本文選題：microRNA-223　切入點：胃癌　出處：《吉林大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：胃癌致死率在全世界居癌癥相關(guān)死亡性疾病的第二位，是威脅人類健康最常見的惡性腫瘤之一。胃癌在我國其發(fā)病率居各類腫瘤的首位，因其早期無癥狀而至的低檢出率導(dǎo)致其根除率不高、預(yù)后較差。每年死于胃癌人數(shù)接近全部惡性腫瘤死亡人數(shù)的1/4，嚴(yán)重威脅我國人民身體健康的疾病。胃癌的發(fā)病機制不清，與遺傳、環(huán)境及生活習(xí)慣等多重因素有關(guān)。研究證實，幽門螺旋桿菌（helicobacter pylori, H.pylori）感染是誘發(fā)胃癌發(fā)生的最重要環(huán)境因素之一。H.pylori的脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）、Cytotoxin-associatedgeneA（CagA）等毒力因子可以使胃粘膜產(chǎn)生持續(xù)的慢性炎癥、形成糜爛或潰瘍、增強胃癌細(xì)胞的增殖、促進胃癌進展。 microRNA（miRNAs或miRs）即微小RNA，是一種內(nèi)源性的、長度為18-24個核苷酸非編碼的單鏈小RNA分子，可以調(diào)控靶基因mRNA表達、進而可以促進細(xì)胞的增殖、凋亡、分化等，microRNA與多種疾病相關(guān)，尤其是與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近年來，大量研究顯示microRNAs在胃癌發(fā)生發(fā)展中的發(fā)揮重要作用，胃腸道癌癥的microRNA表達譜與其它類型癌癥及正常胃腸道組織的microRNA表達譜存在明顯差異，例如，microRNA-223是第一個在生物信息學(xué)得到確認(rèn)的microRNA，在Barrett食管、結(jié)腸癌及胃癌等消化道疾病或腫瘤中的表達異常增高。在胃腸道惡性腫瘤診斷方面具有重要價值。 鑒于H.pylori在胃癌發(fā)生中的重要作用，我們需要繼續(xù)探索H.pylori對胃癌密切相關(guān)的microRNA表達及其對胃癌細(xì)胞生長、遷移能力的調(diào)控，以利于揭示胃癌的發(fā)生機制。本研究擬通過對比研究microRNA-223在胃癌中表達與H.pylori感染的相關(guān)性、胃癌中microRNA-223表達水平與疾病臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系，進而在體外探索H.pylori感染對microRNA-223的誘導(dǎo)、microRNA-223對胃癌細(xì)胞生長、遷移等的調(diào)控作用，，從而揭示microRNA-223在胃癌中的致癌機理與分子基礎(chǔ)。本研究共三個章節(jié)，各部分的研究目的、方法、結(jié)果及結(jié)論如下。 第一章microRNA-223在幽門螺桿菌相關(guān)胃癌中的表達 一研究目的 探索microRNA-223在胃癌中過表達與H.pylori感染的相關(guān)性及其在胃癌中的致癌機制。 二研究方法 我們通過熒光定量PCR和Western blotting鑒定胃癌組織標(biāo)本中H.pylori感染引起的CagA表達，從而篩選出H.pylori感染陽性和陰性的胃癌標(biāo)本；然后通過熒光定量PCR測定兩組胃癌標(biāo)本中的microRNA-223表達水平，然后，采用采用Kaplan Meier生存分析等多種統(tǒng)計學(xué)方法分析microRNA-223分子表達與生存時間及其他臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性。 三研究結(jié)果 鑒定出38份H.pylori菌感染陽性和27份H.pylori菌感染陰性的胃癌組織標(biāo)本，H.pylori菌感染陽性標(biāo)本中CagA在mRNA和蛋白水平的表達量明顯高于H.pylori菌感染陰性標(biāo)本。 H.pylori菌感染陽性的胃癌組織標(biāo)本中microRNA-223表達量顯著高于H.pylori菌感染陰性的胃癌組織標(biāo)本，前者microRNA-223表達量是后者的2.23倍。 H.pylori菌感染陽性的胃癌組織標(biāo)本中microRNA-223表達水平與腫瘤大小、腫瘤轉(zhuǎn)移和TNM分期等胃癌患者臨床病理指標(biāo)密切相關(guān)，而與患者年齡、細(xì)胞分化和PT分期無關(guān)；microRNA-223高表達患者的平均生存時間明顯低于microRNA-223低表達患者的。 四研究結(jié)論 microRNA-223在胃癌中的過表達與H.pylori感染密切相關(guān)，microRNA-223表達水平與胃癌的臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的相關(guān)性，提示microRNA-223在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。 第二章幽門螺桿菌感染體外誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞miroRNA-223表達研究 一研究目的 本研究擬探索H.pylori感染對胃癌細(xì)胞miroRNA-223的表達差異和microRNA加工成熟相關(guān)的Drosha和Dicer表達的影響。 二研究方法 通過RT-qPCR技術(shù)檢測在H.pylori感染不同胃癌細(xì)胞株前后，miroRNA-223的表達差異，采用Western blotting和RT-qPCR方法測定H.pylori感染SGC-7901胃癌細(xì)胞后Drosha和Dicer在蛋白質(zhì)和mRNA水平上表達變化。 三研究結(jié)果 H.pylori刺激AGS、SGC-7901和MKN-45胃癌細(xì)胞中microRNA-223表達； H.pylori刺激SGC-7901胃癌細(xì)胞microRNA-223表達具有時間依賴性； H.pylori感染提高SGC-7901胃癌細(xì)胞中Drosha和Dicer蛋白表達； H.pylori感染促進SGC-7901細(xì)胞Drosha和Dicer的mRNA表達水平。 四研究結(jié)論 H.pylori感染誘導(dǎo)AGS、 GES-1、 SGC-7901和MKN45胃癌細(xì)胞microRNA-223表達；H.pylori感染誘導(dǎo)SGC-7901胃癌細(xì)胞microRNA加工相關(guān)的Drosha和Dicer分子表達。 第三章miroRNA-223對胃癌細(xì)胞生長、遷移的影響 一研究目的 本研究探索了microRNA-223的模擬物轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞后對細(xì)胞生長和遷移等特性的影響，從而為進一步探索microRNA-223的導(dǎo)致胃癌發(fā)生的分子機制奠定基礎(chǔ)。 二研究方法 通過MTT法測定miroRNA-223和對照microRNA模擬物對胃癌細(xì)胞活性的影響；通過CCK-8實驗和克隆形成實驗測定miroRNA-223對胃癌細(xì)胞增殖能力的影響；然后利用劃痕試驗和測定miroRNA-223對細(xì)胞遷移能力的影響，采用Transwell試驗和侵襲實驗miroRNA-223對細(xì)胞侵襲能力的影響。 三研究結(jié)果 microRNA-223和對照microRNA模擬物轉(zhuǎn)染可以降低胃癌細(xì)胞活性，但兩者之間沒有顯著區(qū)別； microRNA-223模擬物可以轉(zhuǎn)染促進胃癌細(xì)胞生長，提高胃癌細(xì)胞克隆形成能力； microRNA-223模擬物轉(zhuǎn)染促進胃癌細(xì)胞遷移能力和侵襲力。 四研究結(jié)論 microRNA-223模擬物轉(zhuǎn)染可以促進胃癌細(xì)胞生長、提高胃癌細(xì)胞克隆形成能力，還可以促進胃癌細(xì)胞遷移能力和侵襲力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【共引文獻】

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本文編號：1564183