本文選題：結(jié)直腸癌全反式維甲酸增殖凋亡　切入點：CRABP-Ⅱ　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景與目的結(jié)直腸癌是人體胃腸道常見的腫瘤疾病之一,男性發(fā)病率略高于女性。隨著年齡的增大,結(jié)直腸癌發(fā)病的機率也不斷增加。近幾十年來,結(jié)直腸癌在我國的發(fā)病率和死亡率也一直呈現(xiàn)上升趨勢,而且地區(qū)差異較大。由于結(jié)直腸癌惡性程度較高,臨床預(yù)后較差,雖然可以采用放療和化療的方式治療,但目前最主要的治療方法還是外科手術(shù),而且患者術(shù)后的腫瘤復(fù)發(fā)率依然較高。現(xiàn)有多項研究表明,結(jié)直腸癌治療過程中的治療方案和患者的預(yù)后情況都與與基因突變有緊密關(guān)系。如果能尋找到有效的化療藥物,那么在腫瘤發(fā)現(xiàn)前期便可使病情得以控制,避免腫瘤的進一步發(fā)展。維甲酸又稱視黃酸,包括維生素A及其代謝產(chǎn)物,根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)中極性基團及側(cè)鏈的不同,維甲酸類藥物包括多種同分異構(gòu)體,如9-順式維甲酸、13-順式維甲和全反式維甲酸等,其中全反式維甲酸是目前臨床應(yīng)用較廣的藥物。維甲酸對多種惡性腫瘤都有促進誘導(dǎo)分化、抑制增殖和促進凋亡的作用,而且已經(jīng)應(yīng)用于一些惡性腫瘤如白血病、鱗狀細胞癌及黑色素瘤、乳腺癌等疾病的治療。近年,Bhattacharya等研究發(fā)現(xiàn),在結(jié)直腸癌小鼠的腸道組織內(nèi),全反式維甲酸的含量比正常小鼠的要低,而且低水平的維甲酸導(dǎo)致小鼠腸組織中CD8+T細胞的數(shù)量減少,抑制了其免疫功能的發(fā)揮,導(dǎo)致腫瘤更易多發(fā)。然而當提高全反式維甲酸的含量后,可以重新激活CD8+T細胞的免疫作用,增強其腫瘤殺傷能力,減緩或抑制結(jié)直腸癌的進一步發(fā)展。而且他們研究發(fā)現(xiàn),結(jié)直腸癌患者的腸道組織內(nèi)ATRA的水平也較低,是由于組織自身會產(chǎn)生降解全反式維甲酸蛋白質(zhì)造成的。這說明全反式維甲酸可能在抑制小鼠和人的結(jié)直腸癌方面發(fā)揮關(guān)鍵作用,然而對其內(nèi)在機制仍不清楚,仍需要進一步研究。本研究通過體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌HCT116細胞以及體內(nèi)動物模型實驗,研究全反式維甲酸及其受體抑制劑對結(jié)直腸癌細胞的作用,及其對細胞內(nèi)維甲酸信號通路中CRABP-Ⅱ和FABP5等相關(guān)蛋白表達的影響,并進一步探討ATRA介導(dǎo)的抗腫瘤作用的分子機制,為結(jié)直腸癌疾病治療的藥物選擇提供實驗依據(jù)。材料與方法1.MTT法、克隆形成實驗和細胞劃痕實驗檢測ATRA及其受體抑制劑對結(jié)腸癌細胞系HCT116的增殖和遷移能力的影響;2.Western-Blotting方法檢測CRABP-Ⅱ、FABP5、PARP、Bcl-2、Bax等相關(guān)蛋白的表達變化情況;3.免疫組織化學(xué)染色法和免疫熒光檢測法檢測HCT116細胞內(nèi)CRABP-Ⅱ和FABP5的蛋白表達變化情況;4.構(gòu)建裸鼠皮下成瘤動物模型實驗檢測ATRA及其受體抑制劑對腫瘤作用的效果;5.實驗數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計軟件Graph Pad Prism 5處理分析,采用單因素方差分析,用T檢驗進行組間分析,以α=0.05為差異顯著性檢驗標準。結(jié)果1.ATRA對HCT116細胞的增殖抑制作用具有明顯的劑量依賴關(guān)系,實驗結(jié)果差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);2.ATRA對HCT116細胞的遷移抑制作用具有明顯的劑量依賴關(guān)系;3.HCT116細胞經(jīng)過ATRA梯度濃度作用后,CRABP-Ⅱ、Bcl-2的蛋白質(zhì)表達水平逐漸下降,而PARP、BAX、FABP5的蛋白質(zhì)表達逐漸增加;4.HCT116細胞經(jīng)過ATRA及其受體抑制劑RO41-5253(以下簡稱RO)處理后,CRABP-Ⅱ、Bcl-2的蛋白質(zhì)表達水平都表現(xiàn)出不同程度的下降,而PARP、BAX、FABP5的蛋白質(zhì)表達水平均出現(xiàn)不同程度的上升;聯(lián)合用藥組相比單獨ATRA組,細胞被抑制作用減弱;5.裸鼠動物模型經(jīng)過ATRA及其受體抑制劑RO作用后,腫瘤組織的CRABP-Ⅱ表達水平表現(xiàn)出下降趨勢,而FABP5的表達水平出現(xiàn)上升趨勢。結(jié)論1.ATRA可以誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細胞系HCT116發(fā)生凋亡;2.ATRA可以下調(diào)結(jié)直腸癌細胞HCT116的CRABP-Ⅱ表達和上調(diào)FABP5的表達;3.ATRA受體抑制劑RO可以降低結(jié)直腸癌細胞HCT116對ATRA的敏感性,其分子機制可能與下調(diào)CRABP-Ⅱ表達和上調(diào)FABP5表達有關(guān);
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【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

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本文編號：1561195