本文關(guān)鍵詞： 木犀草素 阿片類結(jié)合蛋白/細(xì)胞黏附樣分子 肝癌　出處：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：抑癌基因OPCML的甲基化失活是腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制,因此采用藥物逆轉(zhuǎn)抑癌基因的失活狀態(tài)是腫瘤防治的重要策略。研究表明,Luteolin可在一定程度上抑制DNA的甲基化轉(zhuǎn)移酶(methyltransferase)的活性,但木犀草素是否能逆轉(zhuǎn)OPCML的失活狀態(tài)目前尚不明確。本研究通過體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系HepG2,用不同濃度木犀草素處理后,采用實(shí)時(shí)定量PCR和Western blotting分別檢測(cè)OPCML、DNMT1的m RNA和蛋白表達(dá);甲基特異性PCR(MSP)和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferases)催化實(shí)驗(yàn)分析OPCML基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化及細(xì)胞核中甲基化活性;ELISA分析木犀草素處理前后對(duì)核轉(zhuǎn)錄因子Sp1活性的變化;RNA干擾及慢病毒轉(zhuǎn)染等方法觀察Sp1在介導(dǎo)甲基化及CPCML表達(dá)中的作用。最后建立裸鼠異種移植瘤動(dòng)物模型,觀察木犀草素對(duì)異種移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果顯示,Hep G2細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)下OPCML表達(dá)水平較低,其啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平較高,而經(jīng)0~30μmol/L木犀草素處理后,能顯著增強(qiáng)OPCML蛋白和m RNA的表達(dá),并能降低其啟動(dòng)子甲基化水平以及細(xì)胞核中甲基化活性。同時(shí),木犀草素也能抑制Hep G2細(xì)胞中Sp1的活性以及DNMT1的表達(dá)。si RNA干擾OPCML后,可逆轉(zhuǎn)木犀草素對(duì)Hep G2細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效應(yīng),上調(diào)細(xì)胞內(nèi)Sp1表達(dá)后,同時(shí)伴有DNMT1表達(dá)增加及OPCML表達(dá)降低。此外,木犀草素也能上調(diào)裸鼠異種移植瘤中OPCML表達(dá)并抑制移植瘤生長(zhǎng)的生長(zhǎng)。以上結(jié)果表明木犀草素可能通過降低細(xì)胞內(nèi)甲基化水平而上調(diào)OPCML基因表達(dá),最終抑制Hep G2細(xì)胞生長(zhǎng)增殖。
[Abstract]:The methylation inactivation of tumor suppressor gene OPCML is an important mechanism of tumorigenesis. Therefore, reversing the inactivation of tumor suppressor gene by drug is an important strategy for the prevention and treatment of tumor. Luteolin can inhibit the activity of DNA methyltransferase to some extent. However, it is not clear whether luteolin can reverse the inactivation of OPCML. In this study, hepatoma cell line HepG2 was cultured in vitro and treated with different concentrations of luteolin. The m RNA and protein expression of OPC MLN DNMT1 were detected by real-time quantitative PCR and Western blotting, respectively. Methyl-specific DNA methyltransferases and DNA methyltransferases. The promoter region methylation and nuclear methylation activity of OPCML gene were analyzed by catalytic experiments. The changes of Sp1 activity of nuclear transcription factor before and after luteolin treatment were analyzed by ELISA. RNA interference and lentivirus transfection were used to observe the role of Sp1 in mediating methylation and CPCML expression. The inhibitory effect of luteolin on the growth of xenografts was observed. The results showed that the expression of OPCML was low and the methylation level of the promoter region was higher in Hep G2 cells. After treated with 0 ~ 30 渭 mol/L luteolin, the expression of OPCML protein and m RNA were significantly increased, and the methylation level of promoter and the methylation activity in the nucleus were decreased. Luteolin also inhibited the activity of Sp1 in Hep G2 cells and the expression of DNMT1. Si RNA interfered with OPCML. Luteolin can reverse the inhibitory effect of luteolin on the growth of Hep G2 cells, and increase the expression of DNMT1 and decrease the expression of OPCML after up-regulating the expression of Sp1. Luteolin also up-regulated the expression of OPCML and inhibited the growth of xenografts in nude mice. These results suggest that luteolin may up-regulate the OPCML gene table by reducing intracellular methylation level. Da. Finally, the growth and proliferation of Hep G2 cells were inhibited.
【作者單位】： 南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81071965)資助
【分類號(hào)】：R735.7
【正文快照】： *通訊作者,qinyingnan@163.comLuteolin Reactivates the Expression of Tumor Suppressor OPCML byInhibiting the Activity of Sp1 in Hepatocarcinoma CellsLi Xia Feng Yingjuan Wang Zhenggen Zhu Lihui Jiang Maibo Li Guoqing Qin Yingnan*The Second Affiliated Hospi

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本文編號(hào)：1487618