本文關(guān)鍵詞： 膠質(zhì)瘤 miR-454 PDK1 細(xì)胞增殖　出處：《山東大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：膠質(zhì)瘤為目前世界范圍內(nèi)顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤,具有浸潤性生長、手術(shù)后易復(fù)發(fā)等特點。膠質(zhì)瘤通常起源于神經(jīng)間質(zhì)細(xì)胞或者神經(jīng)實質(zhì)細(xì)胞,按多種方法均可將膠質(zhì)瘤進(jìn)行分類,臨床上的膠質(zhì)瘤以星形細(xì)胞瘤最為常見。世界衛(wèi)生組織按照惡性化程度將臨床上膠質(zhì)瘤劃分為Ⅰ-Ⅳ級,其中Ⅰ級膠質(zhì)瘤屬于良性腫瘤,手術(shù)治療能夠?qū)⑵淝宄?同時其較少出現(xiàn)惡性進(jìn)展,患者預(yù)后效果較好；而Ⅱ、Ⅲ級膠質(zhì)瘤惡性化程度較高,其特點是具有一定的侵襲性；Ⅳ級的惡性化程度最高,相較于Ⅱ、Ⅲ級膠質(zhì)瘤更具有侵襲性,患者的預(yù)后情況也并不理想。通常將原發(fā)于腦實質(zhì)內(nèi)的定義為原發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤,而繼發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是由低級別的膠質(zhì)瘤,如Ⅱ、Ⅲ級膠質(zhì)瘤進(jìn)一步惡變所形成的。盡管現(xiàn)在已有運用手術(shù)切除與放化療相結(jié)合的綜合治療手段對膠質(zhì)瘤患者進(jìn)行治療,然而患者的術(shù)后生存期仍然僅為1年左右。部分學(xué)者認(rèn)為,膠質(zhì)瘤之所以術(shù)后經(jīng)�！八阑覐�(fù)燃”,有一個重要原因就是膠質(zhì)瘤干細(xì)胞能夠“抗拒”放化療的殺傷。隨著組織病理學(xué)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展,近年來越來越多的學(xué)者將焦點集中于對于膠質(zhì)瘤的基礎(chǔ)研究,同時還對膠質(zhì)瘤的臨床病理異質(zhì)性、基因的異常表達(dá)以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路紊亂等一系列分子機制進(jìn)行了深入探索,上述研究有助于我們更全面透徹的了解膠質(zhì)瘤的發(fā)生和進(jìn)展機制,這在臨床上對膠質(zhì)瘤患者的診斷和治療具有十分重要的意義。同時,尋找新的治療膠質(zhì)瘤以及膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的藥物或者分子靶向治療手段是學(xué)界研究的熱點、難點。大量研究證實,膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中,多種微小RNA (microRNAs, miRNAs)能夠?qū)ζ洚a(chǎn)生或正或負(fù)的調(diào)節(jié)作用,miRNAs這種獨特的作用機制引起了學(xué)界的廣泛關(guān)注。MiRNAs是長度在20-25個核苷酸(nucleotide, nt)范圍內(nèi)的一類內(nèi)源性單鏈非編碼小RNA, miRNA降解靶mRNA或者抑制其翻譯的機制,是因為miRNAs與靶mRNA的3’非編碼區(qū)能完全或者不完全互補,從而對機體生長發(fā)育、細(xì)胞分化、增殖以及凋亡等生理過程進(jìn)行調(diào)控。因此,miRNAs就會和它的靶基因相作用形成一個重要的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),這個調(diào)控網(wǎng)絡(luò)不僅對細(xì)胞產(chǎn)生重要的影響,而且還對機體的生命活動產(chǎn)生多種影響。最近的研究發(fā)現(xiàn),有超過50%的miRNAs定位于基因組的脆弱位點或者腫瘤相關(guān)基因區(qū)域,表明miRNAs可能與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程密切相關(guān)。越來越多的研究證實miRNAs可對惡性腫瘤的生成和進(jìn)展造成影響,這些影響主要表現(xiàn)為以下三個方面：首先,部分miRNAs在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有促癌基因的作用；其次,部分miRNAs可能抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,具有抑癌基因的功能；再次,某些致瘤病毒所編碼的miRNAs能夠參與相關(guān)惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展,而病毒在其宿主體內(nèi)存活,亦可對機體細(xì)胞中的miRNA勺表達(dá)進(jìn)行調(diào)控,從而參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。