本文選題：黑色素瘤　切入點(diǎn)：CD　出處：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的 CD44在腫瘤的生長(zhǎng)及糖酵解代謝中起重要作用。文中旨在探討CD44中和性抗體對(duì)鼠黑色素瘤B16細(xì)胞生長(zhǎng)及糖酵解代謝的影響。方法首先設(shè)置對(duì)照抗體(50μg/m L)和不同濃度CD44抗體(2、10、50μg/m L)處理B16細(xì)胞,24 h后通過免疫印跡檢測(cè)AKT通路活化情況。隨后設(shè)置對(duì)照抗體(50μg/m L)和CD44抗體(50μg/m L)平行試驗(yàn)使用4μmol/L API-2預(yù)處理細(xì)胞,處理細(xì)胞48 h后通過免疫熒光觀察乳酸脫氫酶A(LDHA)表達(dá),比色法檢測(cè)細(xì)胞上清乳酸含量。最后設(shè)置對(duì)照抗體(50μg/m L)組、API-2(4μmol/L)處理組、CD44抗體(50μg/m L)組和聯(lián)合處理組(API-2+CD44抗體),作用B16細(xì)胞96 h后,通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,AO/EB和Annexin V染色檢測(cè)細(xì)胞死亡及凋亡。結(jié)果與對(duì)照抗體B16細(xì)胞p-AKT水平(1.00±0.25)相比,2、10、50μg/m L CD44抗體呈濃度依賴性增強(qiáng)[2.51±0.32,3.89±0.46,4.07±0.42,P0.01],與對(duì)照抗體相比,50μg/m L CD44抗體作用后LDHA表達(dá)增強(qiáng)(2.13±0.24)倍。中和CD44后B16細(xì)胞LDHA熒光表達(dá)增強(qiáng),且細(xì)胞上清乳酸含量升高,與對(duì)照抗體相比,CD44抗體(50μg/m L)96 h后細(xì)胞上清乳酸含量升高[(35.32±3.24)mmol/L vs(56.34±8.19)mmol/L,P0.01]。聯(lián)合使用AKT通路抑制劑API-2處理后,CD44抗體所致LDHA表達(dá)增強(qiáng)現(xiàn)象明顯受到抑制,且對(duì)照抗體和CD44抗體組乳酸含量均下降;與對(duì)照組相比,CD44抗體細(xì)胞上清乳酸含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(20.12±4.35)mmol/L vs(22.65±5.16)mmol/L,P0.05]。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組細(xì)胞增殖率[(103±12.91)%]比較,API-2組[(84.87±19.35)%]、CD44抗體組[(71.35±16.23)%]和聯(lián)合處理組[(41.16±9.15)%]均明顯降低(P0.05)。細(xì)胞凋亡檢測(cè)顯示,與對(duì)照抗體組凋亡率[(5.23±0.96)%]相比,API-2組[(13.65±4.27)%]、CD44抗體組[(19.21±3.53)%]和聯(lián)合處理組[(43.21±7.87)%]均顯著升高(P0.01)。結(jié)論體外中和B16細(xì)胞CD44功能抑制細(xì)胞生長(zhǎng)但促進(jìn)AKT通路介導(dǎo)的糖酵解代謝,抑制AKT通路可增強(qiáng)CD44抗體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。
[Abstract]:Objective CD44 plays an important role in tumor growth and glycolysis metabolism. The aim of this paper is to investigate the effects of CD44 neutralizing antibody on the growth and glycolysis metabolism of mouse melanoma B16 cells. B16 cells were treated with 50 渭 g / mL CD44 antibody for 24 h, then the activation of AKT pathway was detected by Western blotting. Then the control antibody 50 渭 g / mL and CD44 antibody 50 渭 g / mL were used to pretreat B16 cells with 4 渭 mol/L API-2. After 48 h of treatment, the expression of lactate dehydrogenase (LDHA) was observed by immunofluorescence. The content of lactic acid in supernatant was measured by colorimetric method. Finally, the control antibody 50 渭 g / mL) group was treated with 50 渭 g / ml of API-2 antibody and the combined treatment group was treated with 50 渭 g / mL CD44 antibody of API-2, and B16 cells were exposed to API-2 CD44 antibody for 96 h. Cell death and apoptosis were detected by MTT assay with AOP / EB and Annexin V staining. Results compared with the control antibody B16 cell, p-AKT level was increased in a concentration-dependent manner [2.51 鹵0.32 鹵3.89 鹵0.46 鹵0.42P0.01] compared with the control antibody B16 cell, the effect of 50 渭 g / mL CD44 antibody was increased in a dose-dependent manner [2.51 鹵0.32 鹵3.89 鹵0.46 鹵0.42P0.01]. The expression of LDHA in B16 cells was increased by 2.13 鹵0.24) times, and the fluorescence expression of LDHA in B16 cells was increased after neutralization of CD44. The content of lactic acid in supernatant was increased, compared with the control antibody, the lactic acid content in supernatant of CD44 antibody increased after 96 h [35.32 鹵3.24 mmol / L vs(56.34 鹵8.19 mmol / L P0.01]. The increase of LDHA expression induced by AKT pathway inhibitor API-2 was significantly inhibited. Compared with the control group, the content of lactic acid in the supernatant of CD44 antibody cells was not significantly different from that in the control group [20. 12 鹵4. 35 mmol / L vs(22.65 鹵5. 16 mmol / L]. Compared with the control group [103 鹵12.91%], the cell proliferation rate of the API-2 group [84.87 鹵19.35%] and the combined treatment group [71.35 鹵16.23%] and the combined treatment group [41.16 鹵9.15%] significantly decreased the cell apoptosis. Compared with the control group [5.23 鹵0.96 渭 g], the apoptosis rate of the API-2 group [13.65 鹵4.27%] and the combined treatment group [19.21 鹵3.53%] and the combined treatment group [43.21 鹵7.87%] significantly increased the rate of apoptosis. Conclusion the CD44 function of the B16 cells in vitro inhibits the growth of the cells but promotes the glycolytic metabolism mediated by the AKT pathway. Inhibition of AKT pathway can enhance the killing effect of CD44 antibody on tumor cells.
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)廣東省分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;廣東醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81503104) 廣東醫(yī)科大學(xué)博士啟動(dòng)基金(2XB13070);廣東醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(2014ZYDC004,2015ZYDC003)
【分類號(hào)】：R739.5

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3 王s，

本文編號(hào)：1561010