本文選題：Oct4B1　切入點(diǎn)：結(jié)直腸癌　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探討Oct4B1基因過表達(dá)是否增強(qiáng)結(jié)直腸癌SW620細(xì)胞對(duì)化療藥物奧沙利鉑的耐藥性,及其機(jī)制是否與誘導(dǎo)細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)有關(guān)。方法:(1)實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)組(SW620-Oct4B1):轉(zhuǎn)染帶G418抗性的Oct4B1過表達(dá)質(zhì)粒;對(duì)照組(SW620-NC):轉(zhuǎn)染帶G418抗性的陰性對(duì)照質(zhì)粒。(2)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株構(gòu)建瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后48h,用RT-q PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞Oct4B1 m RNA表達(dá),明確瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效果;用G418篩選建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,用RT-q PCR檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞Oct4B1 m RNA表達(dá),明確穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效果,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。(3)對(duì)兩組細(xì)胞分別作如下檢測(cè):(1)MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)化療藥物奧沙利鉑的敏感性;(2)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力;(3)用Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力;(4)用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)記物E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、N-鈣黏蛋白(N-cadherin)表達(dá)及耐藥蛋白P-糖蛋白(P-gp)表達(dá)。結(jié)果:(1)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株建立結(jié)果:瞬時(shí)轉(zhuǎn)染48h后Oct4B1 m RNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組提高了1.28倍;用800μg/ml的G418建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞Oct4B1 m RNA表達(dá)水平實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組提高了2.1倍,實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組(P0.01)。(2)對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果如下:(1)奧沙利鉑對(duì)兩組細(xì)胞抑制率的結(jié)果顯示:隨奧沙利鉑濃度增加,對(duì)兩組細(xì)胞的抑制率也增加,但實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組細(xì)胞抑制率均明顯降低(P0.05);(2)劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:培養(yǎng)12h兩組在劃線處傷痕愈合率分別為(32.67±0.67)%及(24.00±1.15)%,實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組(P0.05);24h兩組在劃線處傷痕愈合率分別為(67.33±1.20)%及(50.00±2.88)%,實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.05);(3)細(xì)胞侵襲能力結(jié)果顯示:培養(yǎng)24h兩組穿膜細(xì)胞數(shù)分別為(397.30±11.85)及(202.30±14.68),實(shí)驗(yàn)組顯著多于對(duì)照組(P0.01);(4)EMT標(biāo)志物結(jié)果顯示:兩組細(xì)胞上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)分別為(0.20±0.02)及(0.53±0.01),實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組(P0.01);而間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin表達(dá)分別為(0.93±0.02)及(0.67±0.02),實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.01);(5)耐藥蛋白P-gp結(jié)果顯示:兩組P-gp表達(dá)分別為(0.42±0.02)及(0.11±0.01),實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組(P0.01)。結(jié)論:Oct4B1基因過表達(dá)能增強(qiáng)結(jié)直腸癌SW620細(xì)胞對(duì)化療藥物奧沙利鉑的耐藥性,其耐藥機(jī)制可能與誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT過程以及增加P-gp表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Objective: to investigate whether overexpression of Oct4B1 gene enhances the resistance of SW620 cells to oxaliplatin, a chemotherapeutic drug. Methods: the experimental group was divided into two groups: SW620-Oct4B1G: Oct4B1 overexpression plasmid with G418 resistance was transfected. Control group SW620-NCX: transfection of negative control plasmid with G418 resistance. 48 h after transient transfection, the expression of Oct4B1 m RNA was detected by RT-q PCR, and the effect of transient transfection was determined by G418 screening, and the stable transfected cell line was established by G418 screening. The expression of Oct4B1 m RNA in stable transfected cells was detected by RT-q PCR, and the effect of stable transfection was determined. The stable transfection cell line was used for further experiment. (3) the two groups of cells were tested as follows: the sensitivity of the cells to the chemotherapeutic drug oxaliplatin was detected by 1: 1 MTT assay) the migration ability of the cells was detected by scratch test) the invasive ability of the cells was detected by Transwell chamber. The expression of E-cadherin (E-cadherin) and P-glycoprotein (P-gp) were detected by Western blot. Results: the expression of Oct4B1 m RNA was detected after 48 hours of transient transfection. The test group was 1.28 times higher than the control group. The stable transfection cell line was established with 800 渭 g / ml G418. The expression level of Oct4B1 m RNA in the stable transfected cells in the experimental group was 2.1-fold higher than that in the control group. The inhibitory rate of oxaliplatin on the cells of the stable transfection group and the control group was as follows: the inhibitory rate of oxaliplatin on the cells of the two groups increased with the increase of oxaliplatin concentration, and the inhibitory rate of oxaliplatin on the cells of the two groups was also increased with the increase of the concentration of oxaliplatin. However, the cell inhibition rate in the experimental group was significantly lower than that in the control group (P 0.05). The results of scratch test showed that the wound healing rates of the two groups were 32.67 鹵0.67% and 24.00 鹵1.15%, respectively. The rate of wound healing in the experimental group was significantly higher than that in the control group for 24 hours. The invasive ability of the experimental group was significantly higher than that of the control group (P0.05). The results showed that the number of perforating cells in the two groups were 397.30 鹵11.85) and 202.30 鹵14.68%, respectively. The results showed that the number of cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P0.014EMT marker). The results showed that the number of cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P0.014EMT marker): the number of perforating cells in the two groups was 397.30 鹵11.85) and 202.30 鹵14.68%, respectively. The expression of E-cadherin was 0.20 鹵0.02) and 0.53 鹵0.01 in the experimental group, which was significantly lower than that in the control group (P 0.01), while the expression of N-cadherin was 0.93 鹵0.02) and 0.67 鹵0.02 in the control group. The expression of P-gp in the experimental group was significantly higher than that in the control group (0.42 鹵0.02) and 0.11 鹵0.01 (P < 0.01), and the expression of N-cadherin in the experimental group was 0.42 鹵0.02and 0.11 鹵0.01a respectively, and the expression of N-cadherin in the experimental group was significantly higher than that in the control group. Conclusion the overexpression of 1: Oct4B1 gene can enhance the resistance of SW620 cells to oxaliplatin, a chemotherapeutic drug. The mechanism of drug resistance may be related to the induction of EMT and the increase of P-gp expression.
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：1566966