目的：研究miR-454通過抑制PDKl表達(dá)從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的相關(guān)作用機制,以期為臨床治療膠質(zhì)瘤提供新的有效靶點。方法：(1)熒光定量PCR檢測50例膠質(zhì)瘤患者瘤組織和人多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)U87、T98G、A-172、LN18以及LN-229細(xì)胞系中miR-454和PDK1 mRNA表達(dá)；用western blot檢測膠質(zhì)瘤組織中PDK1蛋白的表達(dá)；分析膠質(zhì)瘤組織中PDK1蛋白的表達(dá)與臨床病理分級的關(guān)系。(2)向膠質(zhì)瘤T98G和LN18細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染miR-454 mimic(使用化學(xué)方法合成,模擬生物體內(nèi)源的miRNA)和miR-454 inhibitor(使用化學(xué)方法合成的針對miRNA的抑制劑),MTT法檢測細(xì)胞的增殖活性；平板克隆形成實驗檢測細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測對細(xì)胞周期的影響。(3)用生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-454的靶基因,檢測共轉(zhuǎn)染miR-454 mimic和PDK1-3'UTR/PDK1-3'UTR-mut(突變型)的T98G和I.N18細(xì)胞中熒光素酶的含量；western blot法檢測轉(zhuǎn)染miR-454 mimic 和 miR-454 inhibitor后細(xì)胞中PDK1、Cyclin D1、p21、p-pRb、pRb蛋白的表達(dá)。結(jié)果：(1)膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系中miR-454 mRNA的表達(dá)顯著低于相應(yīng)正常腦組織和細(xì)胞系；膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞系中PDK1 mRNA及其編碼蛋白的含量顯著高于相應(yīng)正常腦組織及細(xì)胞系；LSD法分析表明,Ⅲ級和Ⅳ級膠質(zhì)瘤組織中PDK1蛋白的表達(dá)顯著高于I級和II級；Spearman分析表明膠質(zhì)瘤患者瘤組織中PDK1蛋白表達(dá)與臨床病理分級呈正相關(guān),即在高級別病例組中高表達(dá),在低級別病例組中低表達(dá)。(2)成功構(gòu)建miR-454過表達(dá)和miR-454表達(dá)抑制細(xì)胞模型；上調(diào)細(xì)胞中miR-454的含量能夠抑制人膠質(zhì)瘤LN18和T98G細(xì)胞增殖,下調(diào)則能對上述兩種細(xì)胞的增殖起到促進(jìn)作用；miR-454能夠?qū)⑷四z質(zhì)瘤LN18和T98G細(xì)胞周期阻滯在G1/G0期,同時減少人膠質(zhì)瘤LN18和T98G細(xì)胞S期的數(shù)量。(3)PDK1為miR-454的靶基因；miR-454的含量增高后能夠顯著抑制人膠質(zhì)瘤T98G和LN18細(xì)胞中PDK1的表達(dá)；miR-454能顯著抑制T98G和LN18細(xì)胞中PDK1、Cyclin D1、p-pRb蛋白的表達(dá),上調(diào)p21蛋白的含量,但對pRb蛋白的表達(dá)無顯著影響。結(jié)論：(1)PDK1蛋白在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與臨床病理分級呈正相關(guān)；(2)miR-454在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著抑癌基因的作用；(3)miR-454對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的抑制作用是通過抑制PDK1的表達(dá)實現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐俊杰;于洪泉;國巍;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;;西蘭花多肽對大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的影響[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2012年11期

