本文關(guān)鍵詞： PKCζ 前列腺癌 腫瘤微環(huán)境 巨噬細(xì)胞 極化　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景與目的前列腺癌(prostate cancer,PCa)在全球范圍內(nèi)十分常見。探究有效的前腺癌治療策略,并尋求新的治療靶點,成為目前前列腺癌的研究熱點。隨著研究的深入,人們研究關(guān)注的視角也逐步由腫瘤細(xì)胞本身擴展到腫瘤所在的微環(huán)境,試圖通過腫瘤細(xì)胞所處的周圍環(huán)境進一步了解或明確腫瘤發(fā)生發(fā)展的可能機制。巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中浸潤最豐富的炎癥細(xì)胞,被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated macrophages,TAMs),分為 M1 型(抗腫瘤)和 M2 型(促腫瘤)。然而,腫瘤細(xì)胞中哪些關(guān)鍵性信號分子或信號軸調(diào)控了巨噬細(xì)胞向腫瘤周圍浸潤、極化等問題目前仍不清楚。PKCζ參與并調(diào)控多種腫瘤的不同細(xì)胞內(nèi)信號通路,是前列腺癌的一個抑癌基因,但PKCζ是否參與調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的免疫抑制炎癥反應(yīng)以及進而對腫瘤功能的影響,目前尚不清楚。本研究的主要目的是探討前列腺癌PKCζ的表達是否可以通過影響前列腺癌微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集以及極化等生物學(xué)功能,從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展;同時進一步探究其具體的作用機制,旨在為腫瘤免疫治療提供新的思路。研究內(nèi)容與方法1.前列腺癌PKCζ的表達對前列腺腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集和極化的影響1.1免疫組織化學(xué)染色分析正常前列腺組織和前列腺癌組織中PKCζ的表達與CD206+ M2巨噬細(xì)胞的浸潤情況1.2 siPKCζ干擾效果和質(zhì)粒CA-PKCζ過表達效果的驗證Lip3000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染分為兩組:siCTL、siPKCζ;Hilymax轉(zhuǎn)染質(zhì)粒也分為兩組:CON、CA-PKCζ,分別轉(zhuǎn)染PC3和DU145,48 h后分別提取這4組的RNA和蛋白驗證mRNA水平和蛋白表達水平。1.3前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達對巨噬細(xì)胞RAW264.7的趨化遷移的影響干擾或過表達48 h后收集前列腺癌細(xì)胞的培養(yǎng)上清(CM)。通過體外細(xì)胞趨化募集實驗,觀察上述各組條件培養(yǎng)基體外趨化巨噬細(xì)胞RAW264.7的作用。1.4前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達對巨噬細(xì)胞RAW264.7向M2型巨噬細(xì)胞極化的影響采用體外細(xì)胞共培養(yǎng)實驗,將巨噬細(xì)胞與干擾或過表達PKCζ的前列腺癌細(xì)胞進行共培養(yǎng)。1.5 M2巨噬細(xì)胞對前列腺癌細(xì)胞遷移的影響收集經(jīng)和未經(jīng)IL-4(40ng/ml)預(yù)處理48 h的巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)上清,定義為M2-CM和M0-CM,比較兩者對前列腺癌細(xì)胞的遷移作用。2.前列腺癌PKCζ的表達調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞趨化和極化相關(guān)分子機制2.1巨噬細(xì)胞趨化相關(guān)細(xì)胞因子和極化相關(guān)細(xì)胞因子的篩選在前列腺癌細(xì)胞干擾PKCζ后檢測巨噬細(xì)胞趨化相關(guān)細(xì)胞因子和極化相關(guān)細(xì)胞因子的mRNA水平。2.2進一步明確前列腺癌細(xì)胞PKCζ對IL-4和IL-10的表達和分泌的作用,以及對巨噬細(xì)胞向M2型極化的影響在前列腺癌細(xì)胞系干擾PKCζ后通過RT-QPCR檢測1I-4和IL-10的mRNA水平,ELISA檢測CM的IL-4和IL-10的蛋白分泌水平。在巨噬細(xì)胞siCTL和siPKCζ共培養(yǎng)體系中加入IL-4和(或)IL-10的中和抗體,分為五組:siCTL、siPKCζ、siPKCζ+Ab-IL-4、siPKCζ+Ab-IL-10、siPKCζ+Ab-IL-4+Ab-IL-10。研究結(jié)果1.前列腺癌PKCζ的表達抑制前列腺腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集和M2型極化1.1前列腺癌組織標(biāo)本中PKCζ的表達與腫瘤分級以及CD206+ M2巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P0.001)。1.2成功驗證小干擾RNA-siPKCζ和質(zhì)粒CA-PKCζ過表達效果1.3敲低前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達可促進巨噬細(xì)胞RAW264.7的趨化遷移(P0.05),而過表達PKCζ可以抑制RAW264.7的趨化遷移(P0.05)。1.4敲低前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達可促進巨噬細(xì)胞RAW264.7向M2型巨噬細(xì)胞極化。M2的標(biāo)記(CD206,CD163,Arg-1,Mrc-2)的mRNA水平明顯高于共培養(yǎng)對照組siCTL(P0.05)。1.5 M2巨噬細(xì)胞促進前列腺癌細(xì)胞的遷移(P0.001)。2.前列腺癌PKCζ的表達負(fù)向調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞募集和極化相關(guān)的分子機制2.1巨噬細(xì)胞趨化相關(guān)細(xì)胞因子和極化相關(guān)細(xì)胞因子的篩選,IL-4和IL-10的表達明顯增加。2.2前列腺癌細(xì)胞PKCζ負(fù)向調(diào)控前列腺癌細(xì)胞IL-4和IL-10的表達和分泌(P0.05),進而抑制巨噬細(xì)胞向M2型極化。結(jié)論1.前列腺癌細(xì)胞PKCζ的表達抑制前列腺腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞的募集和M2型極化。2.前列腺癌細(xì)胞PKCζ負(fù)向調(diào)控前列腺癌細(xì)胞IL-4和IL-10的表達和分泌,進而抑制巨噬細(xì)胞向M2型極化。
[Abstract]:It is not clear whether the expression of PKC zeta in prostate cancer cells has been involved in the regulation of tumor microenvironment and its effect on tumor function . The main aim of this study is to investigate whether the expression of PKC - zeta in prostate cancer cells can influence the tumor ' s invasion and polarization . 2 . The expression and secretion of IL - 4 , IL - 10 and IL - 10 in prostate cancer cells were significantly higher than that of control group siCTL ( P0.05 ) . Conclusion 1 . PKC - zeta expression of prostate cancer cells can regulate the expression and secretion of IL - 4 and IL - 10 in prostate cancer cells .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 許順江,叢斌;PKCζ激活機制及其功能[J];生理科學(xué)進展;2005年04期

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本文編號：1503559