本文關鍵詞： 乳腺癌 TLR4 HMGB1 ASCL2 乳腺癌干細胞 預后　出處：《第三軍醫(yī)大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：乳腺癌是臨床上女性最為常見的惡性腫瘤之一,在現今世界惡性腫瘤發(fā)生率中排名第三位,同時也是女性最常見的惡性腫瘤和引起女性相關死亡的主要腫瘤病因。相關統計顯示,乳腺癌的發(fā)病率正呈現出逐年增多的趨勢。對乳腺癌的不斷研究及乳腺癌治療方法的進步,乳腺癌的治療效果有了一定的改善。世界衛(wèi)生組織根據乳腺癌組織學特征,蛋白免疫組化表達特征,基因型特征及臨床治療靶點等因素,將乳腺癌分為不同的分子亞型。其中l(wèi)uminal型(包括A和B)是乳腺癌的最主要類型,占乳腺癌患者比例70%左右,預后最差的為三陰性乳腺癌。Toll樣受體(Toll-like receptors,TLR)是生物免疫反應中一個重要的模式識別受體,它能識別病原相關分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)及內源性配體,從而激活免疫系統和炎性介質的釋放,引發(fā)適當的免疫反應。Toll樣受體除了在免疫細胞和腫瘤細胞中調高的表達外,Toll樣受體在部分組織的正常上皮細胞也有表達,比如胃、肺泡的上皮細胞等。新進的研究表明,Toll樣受體在多種腫瘤細胞中有表達,并且發(fā)現Toll樣受體的高表達與惡性腫瘤的不良預后有關。我們在TCGA數據庫中篩查到TLR4在乳腺癌隨訪死亡病例中顯著高表達,這提示TLR4是乳腺癌中關鍵的預后指標。同時TLR4在luminal型(包括A和B)是乳腺癌和三陰性乳腺癌這兩個亞群中也與預后顯著相關。為了進一步分析TLR4在乳腺癌中的作用機制,我們體外分選了TLR4陽性的乳腺癌細胞(luminal型乳腺癌細胞系MCF-7,三陰性乳腺癌細胞系MDA-MB-231),結果顯示TLR4陽性MCF-7細胞和乳腺癌細胞干性密切相關,而TLR4陽性MDA-MB-231細胞則有很強EMT特征。同時我們還檢測了TLR4內源性配體HMGB1在乳腺癌組織中的表達,以期通過HMGB1和TLR4的聯合檢測分析,為乳腺癌診療提出新的檢測指標和治療方案。ASCL2(Achaet scute-like 2,ASCL2)是一個和腫瘤發(fā)生發(fā)展相關的轉錄因子,已被證明在腫瘤組織中高表達,能夠促進腫瘤的增殖和侵襲,和腫瘤患者的預后差有密切的關聯。近期研究表明,ASCL2既可以受WNT信號通路的調節(jié),也可以和趨化因子受體(Chemokine receptor 4,CXCR4)結合來促進癌細胞的侵襲和轉移,并提示ASCL2與結腸癌干細胞的 干性‖有明顯的相關性。ASCL2在乳腺癌中的表達與乳腺癌臨床病理學之間的研究尚未開展。我們收集了191例在第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院手術切除的女性乳腺癌標本。首先檢測了ASCL2在臨床乳腺癌標本中的表達,并結合乳腺癌患者臨床病理特征進行統計學分析,驗證ASCL2表達和患者臨床特征及預后的關系。通過ASCL2和TLR4在乳腺癌組織表達的分析,試圖發(fā)現TLR4和ASCL2之間的關聯關系,為乳腺癌干性調控提供新的思路。隨著基因檢測技術的不斷發(fā)展和基因組學研究的逐漸深入,和乳腺癌相關的基因不斷被發(fā)現。檢測患者乳腺癌相關基因的擴增、突變和表達異常情況,對早期診斷、預后判斷以及治療方案決策等具有重要意義,BRCA1,BRCA2等基因已被證明和乳腺癌的易感性相關。Yang等已經發(fā)現乳腺癌組織TLR4基因的多態(tài)性和乳腺癌的預后有明顯的關聯性。我們通過收集24位乳腺癌患者的血樣,在germline水平上對TLR4基因的多態(tài)性進行檢測,研究分析其與乳腺癌易感性的關系。主要結果和結論如下:1.乳腺癌死亡病例的TLR4表達顯著增強,并與乳腺癌干性指標ALDH1A1顯著相關(1)TCGA數據庫分析結果顯示:乳腺癌死亡組(death)與無病生存組(DFS),兩組TLR4表達值(平均值)分別為:0.5131和0.0163,統計學分析t=3.441 df=258,P值為0.0007,兩組間有極顯著差異;(2)TCGA數據庫分析luminal型乳腺癌中TLR4在死亡組(death)和無病生存組(DFS)表達有顯著差異(P0.05);(3)數據庫分析三陰性乳腺癌中TLR4在死亡組(death)和無病生存組(DFS)表達有顯著差異(P0.05);(4)進一步分析顯示:luminal型乳腺癌死亡病例的TLR4表達與ALDH1A1表達的相關性的r2值為0.8316(P0.0001);三陰性乳腺癌死亡病例的TLR4表達與ALDH1A1表達的相關性的r2值為0.478(P0.0001)。