本文選題：TO901317　切入點：乳腺癌細胞　出處：《南華大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景乳腺癌是一種常見的惡性腫瘤,近幾年有研究指出孤兒受體家族中的肝X受體α(LXRα)與乳腺癌的發(fā)生有著密切的關系,其中肝X受體激動劑TO901317尤其對LXRα具有高親和力,可抑制多種腫瘤細胞包括乳腺癌的增殖。最近有文獻進一步指出TO901317還能誘導前列腺癌和黑色素瘤細胞凋亡。目的研究肝X受體激動劑TO901317對人乳腺癌細胞凋亡的影響以及對細胞內LXRα、TTP和NF-κB p65等表達的作用,為乳腺癌的分子靶向治療提供新的思路。方法1.使用不同濃度(0μM,10μM,20μM,40μM)TO901317處理MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌細胞不同時間(0h,12h,24h,48h),用MTT法觀察細胞的活性。2.用流式細胞術以及Hoechst染色檢測不同濃度(0μM,10μM,20μM,40μM)TO901317處理MCF-7和MDA-MB-231細胞不同時間(0h,12h,24h,48h)后細胞凋亡的表現(xiàn)。3.RT-q PCR檢測TO901317處理MCF-7和MDA-MB-231細胞的量效組和時效組中LXRα和Bcl-2 m RNA的改變;Western blot檢測LXRα和細胞凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2、Caspase 3和Cleaved-caspase3等表達的差異。4.通過生物信息學軟件Interactome 3D和STRING,在線預測了LXRα、TTP和NF-κB p65三者之間的關系。5.RT-PCR檢測TO901317處理MCF-7細胞的量效組和時效組中TTP和NF-κB p65 m RNA表達的改變。結果隨著TO901317處理濃度的增加和處理時間的延長,對細胞的活性抑制作用逐漸增強,凋亡現(xiàn)象逐漸明顯。當細胞處理24h,濃度在20μM時,對細胞的活性抑制約為50%,且伴隨明顯的細胞凋亡形態(tài),因此,TO901317量效組采納24h作為處理時間,時效組采用20μM作為細胞處理濃度。與此同時,RT-q PCR檢測發(fā)現(xiàn),TO901317可上調LXRαm RNA水平,下調Bcl-2 m RNA表達。Western blot檢測除有上述一致的趨勢外,還進一步發(fā)現(xiàn)TO901317可促使凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase 3表達增多,進一步證實TO901317促進兩種細胞凋亡。通過生物信息學在線預測結果顯示,LXRα、TTP和NF-κB p65三者之間可能存有直接或間接的相互作用。RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)TO901317可上調TTP m RNA表達,并下調NF-κB p65 m RNA水平。結論1.TO901317能夠促使MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌細胞凋亡;2.TO901317促使乳腺癌細胞凋亡的機制與細胞中LXRα/TTP/NF-κB p65通路相關。
[Abstract]:Background Breast cancer is a common malignant tumor. In recent years, it has been pointed out that liver X receptor 偽 (LXR 偽) in the orphan receptor family is closely related to the occurrence of breast cancer, in which liver X receptor agonist TO901317 has high affinity for LXR 偽. TO901317 can also induce apoptosis of prostate cancer and melanoma cells. Objective to study the effect of liver X receptor agonist TO901317 on apoptosis of human breast cancer cells. And the expression of LXR 偽 -TTP and NF- 魏 B p65 in cells. Methods 1. MCF-7 and MDA-MB-231 human breast cancer cells were treated with different concentrations of 0 渭 MU 10 渭 MU 10 渭 MU and 40 渭 M TO901317 at different times. The activity of cells was observed by MTT method. Flow cytometry and Hoechst staining were used to detect the cell activity. 2. Changes of LXR 偽 and Bcl-2 m RNA in MCF-7 and MDA-MB-231 cells treated with 10 渭 M ~ 10 渭 M ~ (10 渭 M) and 40 渭 M ~ (10 渭 m) of 0 渭 m ~ (10 渭 m) at different time after treatment with 10 渭 M ~ (10 渭 M) and 40 渭 M ~ (10 渭 M) TO901317). (3. RT-q PCR detection of LXR 偽 and Bcl-2 m RNA changes in MCF-7 and MDA-MB-231 cells treated with TO901317 at different time.) LXR 偽 and apoptosis-related proteins Baxcl-2 (Caspase 3 and Cleaved-caspase3) were detected by Western blot in the aging group and in the dose-effecting group of MCF-7 and MDA-MB-231 cells treated with TO901317. The relationship between LXR 偽 TTP and NF- 魏 B p65 was predicted online by using bioinformatics software Interactome 3D and STRING.5.The changes of TTP and NF- 魏 B p65m RNA expression in MCF-7 cells treated with TO901317 were detected by RT-PCR. The increase of TO901317 concentration and the prolongation of treatment time, When the cells were treated for 24 h and the concentration of 20 渭 M was 20 渭 M, the inhibition of cell activity was about 50 and accompanied by obvious apoptotic morphology, so TO901317 dose-effect group was treated with 24 hours as the treatment time. At the same time, TO901317 could up-regulate the level of LXR 偽 m RNA and down-regulate the expression of Bcl-2 m RNA. Western blot showed that TO901317 could increase the expression of apoptosis protein Baxon Cleaved-caspase 3. The results of online bioinformatics prediction showed that there might be direct or indirect interaction between LXR 偽 TTP and NF- 魏 B p65. RT-PCR analysis showed that TO901317 could up-regulate the expression of TTP m RNA. Conclusion TO901317 can induce apoptosis of MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells. 2. The mechanism of TO901317 inducing apoptosis of breast cancer cells is related to the LXR 偽 / TTP / NF- 魏 B p65 pathway.
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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