發(fā)布時間：2018-03-03 06:58

  本文選題：ACK1　切入點：ECD　出處：《暨南大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景和意義:胃癌是目前全球高發(fā)的惡性腫瘤之一。手術(shù)切除以及放化療是治療胃癌患者的主要手段。胃癌早期發(fā)病癥狀隱匿,臨床上一經(jīng)確診時,往往已經(jīng)是晚期和發(fā)生了轉(zhuǎn)移,從而導(dǎo)致胃癌患者的預(yù)后較差。靶向小分子/抗體特異抑制癌基因作為一種治療策略受到廣泛關(guān)注,此策略的關(guān)鍵在于找到胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的靶點,以作為新的藥物治療靶標(biāo)。前期研究發(fā)現(xiàn)ACK1基因在胃癌中可能存在擴(kuò)增,提示ACK1與胃癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。因此,本論文著重研究ACK1在胃癌中的臨床意義以及分子機(jī)制。方法與結(jié)果:1.通過分析Oncomine數(shù)據(jù)庫,發(fā)現(xiàn)ACK1基因的DNA拷貝數(shù)和m RNA水平在胃癌組織中顯著上調(diào)。2.通過分析胃癌臨床樣品中ACK1蛋白的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)ACK1蛋白在胃癌組織中上調(diào)且與胃癌患者預(yù)后差密切相關(guān)。3.通過使用Transwell小室、流式細(xì)胞儀等其它方法,我們檢測了沉默ACK1和過表達(dá)ACK1后對胃癌細(xì)胞增殖、克隆形成、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、EMT以及細(xì)胞遷移侵襲能力的影響。過表達(dá)ACK1促進(jìn)了胃癌細(xì)胞EMT和遷移侵襲。沉默ACK1抑制了胃癌細(xì)胞增殖、克隆形成、EMT和遷移侵襲。沉默ACK1誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生G2/M阻滯和細(xì)胞凋亡。4.采用小鼠腫瘤異種移植裸鼠模型以及體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移模型,證實穩(wěn)定沉默ACK1抑制胃癌細(xì)胞的裸鼠成瘤能力和肺轉(zhuǎn)移能力。5.通過采用Transwell、流式細(xì)胞儀、基因干擾等其它實驗方法,證實ECD在ACK1促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、克隆形成、遷移侵襲以及EMT中發(fā)揮重要作用。6.采用雙熒光報告基因分析、染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)、基因干擾技術(shù)以及其它方法,闡明了ACK1通過激活A(yù)KT-POU2F1-ECD通路促進(jìn)胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。7.闡明了ACK1通過ECD依賴的方式促進(jìn)p53蛋白泛素化降解。結(jié)論:1.ACK1基因擴(kuò)增導(dǎo)致其蛋白在胃癌組織中上調(diào),這一上調(diào)與胃癌臨床預(yù)后差密切相關(guān)。2.證實了ACK1促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、克隆形成、EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的生物學(xué)功能。3.闡明了ACK1通過激活A(yù)KT-POU2F1-ECD通路,從而促進(jìn)胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移。4.闡明了ACK1通過ECD依賴的方式促進(jìn)p53蛋白的泛素化降解。
[Abstract]:Background and significance: gastric cancer is one of the most common malignant tumors in the world. Surgical resection and radiotherapy and chemotherapy are the main methods for the treatment of gastric cancer. The prognosis of patients with gastric cancer is often poor due to their late stage and metastasis. Targeted small molecule / antibody specific suppressor oncogenes have attracted wide attention as a therapeutic strategy. The key of this strategy is to find the target for carcinogenesis and metastasis of gastric cancer, which can be used as a new target for drug therapy. Previous studies have found that ACK1 gene may be amplified in gastric cancer, suggesting that ACK1 is related to the occurrence and development of gastric cancer. This paper focuses on the clinical significance and molecular mechanism of ACK1 in gastric cancer. Methods and results: 1. By analyzing the Oncomine database, It was found that the DNA copy number and m RNA level of ACK1 gene were significantly up-regulated in gastric cancer tissues. By analyzing the relationship between the expression of ACK1 protein and prognosis in clinical samples of gastric cancer, It was found that ACK1 protein was up-regulated in gastric cancer tissues and was closely related to the poor prognosis of gastric cancer patients. By using Transwell chamber, flow cytometry and other methods, we detected the proliferation and clone formation of gastric cancer cells after silencing ACK1 and over-expressing ACK1. The effects of cell cycle, apoptosis and the ability of cell migration and invasion. Overexpression of ACK1 promoted EMT and migration and invasion of gastric cancer cells. Silencing ACK1 inhibited the proliferation of gastric cancer cells. Silencing ACK1 induced G2 / M arrest and apoptosis of gastric cancer cells. 4. Xenotransplantation nude mice model and lung metastasis model in vivo were used. The ability of stable silencing ACK1 to inhibit tumorigenesis and lung metastasis of gastric cancer cells in nude mice was confirmed. 5. By using Transwell, flow cytometry, gene interference and other experimental methods, it was proved that ECD could promote the proliferation and clone formation of gastric cancer cells in ACK1. Migration, invasion and EMT play an important role. 6. Double fluorescence reporter gene analysis, chromatin immunoprecipitation, gene interference and other methods, The molecular mechanism of ACK1 promoting carcinogenesis and metastasis of gastric cancer by activating AKT-POU2F1-ECD pathway was elucidated. 7. It was clarified that ACK1 promoted the degradation of p53 protein ubiquitin by ECD dependent way. Conclusion: 1. The amplification of ACK1 gene leads to up-regulation of p53 protein in gastric cancer tissues. This upregulation is closely related to the poor clinical prognosis of gastric cancer .2.It is confirmed that ACK1 promotes the proliferation of gastric cancer cells, the biological function of clone formation and invasion and metastasis of gastric cancer cells. It is clear that ACK1 activates the AKT-POU2F1-ECD pathway. The results showed that ACK1 promoted the Ubiquitin degradation of p53 protein in ECD dependent manner.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

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本文編號：1559979