本文關(guān)鍵詞： PcG 肝癌 自身抗體 多肽表位抗原　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的肝癌是目前我國發(fā)病率和致死率位居第二位的惡性腫瘤,每年約有30萬例新發(fā)肝癌,占全球50%以上。肝癌發(fā)展迅速、易轉(zhuǎn)移,是目前治療最困難、預(yù)后最差的惡性腫瘤之一。然而,相對(duì)于乳腺癌、肺癌和前列腺癌等其他類型的惡性腫瘤,至今仍缺乏對(duì)肝癌發(fā)病相關(guān)腫瘤標(biāo)志物分子及其信號(hào)網(wǎng)絡(luò)的深入認(rèn)識(shí)。近年來,腫瘤生物標(biāo)志物(TM)在惡性腫瘤的早期診斷、預(yù)后、治療及療效評(píng)價(jià)等方面的廣泛應(yīng)用為癌癥的診斷及治療提供了嶄新的思路。例如,25%的乳腺癌患者發(fā)生人表皮生長因子受體(HER)基因突變。在乳腺癌等多種癌癥診治中,針對(duì)HER2的分型診斷和治療取得了突出成果。Herceptin是針對(duì)HER2受體的人源化單克隆抗體,于1998年被美國FDA批準(zhǔn)用于乳腺癌的臨床治療,取得了令人鼓舞的療效。此外,在體內(nèi)/體外研究已證實(shí),Pertuzumab對(duì)HER2+卵巢癌、前列腺癌、肺癌和結(jié)腸癌細(xì)胞的殺傷作用。但除上述幾種癌癥外,尤其是肝癌等其他系統(tǒng)腫瘤中,并沒有和/或低頻率發(fā)生HER的激活。深入篩選和鑒定肝癌發(fā)病的關(guān)鍵分子將為臨床早期診斷及“個(gè)體化”治療提供潛在的靶點(diǎn)和策略,是攻克肝癌等惡性腫瘤的關(guān)鍵。近期研究表明,組蛋白甲基化修飾異常廣泛參與到HCC發(fā)生發(fā)展中。PcG蛋白是一組通過染色質(zhì)修飾調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄抑制因子,最初在果蠅中被發(fā)現(xiàn),是果蠅發(fā)育時(shí)維持同源盒基因穩(wěn)定表達(dá)的重要因子。PcG家族根據(jù)其功能可以分為PRC 1及PRC2兩種。PRC2家族包括EZH2、SUZ12及EED等,主要催化H3K27組蛋白甲基化共價(jià)修飾過程；而PRC1家族則包括Bmi1、CBX8及Ringl等,主要介導(dǎo)已形成的H3K27組蛋白甲基化共價(jià)修飾的延伸。雖然研究表明,PcG家族是潛在的肝癌分型診斷和治療靶點(diǎn),但由于其核蛋自檢測(cè)的困難性,對(duì)其成為有效的臨床診斷標(biāo)志物提出了挑戰(zhàn)。近年來,自身抗體作為癌癥早期診斷的標(biāo)志物已得到廣泛的認(rèn)可,已經(jīng)在歐洲和北美洲進(jìn)行商業(yè)應(yīng)用。本研究采用免疫組化的方法檢測(cè)癌組織和癌旁組織中PcG家族蛋白表達(dá)水平,采用新的ELISA法檢測(cè)肝癌患者血清中PcG家族及其相關(guān)靶基因的自身抗體的水平,研究其在肝癌發(fā)病中的生物學(xué)作用,尋找肝癌診治的有效生物標(biāo)志物。方法本研究選擇PcG家族及其相關(guān)靶基因?yàn)槟[瘤相關(guān)抗原。利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫及軟件綜合分析蛋白結(jié)構(gòu)和性質(zhì),設(shè)計(jì)以上分子的多肽表位抗原片段,利用優(yōu)化的ELISA法檢測(cè)肝腺癌患者血清中以上多肽表位抗原的相應(yīng)抗體的水平,同時(shí)采用免疫組化的方法檢測(cè)癌組織和癌旁組織中PcG家族蛋白表達(dá)水平。選擇健康體檢者為對(duì)照組,以100例健康對(duì)照混合血為質(zhì)控樣本,采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、kaplan meier相關(guān)分析和ROC曲線分析。