SP7 transmembrane activity on NK1 receptor expression in the cells exhibit selectivity; 18-SP7 can selectively transport genes to high expression of NK1 receptor in the cell.

【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R730.5

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本文編號：1584300