2.TLR4陽性的乳腺癌細胞具有干性特征(1)流式分選TLR4+MCF-7細胞(luminal型),進行ALDH1的檢測,結果示:TLR4陽性的MCF-7細胞中,ALDH1陽性細胞比例高達76.0%;TLR4陰性MCF-7細胞中,ALDH1陽性細胞比例為2.30%;(2)檢測乳腺癌細胞系MDA-MB-231(三陰性乳腺癌),TLR4陽性細胞比例占ALDH1的69.4%;(3)分選的TLR4陽性的乳腺癌細胞MCF-7的干性轉錄因子OCT4、SOX2、Nanog的表達顯著增高,并且成球能力顯著增強;(4)TLR4陽性的MDA-MB-231的EMT相關分子Vimentin、β-catenin均表達顯著增高;(5)人乳腺癌免疫組化雙標實驗結果:乳腺癌細胞TLR4與ALDH1A1的表達共定位。3.HMGB1激活TLR4增強了luminal型乳腺癌細胞對Tamoxifen的耐藥性(1)Tamoxifen處理乳腺癌細胞MCF-7后,TLR4及干性轉錄因子OCT4、SOX2、Nanog表達增高,并呈劑量依賴;(2)CCK8檢測細胞毒性實驗顯示:TLR4陽性MCF-7細胞的tamoxifen抗性強于TLR4陰性MCF-7細胞;(3)HMGB1處理后,TLR4陽性MCF-7細胞的tamoxifen抗性顯著增強。4.HMGB1激活TLR4增強了三陰性乳腺癌細胞的侵襲轉移能力(1)Transwell實驗顯示:加入TLR4外源性激活劑LPS后,穿出的MDA-MB-231乳腺癌細胞數量明顯增多;(2)加入TLR4內源性激活劑HMGB1后,Transwell實驗顯示穿出的乳腺癌細胞數量也明顯增多;(3)加入TLR4的拮抗劑TAK-242后,穿出的乳腺癌細胞數量明顯減少;(4)當TLR4的配體HMGB1被拮抗后乳腺癌細胞MDA-MB-231的侵襲能力顯著減弱:GLY(HMGB1拮抗劑)處理后,Transwell實驗顯示穿出的乳腺癌細胞數量明顯減少。5.人乳腺癌組織標本中TLR4及HMGB1的表達狀況及聯合檢測意義(1)人乳腺癌標本中TLR4高表達患者的乳腺癌淋巴結轉移率顯著增高,但TLR4高表達組乳腺癌患者的總體生存期和無病生存期與低表達組無明顯差異(p值分別為0.751和0.162);在luminal型乳腺癌和三陰性乳腺癌TLR4高表達患者也未檢出有顯著臨床意義;(2)HMGB1蛋白(TLR4內源性配體)表達主要定位在細胞核和細胞漿,HMGB1在細胞核高表達比率75.4%(144/191),在細胞漿高表達比率為50.3%(96/191);(3)HMGB1細胞漿高表達組的腫瘤體積增大,KI-67表達增高(P0.05),而HMGB1在細胞核高表達組無顯著腫瘤惡性特征;(4)人乳腺癌標本中TLR4和HMGB1免疫組化雙標實驗結果顯示,乳腺癌細胞TLR4高表達細胞的細胞核HMGB1往往低表達,而TLR4低表達細胞的細胞核HMGB1高表達;(5)人乳腺癌標本中TLR4和HMGB1聯合檢測結果顯示:TLR4-HMGB1陽性組的乳腺癌淋巴結轉移、腫瘤大小、臨床分期均有顯著意義(P0.05),并且TLR4-HMGB1陽性組的總體生存率和無復發(fā)生存率均顯著低于TLR4-HMGB1陰性組(P0.05)。6.人乳腺癌組織標本中ASCL2的表達與TLR4表達顯著正相關,ASCL2高表達患者預后不良(1)免疫組化檢測人乳腺癌組織標本中ASCL2的表達,其免疫組化評分與TLR4的評分顯著正相關。(2)乳腺癌患者中,79例(41.4%)樣本檢測出ASCL2高表達,112例(58.6%)樣本ASCL2低表達。并且腫瘤組織中ALSCL2表達顯著高于癌旁組織。在乳腺癌細胞系中,ASCL2表達定位于乳腺癌細胞的細胞核和細胞漿。(3)ASCL2在乳腺癌中的表達同腫瘤惡性程度呈正相關。ASCL2表達情況與腫瘤大小、淋巴結轉移和Ki67的表達顯著相關,有統計學意義(P0.05),但與年齡、臨床分期、分子分型無顯著相關(P0.05)。(4)ASCL2是乳腺癌患者獨立的預后或復發(fā)指標。Kaplan-Meier分析表明ASCL2高表達是乳腺癌患者術總體生存率(Overallsurvival,OS)和無病生存率(Disease-free survival,DFS)的影響因素(P0.05)。多因素Cox回歸分析表明ASCL2表達水平是影響乳腺癌患者預后(HR=1.865,P=0.001)和復發(fā)(HR=1.278,P=0.055)的獨立因素。7.乳腺癌患者外周血TLR4基因檢測顯示TLR4是潛在的乳腺癌易感性檢測基因(1)在24例乳腺癌患者外周血TLR4基因檢測中,1例患者在Chr9:120474941(H179N)位置上存在雜合堿基突變,由CAC(編碼組氨酸)突變?yōu)锳AC(編碼天冬氨酸);(2)突變患者臨床信息顯示對Tamoxifen治療反應不佳。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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1 ;鈣粘素E水平低提示乳腺癌細胞轉移[J];中國腫瘤;2000年08期