結(jié)果1.PcG家族蛋白在肝癌中的表達(dá)：(1)肝癌中PcG家族蛋白的表達(dá)分析：我們檢測(cè)了110例肝癌組織,癌組織Bmil表達(dá)高于癌旁組織的患者占46.15%(51/110),癌組織與癌旁組織Bmil表達(dá)無差異的患者占53.85%(59/110)。癌組織CBX8表達(dá)高于癌旁組織的患者占48.18%(53/110),癌組織與癌旁組織CBX8表達(dá)無差異的患者占51.82%(57/110)。癌組織EZH2表達(dá)高于癌旁組織的患者占47.27%(52/110),癌組織與癌旁組織Bmil表達(dá)無差異的患者占52.73%(58/110)。(2)進(jìn)一步研究,我們根據(jù)免疫組化中BMI1、CBX8和EZH2表達(dá)量的差異,將110例臨床肝癌標(biāo)本中的生存曲線相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示,癌組織BMI1表達(dá)高于癌旁組織的患者無瘤存活率與癌組織與癌旁組織CBX8表達(dá)無差異的患者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖3.7P=0.841 log-rank test);癌組織CBX8表達(dá)高于癌旁組織的患者,其無瘤存活率明顯低于癌組織與癌旁組織CBX8表達(dá)無差異的患者(圖3.9p=0.032 log-rank test);癌組織EZH2表達(dá)同樣高于癌旁組織的患者無瘤存活率明顯低于癌組織與癌旁組織EZH2表達(dá)無差異的患者(圖3.12p=0.009 log-rank test)2.PcG家族基因及其關(guān)鍵靶基因：(1)多肽表位抗原的設(shè)計(jì)片段：P16:H-NSYGRLVVLHRAGARLDVRDAWGRLPVDLA-OH; C-myc:H-RVKLDSVRVLRQISNNRKCFELLPTPPLSPS-OH P53.-H-LIRVEGNLRVEYPGTRVRAMAIYKQSQHMTE-OH; BMI1:H-AGELESDSGSDKANSPHPSADAANGSNEDRGED-OH CBX8:H-TCRAEAPRDRDRKGRKLDDTPSGAGKFPED-OH EZH2:H-DDGDDPEEREEKQKD YQPCDHPRQPCDSSCPED-OH(2)自身抗體表達(dá)：肝癌患者血漿中EZH2自身抗體水平在惡性腫瘤組和健康對(duì)照組之間無明顯差異(P0.05); BMI1和CBX8自身抗體水平在惡性腫瘤組明顯高于健康對(duì)照組(P0.05；P0.05)；在關(guān)鍵靶基因檢測(cè)中,我們發(fā)現(xiàn)肝癌患者血漿中P16, C-myc和P53自身抗體表達(dá)顯著高于健康對(duì)照(P0.05; F0.05;采用ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)取特異度90%時(shí)各個(gè)抗原在惡性腫瘤組中的敏感度在12-30%之間。結(jié)論(1)在肝癌組織中,PcG家族BMI1、CBX8和EZH2蛋白表達(dá)出現(xiàn)不同程度的升高,提示它們可能是肝癌潛在的診治標(biāo)志物。(2)PcG家族BMI1、CBX8和EZH2蛋白肝癌中表達(dá)升高與肝癌患者的生存期顯著相關(guān),提示PcG蛋白的表達(dá)水平可能與患者預(yù)后密切相關(guān)。(3)在肝癌患者外周血中,除EZH2外,其他5種基因的白身抗體水平顯著增高,提示PcG家族及其關(guān)鍵調(diào)控靶基因的自身抗體可能是全新的肝癌診斷標(biāo)志物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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