本文關(guān)鍵詞： PKCζ 前列腺癌 腫瘤微環(huán)境 巨噬細(xì)胞 極化　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的前列腺癌(prostate cancer,PCa)在全球范圍內(nèi)十分常見。探究有效的前腺癌治療策略,并尋求新的治療靶點(diǎn),成為目前前列腺癌的研究熱點(diǎn)。隨著研究的深入,人們研究關(guān)注的視角也逐步由腫瘤細(xì)胞本身擴(kuò)展到腫瘤所在的微環(huán)境,試圖通過腫瘤細(xì)胞所處的周圍環(huán)境進(jìn)一步了解或明確腫瘤發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制。巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中浸潤(rùn)最豐富的炎癥細(xì)胞,被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated macrophages,TAMs),分為 M1 型(抗腫瘤)和 M2 型(促腫瘤)。然而,腫瘤細(xì)胞中哪些關(guān)鍵性信號(hào)分子或信號(hào)軸調(diào)控了巨噬細(xì)胞向腫瘤周圍浸潤(rùn)、極化等問題目前仍不清楚。PKCζ參與并調(diào)控多種腫瘤的不同細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路,是前列腺癌的一個(gè)抑癌基因,但PKCζ是否參與調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的免疫抑制炎癥反應(yīng)以及進(jìn)而對(duì)腫瘤功能的影響,目前尚不清楚。本研究的主要目的是探討前列腺癌PKCζ的表達(dá)是否可以通過影響前列腺癌微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集以及極化等生物學(xué)功能,從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展;同時(shí)進(jìn)一步探究其具體的作用機(jī)制,旨在為腫瘤免疫治療提供新的思路。研究?jī)?nèi)容與方法1.前列腺癌PKCζ的表達(dá)對(duì)前列腺腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集和極化的影響1.1免疫組織化學(xué)染色分析正常前列腺組織和前列腺癌組織中PKCζ的表達(dá)與CD206+ M2巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)情況1.2 siPKCζ干擾效果和質(zhì)粒CA-PKCζ過表達(dá)效果的驗(yàn)證Lip3000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染分為兩組:siCTL、siPKCζ;Hilymax轉(zhuǎn)染質(zhì)粒也分為兩組:CON、CA-PKCζ,分別轉(zhuǎn)染PC3和DU145,48 h后分別提取這4組的RNA和蛋白驗(yàn)證mRNA水平和蛋白表達(dá)水平。1.3前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達(dá)對(duì)巨噬細(xì)胞RAW264.7的趨化遷移的影響干擾或過表達(dá)48 h后收集前列腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)上清(CM)。通過體外細(xì)胞趨化募集實(shí)驗(yàn),觀察上述各組條件培養(yǎng)基體外趨化巨噬細(xì)胞RAW264.7的作用。1.4前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達(dá)對(duì)巨噬細(xì)胞RAW264.7向M2型巨噬細(xì)胞極化的影響采用體外細(xì)胞共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),將巨噬細(xì)胞與干擾或過表達(dá)PKCζ的前列腺癌細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。1.5 M2巨噬細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞遷移的影響收集經(jīng)和未經(jīng)IL-4(40ng/ml)預(yù)處理48 h的巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)上清,定義為M2-CM和M0-CM,比較兩者對(duì)前列腺癌細(xì)胞的遷移作用。2.前列腺癌PKCζ的表達(dá)調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞趨化和極化相關(guān)分子機(jī)制2.1巨噬細(xì)胞趨化相關(guān)細(xì)胞因子和極化相關(guān)細(xì)胞因子的篩選在前列腺癌細(xì)胞干擾PKCζ后檢測(cè)巨噬細(xì)胞趨化相關(guān)細(xì)胞因子和極化相關(guān)細(xì)胞因子的mRNA水平。2.2進(jìn)一步明確前列腺癌細(xì)胞PKCζ對(duì)IL-4和IL-10的表達(dá)和分泌的作用,以及對(duì)巨噬細(xì)胞向M2型極化的影響在前列腺癌細(xì)胞系干擾PKCζ后通過RT-QPCR檢測(cè)1I-4和IL-10的mRNA水平,ELISA檢測(cè)CM的IL-4和IL-10的蛋白分泌水平。在巨噬細(xì)胞siCTL和siPKCζ共培養(yǎng)體系中加入IL-4和(或)IL-10的中和抗體,分為五組:siCTL、siPKCζ、siPKCζ+Ab-IL-4、siPKCζ+Ab-IL-10、siPKCζ+Ab-IL-4+Ab-IL-10。研究結(jié)果1.前列腺癌PKCζ的表達(dá)抑制前列腺腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集和M2型極化1.1前列腺癌組織標(biāo)本中PKCζ的表達(dá)與腫瘤分級(jí)以及CD206+ M2巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P0.001)。1.2成功驗(yàn)證小干擾RNA-siPKCζ和質(zhì)粒CA-PKCζ過表達(dá)效果1.3敲低前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達(dá)可促進(jìn)巨噬細(xì)胞RAW264.7的趨化遷移(P0.05),而過表達(dá)PKCζ可以抑制RAW264.7的趨化遷移(P0.05)。1.4敲低前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達(dá)可促進(jìn)巨噬細(xì)胞RAW264.7向M2型巨噬細(xì)胞極化。M2的標(biāo)記(CD206,CD163,Arg-1,Mrc-2)的mRNA水平明顯高于共培養(yǎng)對(duì)照組siCTL(P0.05)。1.5 M2巨噬細(xì)胞促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的遷移(P0.001)。2.前列腺癌PKCζ的表達(dá)負(fù)向調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞募集和極化相關(guān)的分子機(jī)制2.1巨噬細(xì)胞趨化相關(guān)細(xì)胞因子和極化相關(guān)細(xì)胞因子的篩選,IL-4和IL-10的表達(dá)明顯增加。2.2前列腺癌細(xì)胞PKCζ負(fù)向調(diào)控前列腺癌細(xì)胞IL-4和IL-10的表達(dá)和分泌(P0.05),進(jìn)而抑制巨噬細(xì)胞向M2型極化。結(jié)論1.前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達(dá)抑制前列腺腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集和M2型極化。2.前列腺癌細(xì)胞PKCζ負(fù)向調(diào)控前列腺癌細(xì)胞IL-4和IL-10的表達(dá)和分泌,進(jìn)而抑制巨噬細(xì)胞向M2型極化。
[Abstract]:It is not clear whether the expression of PKC zeta in prostate cancer cells has been involved in the regulation of tumor microenvironment and its effect on tumor function . The main aim of this study is to investigate whether the expression of PKC - zeta in prostate cancer cells can influence the tumor ' s invasion and polarization . 2 . The expression and secretion of IL - 4 , IL - 10 and IL - 10 in prostate cancer cells were significantly higher than that of control group siCTL ( P0.05 ) . Conclusion 1 . PKC - zeta expression of prostate cancer cells can regulate the expression and secretion of IL - 4 and IL - 10 in prostate cancer cells .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 許順江,叢斌;PKCζ激活機(jī)制及其功能[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2005年04期

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本文編號(hào)：1503559