發(fā)布時(shí)間：2018-02-10 12:36

  本文關(guān)鍵詞： 遷移和侵襲 miR-222 MST3 Exosome 間充質(zhì)干細(xì)胞 腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的主要原因之一,了解其分子機(jī)制將有助于篩選出新的判斷預(yù)后的生物標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)。本論文以兩種常見的消化道腫瘤結(jié)直腸癌及肝癌為研究對(duì)象,對(duì)其可能的轉(zhuǎn)移機(jī)制進(jìn)行了探討。在論文的第一部分,系統(tǒng)地研究了 miR-222促進(jìn)結(jié)直腸癌遷移和侵襲的作用機(jī)制及miR-222及其靶基因的臨床意義。通過體外細(xì)胞培養(yǎng)的Transwell實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)小鼠腫瘤模型研究了 miR-222對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響,通過生物信息學(xué)和雙熒光素酶報(bào)告發(fā)現(xiàn)miR-222可特異性靶向MST3的3'UTR,通過細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了 MST3基因?qū)Y(jié)直腸癌細(xì)胞系遷移和侵襲能力的影響,并初步探討了 MST3影響結(jié)直腸癌遷移和侵襲的可能為通過調(diào)節(jié)Paxillin磷酸化,而MST3和Paxillin通路的作用機(jī)制需進(jìn)一步深入研究。在臨床研究方面,回顧性收集在北京協(xié)和醫(yī)院行手術(shù)切除的結(jié)直腸癌患者的臨床病理資料及隨訪結(jié)果,發(fā)現(xiàn)在臨床標(biāo)本中miR-222與MST3的表達(dá)成負(fù)相關(guān),MST3在結(jié)直腸癌瘤旁正常組織中表達(dá)較腫瘤組織高,生存分析發(fā)現(xiàn)MST3表達(dá)陽性患者的無病生存期長于陰性患者,但MST3在腫瘤組織中的表達(dá)對(duì)預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的影響仍需進(jìn)一步研究。研究結(jié)果表明miR-222通過調(diào)節(jié)MST3,在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。因此,miR-222有成為結(jié)直腸癌新型治療靶標(biāo)的應(yīng)用前景。第二部分,初步研究了肝癌HepG2細(xì)胞分泌的Exosome對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cell,MSC)的分化的影響及其相互作用。腫瘤相關(guān)的肌成纖維細(xì)胞(Cancer-Associated Myofibroblasts,CAF)是腫瘤組織中最常見的非腫瘤細(xì)胞類型,在腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移、血管新生和腫瘤基質(zhì)形成中扮演了重要的角色,阻斷腫瘤組織中CAF的形成可能會(huì)抑制腫瘤生長,為腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)。我國的肝癌通常是在慢性肝炎-肝纖維化的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的,所以CAF等成纖維類的細(xì)胞在肝癌中的作用更為顯著,而其中CAF的來源并沒有一致的觀點(diǎn)。我們的研究發(fā)現(xiàn)HepG2細(xì)胞分泌的Exosome可促進(jìn)人脂肪來源MSC表達(dá)CAF特征性蛋白。通過MTS增殖實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)證明CAF可增強(qiáng)HepG2的增殖、遷移和侵襲能力,并促進(jìn)HepG2細(xì)胞表達(dá)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因。因此,肝癌細(xì)胞HepG2分泌的Exosome可以誘導(dǎo)MSC分化為CAF,而CAF又可促進(jìn)HepG2的增殖、遷移和侵襲,為肝癌治療研究提供了新的靶點(diǎn)及研究方向。本研究對(duì)進(jìn)一步揭示惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制提供了依據(jù),對(duì)于患者預(yù)后判斷具有一定的指導(dǎo)價(jià)值。
[Abstract]:Distant metastasis is one of the leading causes of death in patients with malignant tumors. Understanding its molecular mechanism will help to screen new biomarkers and therapeutic targets for prognosis. In this study, two common gastrointestinal cancers, colorectal cancer and liver cancer, were studied. In the first part of this paper, the possible transfer mechanism is discussed. The mechanism of miR-222 promoting the migration and invasion of colorectal cancer and the clinical significance of miR-222 and its target gene were studied systematically. The effect of miR-222 on colorectal cancer cells was studied by Transwell experiment in vitro and mouse tumor model in vivo. The effects of migration and invasion, The results of bioinformatics and double luciferase report showed that miR-222 could specifically target MST3, and the effect of MST3 gene on the migration and invasion of colorectal cancer cell lines was verified by cell function experiments. The possible mechanism of MST3 affecting the migration and invasion of colorectal cancer is to regulate the phosphorylation of Paxillin, but the mechanism of MST3 and Paxillin pathway needs further study. The clinicopathological data and follow-up results of patients with colorectal cancer undergoing surgical resection in Peking Union Hospital were retrospectively collected. It was found that the expression of miR-222 and MST3 in clinical specimens was negatively correlated with the expression of MST3 in normal tissues adjacent to colorectal cancer. Survival analysis showed that the disease-free survival of patients with positive MST3 expression was longer than that of patients with negative MST3 expression. However, the effect of MST3 expression in tumor tissues on prognosis of colorectal cancer patients needs further study. The results show that miR-222 plays a key role in metastasis of colorectal cancer by regulating MST3. Therefore, miR-222 may become a new type of colorectal cancer. Prospects for the application of therapeutic targets type type. Part 2, The effects of Exosome secreted by HepG2 cells from hepatocellular carcinoma on the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) and their interaction were studied. The tumor associated myofibroblast, Cancer-Associated Myofibroblast cells (Cafs), is the most common type of non-tumor cells in tumor tissues. Metastasis, angiogenesis and tumor matrix formation play an important role. Blocking the formation of CAF in tumor tissue may inhibit tumor growth. To provide a new target for cancer therapy. Liver cancer in China is usually developed on the basis of chronic hepatitis and liver fibrosis, so fibroblasts such as CAF play a more significant role in liver cancer. We found that Exosome secreted by HepG2 cells can promote the expression of CAF characteristic protein by MSC derived from human fat. CAF can enhance the proliferation of HepG2 by MTS proliferation test and Transwell assay. The ability of migration and invasion, and the expression of genes related to epithelial mesenchymal transformation in HepG2 cells were promoted. Therefore, Exosome secreted by HepG2 could induce the differentiation of MSC into CAF, while CAF could promote the proliferation, migration and invasion of HepG2. This study provides a new target and research direction for the treatment of liver cancer. This study provides a basis for further revealing the mechanism of malignant tumor metastasis, and has a certain guiding value for the prognosis of patients.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735

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本文編號(hào)：1500526