2 徐俊杰;于洪泉;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;劉興吉;;西蘭花多肽對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

3 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質(zhì)瘤細(xì)胞化學(xué)增敏作用實驗研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

4 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外生長的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

5 梁一鳴,郭國慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的調(diào)節(jié)[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2001年02期

6 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子抗體對膠質(zhì)瘤生長的影響[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年02期

7 黃強,董軍;膠質(zhì)瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經(jīng)外科雜志;2001年04期

8 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內(nèi)皮生長因子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)[J];腫瘤;2002年06期

9 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質(zhì)瘤對親細(xì)胞非均質(zhì)分子脂質(zhì)和幾種藥物敏感性的比較[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

10 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內(nèi)皮生長因子抗體抑制膠質(zhì)瘤生長的實驗研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質(zhì)微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移的體外實驗研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質(zhì)瘤的生物治療-從實驗室到臨床[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書;李新軍;;與膠質(zhì)瘤代謝通路相關(guān)的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修飾膠質(zhì)瘤細(xì)胞疫苗的抗腫瘤免疫反應(yīng)[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

5 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強;陳鋒;杜權(quán);;骨橋蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其信號傳導(dǎo)途徑[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

6 張震;徐克;;低強度超聲誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的體外實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

7 蔣偉峰;高方友;尹浩;;白細(xì)胞介素-17及其受體在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義[A];2013年貴州省神經(jīng)外科年會論文集[C];2013年

8 徐慶生;張小兵;周永慶;;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及其放療敏感性[A];2011年浙江省神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

9 楊孔賓;趙世光;劉炳學(xué);陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

10 黃強;;膠質(zhì)瘤生成細(xì)胞研究[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報;2011年

2 記者 匡遠(yuǎn)深;讓膠質(zhì)瘤干細(xì)胞不再“繁殖”[N];健康報;2011年

3 張獻(xiàn)懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報;2007年

4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)與應(yīng)用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 王德江；劉藏；王貴懷；曹勇；王新生；肖新如;交流最新進(jìn)展 提高診治水平[N];中國醫(yī)藥報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 董軍;CUL4B在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質(zhì)瘤診斷與預(yù)后中的價值與基于CED的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 許森林;ALDH1A1在膠質(zhì)瘤侵襲和結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和機制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 王嘯;靶向嵌段共聚物膠束在膠質(zhì)瘤磁共振成像、藥物輸送及治療的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 廖紅展;鋅指轉(zhuǎn)錄因子SNAI2在miR-203的影響下通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與膠質(zhì)瘤耐藥機制的調(diào)節(jié)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 潘俊;IRG1促進(jìn)膠質(zhì)瘤增殖的作用機制及臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 鄭傳宜;膠質(zhì)瘤中GLUT3基因異常表達(dá)的意義及其相關(guān)調(diào)控機制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

8 徐紅超;氬氦冷凍消融聯(lián)合GM-CSF治療膠質(zhì)瘤小鼠的療效及其對小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞免疫功能影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

9 黃素寧;TNFRSF6B在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及凋亡的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 熊偉;GBE1在人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)及干預(yù)實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張大慶;單核細(xì)胞趨化蛋白-1在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膠質(zhì)瘤細(xì)胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

2 黃俊龍;ADC值與膠質(zhì)瘤Ki-67、MGMT的相關(guān)性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李明聰;下調(diào)Pygo2對U251及U251起源的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 徐云峰;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 張靜文;T細(xì)胞過繼免疫治療小鼠腦膠質(zhì)瘤原位模型的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 洪宇;膠質(zhì)瘤瘤周水腫、病理級別、Ki-67表達(dá)三者相關(guān)性研究[D];石河子大學(xué);2015年

7 姬云翔;磷酸化Cx43蛋白在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞增殖相關(guān)性研究[D];石河子大學(xué);2015年

8 朱峰;OPN的異常表達(dá)與膠質(zhì)瘤的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 劉兵;SENP1表達(dá)水平對人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的作用機制及其相關(guān)性[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李文華;Slit2/Robo1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：1488079