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3 張嘉慶,王殊,喬新民;乳腺癌的現狀和遠景[J];中華外科雜志;2002年03期

4 張維彬,汪波,石靈春;中醫(yī)藥在現代乳腺癌治療中的運用[J];中國中西醫(yī)結合急救雜志;2002年01期

5 薛志勇;食物與乳腺癌[J];山東食品科技;2002年04期

6 王旬果,王建軍,鄭國華;乳腺癌相關標志物的研究進展[J];山東醫(yī)藥;2002年33期

7 陸尚聞;;男人也患乳腺癌[J];環(huán)境;2003年12期

8 ;新技術清晰拍攝早期乳腺癌細胞[J];上海生物醫(yī)學工程;2005年04期

9 田富國;郭向陽;張華一;;乳腺癌診治研究新進展[J];腫瘤研究與臨床;2005年S1期

10 馬濤,谷俊朝;血管內皮生長因子與乳腺癌的臨床研究進展[J];國外醫(yī)學(外科學分冊);2005年01期

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1 于永利;;抗乳腺癌免疫治療融合蛋白[A];中國免疫學會第四屆學術大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 郭紅飛;;中醫(yī)治療乳腺癌的策略[A];江西省中醫(yī)、中西醫(yī)結合腫瘤學術交流會論文集[C];2012年

3 龐朋沙;伍會健;;乳腺癌治療靶標的研究進展[A];北方遺傳資源的保護與利用研討會論文匯編[C];2010年

4 陸勁松;邵志敏;吳炅;韓企夏;沈鎮(zhèn)宙;;新型維甲酸抑制乳腺癌細胞的生長及誘導凋亡的機制研究[A];2000全國腫瘤學術大會論文集[C];2000年

5 劉愛國;胡冰;;乳腺癌臨床治療進展[A];安徽省抗癌協會第四次代表大會暨乳腺癌、肺癌專業(yè)委員會成立會議、安徽省腫瘤防治進展學術研討會論文匯編[C];2001年

6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現狀和遠景[A];第一屆全國中西醫(yī)結合乳腺疾病學術會議論文匯編[C];2002年

7 劉清俊;;乳腺癌綜合治療的新進展[A];山西省抗癌協會第六屆腫瘤學術交流會論文匯編[C];2003年

8 邵志敏;;21世紀乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學術大會教育論文集[C];2004年

9 陳松旺;張明;;乳腺癌治療的回顧與展望[A];西部地區(qū)腫瘤學學術會議論文匯編[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凱陽;王兆鉞;阮長耿;;組織因子途徑抑制物-2在乳腺癌細胞中的表達研究[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

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1 ;血檢有望揭示乳腺癌治療效果[N];醫(yī)藥經濟報;2004年

2 記者 鄭曉春;乳腺癌細胞擴散基因被找到[N];科技日報;2007年

3 中國軍事醫(yī)學科學院腫瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新療法[N];中國婦女報;2002年

4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補可消滅乳腺癌細胞[N];醫(yī)藥經濟報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 辛君;乳腺癌擴散基因“浮出水面”[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

7 記者 毛黎;美發(fā)現有效抑制乳腺癌細胞生長的分子[N];科技日報;2010年

8 記者 吳春燕　通訊員 王麗霞;乳腺癌治療將有新途徑[N];光明日報;2011年

9 王樂　沈基飛;我科學家發(fā)現導致乳腺癌耐藥的新標志物[N];科技日報;2011年

10 劉霞;一種天然分子能阻止乳腺癌惡化[N];科技日報;2011年

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1 徐輝;TLR4陽性乳腺癌細胞的干性特征及臨床意義[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

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1 杜文英;乳腺癌分子亞型的臨床與病理特點[D];鄭州大學;2011年

2 賈曉菲;彩色多普勒超聲與乳腺癌病理及免疫組化指標的相關性研究[D];內蒙古大學;2015年

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4 吳坤琳;TLR4/MyD88信號通路對乳腺癌侵襲性影響的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

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