發(fā)布時間：2018-02-13 03:00

  本文關鍵詞： 肝癌 衰老標記蛋白 甲基化 焦磷酸測序　出處：《山東醫(yī)藥》2017年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的選擇適宜的CpG位點用于焦磷酸測序法檢測肝癌衰老標記蛋白30(SMP30)啟動子甲基化。方法提取人肝癌細胞系SMCC-7721和BEL-7404的基因組DNA,設計針對SMP30基因序列1和序列2的擴增和測序引物,焦磷酸測序法檢測SMP30基因序列1和序列2中的CpG位點甲基化程度,并用Sanger測序法驗證序列2中出現(xiàn)的SNP位點。結(jié)果 SMCC-7721和BEL-7404細胞系中,SMP30基因序列1中6個CpG位點低甲基化,與SMP30基因低表達不符,且測序結(jié)果質(zhì)量評估均為失敗。SMP30基因序列2中6個CpG位點高甲基化,與SMP30基因低表達相符,前2個CpG位點均為通過,而后4個CpG位點均為失敗。去除第5和第6個CpG位點,只檢測SMP30基因序列2中poly(T)結(jié)構(gòu)前4個CpG位點,SMCC-7721細胞系中甲基化程度分別為100%、90%、100%和80%;BEL-7404細胞系中甲基化程度分別為100%、92%、100%和77%。除第3個CpG位點為失敗,其余CpG位點均為通過。Sanger測序顯示SMCC-7721和BEL-7404細胞系在第3個CpG位點前存在SNP位點,且均為A。結(jié)論焦磷酸測序時選擇靠近基因轉(zhuǎn)錄起始點上游且在poly(T)結(jié)構(gòu)之前的CpG位點,測得的SMP30啟動子甲基化值較準確。
[Abstract]:Objective to select suitable CpG loci for the detection of promoter methylation of aging marker protein 30 (SMP30) of hepatocellular carcinoma by pyrosequencing. Methods the genomic DNAs of human hepatoma cell lines SMCC-7721 and BEL-7404 were extracted, and primers for amplification and sequencing of SMP30 gene sequences 1 and 2 were designed. The methylation of CpG loci in sequence 1 and 2 of SMP30 gene was detected by pyrosequencing, and the SNP loci in sequence 2 were identified by Sanger sequencing. Results six CpG loci in sequence 1 of SMCC-7721 and BEL-7404 cell lines were hypomethylated. The results showed that 6 CpG loci in the failed SMP30 gene sequence 2 were hypermethylated, which were consistent with the low expression of SMP30 gene, and the first two CpG loci were passed. The last four CpG loci were all failed. The 5th and 6th CpG loci were removed. The methylation degree of SMCC-7721 cell line was 100% and 100% respectively in SMCC-7721 cell line. The methylation degree of SMCC-7721 cell line was 100% and 77%, respectively, except for the third CpG locus. The other CpG loci were SNP loci in SMCC-7721 and BEL-7404 cell lines in front of the third CpG locus by Sanger sequencing, and they were both SNP loci. Conclusion in pyrosequencing, CpG sites close to the upstream of the transcription start point and prior to the polytetral structure are selected for pyrosequencing. The methylation values of SMP30 promoter were more accurate.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學;
【基金】：國家自然科學基金委員會資助項目(81460432)
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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2 羅國容,劉啟福;自身血清抗體篩選人肝細胞癌抗原的分子辨認[J];中華醫(yī)學雜志;1999年06期

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6 ;離體培養(yǎng)的人體肝癌細胞系的建立[J];醫(yī)學研究通訊;1978年10期

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本文編號：1507170