本文關(guān)鍵詞： 哈薩克族 食管上皮細(xì)胞 葉酸 MNNG 彗星實(shí)驗(yàn)　出處：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探討葉酸在N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍(MNNG)致哈薩克族正常食管上皮細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及凋亡的作用,以及對(duì)DNA損傷等相關(guān)指標(biāo)的作用,為哈族食管癌的防治提供理論依據(jù)。方法:采用3因素3水平析因設(shè)計(jì)將體外培養(yǎng)的哈族正常食管上皮細(xì)胞暴露于不同葉酸濃度(0.000、0.400、0.800 ug/m L)和MNNG(0.000、0.750、1.500ug/mL)的培養(yǎng)液中作用48h、72h和96h后,(1)采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)葉酸及MNNG對(duì)哈薩克族食管上皮增殖的影響,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡;(2)采用彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DNA損傷水平;采用RT-PCR法檢測(cè)APE1、MGMT基因m RNA的表達(dá)水平;(3)采用Western Blot法檢測(cè)APE1、MGMT基因蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:隨著葉酸濃度降低和MNNG濃度增加:(1)哈族正常食管上皮細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化,死細(xì)胞數(shù)目逐漸增多,細(xì)胞核出現(xiàn)不同程度的破裂,胞質(zhì)不勻和細(xì)胞完整性損傷,細(xì)胞對(duì)MNNG損害的敏感性明顯增加,96 h時(shí)尤為嚴(yán)重;(2)哈族正常食管上皮細(xì)胞的抑制率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P0.01);(3)哈族正常食管上皮細(xì)胞G0+G1期、S期和G2+M期細(xì)胞比例不同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),細(xì)胞周期阻滯在S期和G2+M期;(4)哈族正常食管上皮細(xì)胞的凋亡率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);(5)各組DNA損傷指標(biāo)發(fā)生了變化,即Tail DNA含量上升,彗星尾長(zhǎng)增加,Olive尾矩增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);(6)APE1基因的mRNA及蛋白表達(dá)水平隨著損傷的增加而增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);(7)MGMT基因的mRNA及蛋白表達(dá)水平則隨損傷的增加而下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:葉酸濃度降低對(duì)MNNG致哈族食管正常上皮細(xì)胞損傷有一定的促進(jìn)作用,而保持充足的葉酸則對(duì)MNNG的損害起到一定的保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of folic acid on proliferation, cell cycle and apoptosis of Kazakh normal esophageal epithelial cells induced by N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), and to investigate the effects of folic acid on DNA damage. Methods: normal esophageal epithelial cells of Kazakh nationality were exposed to different folic acid concentrations of 0.400 ~ 0.800 ugmL and MNNG-0.0000.501.500ugmL for 48h and 72h, respectively, by using 3 factors and 3 levels of factorial design for the prevention and treatment of esophageal carcinoma in Kazakh nationality. Methods: in vitro, the normal esophageal epithelial cells of Kazakh nationality were exposed to different concentrations of folic acid 0.400g / mL and 0.7500.501.500ugmL for 48h and 72h, respectively. After 96 hours, the effects of folic acid and MNNG on the proliferation of esophageal epithelium in Kazak nationality were detected by using thiazolyl methylate (MTT) method. Cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry. Comet assay was used to detect the level of DNA damage. RT-PCR method was used to detect the expression level of m RNA of APE1MGMT gene. Western Blot method was used to detect the protein expression level of APE1MGMT gene. Results: with the decrease of folic acid concentration and the increase of MNNG concentration, the morphology of normal esophageal epithelial cells changed significantly. The number of dead cells increased gradually, the nucleus ruptured to varying degrees, the cytoplasm unevenness and cell integrity were damaged, and the sensitivity of cells to MNNG damage was significantly increased at 96 h.) the inhibition rate of normal esophageal epithelial cells in Kazakh nationality was increased. The proportion of normal esophageal epithelial cells in G _ 0 G _ 1 phase and G _ 2 M phase was different, the difference was significant (P 0.01), cell cycle arrest was in S phase and G _ 2 M phase, the apoptosis rate of normal esophageal epithelial cells was increased. There were significant changes in DNA damage index in each group, that is, the content of Tail DNA increased, the tail length of comet increased and the Olive tail moment increased, and the expression level of mRNA and protein increased with the increase of damage. The expression level of mRNA and protein of MGMT gene decreased with the increase of injury, and the difference was statistically significant. Conclusion: the decrease of folic acid concentration can promote the injury of normal esophageal epithelial cells induced by MNNG. And maintaining sufficient folic acid can protect MNNG damage to some extent.
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：1522793