發(fā)布時(shí)間：2018-02-03 14:41

  本文關(guān)鍵詞： 子宮頸腫瘤 宮頸癌細(xì)胞σ1受體 配體 增敏 TCGA　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景及目的宮頸癌(Cervical Cancer,CC)是目前全球女性中第四大常見的惡性腫瘤。隨著癌前篩查的不斷普及和新治療策略的發(fā)現(xiàn),雖然宮頸癌發(fā)病率和死亡率出現(xiàn)一定程度下降,但仍然存在大量轉(zhuǎn)移性或復(fù)發(fā)性宮頸癌。對于這類不適合手術(shù)和放射治療的患者,姑息性化療依然是主要的治療方法。由于已應(yīng)用的化療藥物療效有限,開發(fā)新的生物分子靶向治療藥物是近年來的研究熱點(diǎn)之一,其中以σ1受體為靶點(diǎn)的抗腫瘤治療藥物逐漸引起研究者的關(guān)注。σ1受體(σ1 Receptor,σ1R)是非鴉片類受體類的跨膜蛋白,分布于哺乳動(dòng)物體內(nèi)的多種器官組織包括腦、眼底、角膜、肝臟、血管細(xì)胞等及多種腫瘤中。σ1R蛋白主要定位在線粒體相關(guān)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜(Mitochondria-associated ER Membrane,MAM)上,在激動(dòng)劑或應(yīng)激刺激下可轉(zhuǎn)位至細(xì)胞膜、核膜。σ1R被證明是分子伴侶,通過伴侶不同的功能蛋白而參與調(diào)節(jié)人體多種生理功能和疾病,如神經(jīng)退行性病變(如帕金森病)、精神障礙(如抑郁癥)及中樞系統(tǒng)和外周的腫瘤。σ1R高選擇性的配體藥物有潛力用于對該受體相關(guān)疾病的診斷和治療。本研究檢測了σ1R在宮頸癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況,分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)σ1R mRNA水平與宮頸癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系,而且檢測宮頸癌手術(shù)前后血漿中σ1R蛋白變化,由此探討σ1R在宮頸癌的臨床診斷、治療及預(yù)后評估的價(jià)值;另外,合成新σ1R選擇性配體化合物,檢測其對宮頸癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為影響,為開發(fā)新型的宮頸癌靶向性分子診斷和藥物治療提供依據(jù)。材料及方法利用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測σ1R蛋白在宮頸癌細(xì)胞中的定位和組織表達(dá)情況。從TCGA(https://genome-cancer.ucsc.edu/)數(shù)據(jù)庫下載經(jīng)預(yù)處理的宮頸癌基因mRNA-HiSeqV2(2015-02-24)數(shù)據(jù)包,統(tǒng)計(jì)分析宮頸癌σ1R表達(dá)水平與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。蛋白印跡法檢測宮頸癌患者手術(shù)前后外周血中σ1R相對水平。檢測新合成的4種σ1R特異性配體化合物對宮頸癌HeLa和Siha的生物學(xué)行為影響:四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測σ1R配體化合物對HeLa、Siha細(xì)胞生長的抑制作用及對奈達(dá)鉑的敏感性影響,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察配體化合物細(xì)胞遷移能力影響,流式細(xì)胞儀檢測14a化合物對HeLa和Siha細(xì)胞周期和凋亡率的影響。結(jié)果1.細(xì)胞免疫化學(xué)染色顯示,σ1R在宮頸癌細(xì)胞系HeLa和Siha細(xì)胞均有表達(dá),且定位在胞漿和胞核。2.TCGA宮頸癌資料分析顯示:鱗癌中σ1R表達(dá)水平與年齡(P=0.005)相關(guān),腺癌中σ1R高表達(dá)與臨床分期(P=0.020)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.004)、脈管浸潤(P=0.018)相關(guān)。鱗癌中σ1R高表達(dá)者預(yù)后差但差異缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,腺癌中σ1R高表達(dá)者平均生存期[(35.5±10.5)月]顯著低于低表達(dá)者[(95.4±15.0)月](P=0.034)。3.Western blot顯示:宮頸癌患者外周血中σ1R水平在術(shù)后10天顯著低于術(shù)前(P0.01)。4.MTT顯示,4種化合物均呈時(shí)間和濃度依賴性抑制細(xì)胞增殖(所有P0.01),化合物14a、14e、15c、15f對HeLa和Siha細(xì)胞生長抑制IC50值分別為37.2、41.6、133.7、28.0μmol/L和26.8、28.4、112.9、13.8μmol/L。5.對奈達(dá)鉑敏感性影響:6μmol/L的14a聯(lián)合不同質(zhì)量濃度NDP作用于細(xì)胞48h,HeLa細(xì)胞:聯(lián)合組0.1~10μg/ml奈達(dá)鉑作用后細(xì)胞增殖的抑制率明顯高于單藥組(P0.01);Siha細(xì)胞:聯(lián)合組0.1~30μg/ml奈達(dá)鉑作用后細(xì)胞增殖的抑制率明顯高于單藥組(P0.01)。6.化合物對細(xì)胞遷徙的影響:30μmol/L的14a作用于HeLa、Siha細(xì)胞24h時(shí),實(shí)驗(yàn)組遷移率分別為(19.6±0.6)%、(15.8±0.8)%,均明顯小于相應(yīng)對照組(43.0±1.2)%、(29.3±1.0)%(均為P0.01)。7.流式細(xì)胞分析顯示:30μmol/L的14a作用于時(shí)HeLa、Siha細(xì)胞48h后,HeLa、Siha細(xì)胞總凋亡率分別為(16.30±1.13)%、(21.27±1.86)%,分別顯著高于未加化合物組(1.80±0.27)%、(2.75±0.21)%(均為P0.01);化合物組G0/G1期細(xì)胞比例均顯著增加(PHeLa=0.032,PSiha=0.042)。結(jié)論1.σ1R在宮頸癌細(xì)胞系HeLa和Siha的胞漿和胞核中均有表達(dá)。2.血漿σ1R水平有可能作為監(jiān)測宮頸癌治療效果的標(biāo)志物。3.新合成的σ1配體化合物呈濃度和時(shí)間依賴性顯著地抑制子宮頸癌HeLa和Siha細(xì)胞的增殖。4.σ1R配體化合物14a可抑制HeLa和Siha細(xì)胞的遷移能力。5.σ1R配體化合物14a在低濃度下明顯增加宮頸癌細(xì)胞對奈達(dá)鉑的敏感性。6.σ1R配體化合物14a可能通過凋亡誘導(dǎo)途徑和細(xì)胞周期G1期阻滯發(fā)揮抗腫瘤作用。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Cervical cancer ( CC ) is the fourth most common malignant tumor among women in the world . The results showed that the expression level of 蟽1R in peripheral blood was significantly lower than that in single drug group ( P = 0.034 ) .

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙斌;葛金芳;朱娟娟;黃曉暉;李俊;;小議在MTT法測細(xì)胞增殖抑制率中IC_(50)的計(jì)算方法[J];安徽醫(yī)藥;2007年09期

2 周一平;用SPSS軟件計(jì)算新藥的LD_(50)[J];藥學(xué)進(jìn)展;2003年05期

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1 周新歡;宮頸癌組織中δ1受體核表達(dá)的意義[D];鄭州大學(xué);2013年

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本文編號：1487626