本文關(guān)鍵詞：循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的方法學(xué)建立和改良及在實(shí)體瘤中的監(jiān)測(cè)應(yīng)用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《浙江大學(xué)》 2015年

ZIC1基因?qū)ξ赴┘?xì)胞肺轉(zhuǎn)移和腹腔種植轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究

胡瑩瑩  

【摘要】：胃癌是全球高發(fā)的惡性腫瘤之一,其死亡率占居我國(guó)腫瘤死因第二位。胃癌就診的患者大多處于胃癌的中晚期,且多數(shù)已出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移,針對(duì)已發(fā)生轉(zhuǎn)移的胃癌病人一般采取化療。為了提高化療藥的治療效果,分子靶向治療起到了很大的作用。尋找胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)生物靶標(biāo)和潛在的治療靶點(diǎn)具有重要臨床意義。ZIC1是我們課題組篩選到的在胃癌中低表達(dá),具有潛在抑癌作用的基因。它屬于ZIC基因家族成員,位于人類3號(hào)染色體,具有Cys2His2鋅指結(jié)構(gòu)域,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是重要的鋅指轉(zhuǎn)錄因子。ZICl基因不僅在腦和神經(jīng)嵴發(fā)育、骨骼發(fā)育過(guò)程中起重要作用,它還與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),如子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺癌、髓母細(xì)胞瘤、間葉組織腫瘤、胃腸道腫瘤等。我們前期研究發(fā)現(xiàn)在體外實(shí)驗(yàn)中,ZIC1具有抑制胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的重要功能。但在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中ZIC1基因?qū)ξ赴┠[瘤生長(zhǎng)、形成和轉(zhuǎn)移的作用如何?它怎樣通過(guò)調(diào)控下游基因的表達(dá)影響腫瘤轉(zhuǎn)移的具體分子機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。我們通過(guò)構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤及不同胃癌轉(zhuǎn)移瘤模型,研究過(guò)表達(dá)ZIC1對(duì)胃癌生長(zhǎng)、形成、血行轉(zhuǎn)移和腹腔種植轉(zhuǎn)移的影響。采用基因芯片技術(shù)篩選ZIC1調(diào)控的與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的下游基因并進(jìn)行驗(yàn)證,研究其可能的轉(zhuǎn)移分子機(jī)制,為尋找胃癌轉(zhuǎn)移新分子治療靶標(biāo)提供重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究步驟1、ZIC1對(duì)裸鼠皮下胃癌移植瘤形成的影響①胃癌細(xì)胞SGC7901穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pFlag-CMV4 Vector和pFlag-CMV4-ZIC1質(zhì)粒。②構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型,驗(yàn)證過(guò)表達(dá)ZIC1對(duì)胃癌移植瘤生長(zhǎng)及形成的影響。2、ZIC1在裸鼠胃癌肺轉(zhuǎn)移和腹腔種植轉(zhuǎn)移中的作用①用lentivirus-GFP Vector和lentivirus-GFP ZIC1感染胃癌細(xì)胞BGC823,構(gòu)建ZIC1過(guò)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。②裸鼠尾靜脈注射穩(wěn)轉(zhuǎn)的BGC-Vector和BGC-ZIC1細(xì)胞株,構(gòu)建血行轉(zhuǎn)移模型,觀察過(guò)表達(dá)ZICl對(duì)胃癌肺轉(zhuǎn)移的影響及對(duì)裸鼠生存周期的影響。③裸鼠腹腔注射穩(wěn)轉(zhuǎn)的BGC-Vector和BGC-ZIC1細(xì)胞株,構(gòu)建腹腔種植轉(zhuǎn)移模型,觀察過(guò)表達(dá)ZICl對(duì)胃癌腹腔種植轉(zhuǎn)移的影響。3、ZICl調(diào)控靶基因及轉(zhuǎn)移相關(guān)信號(hào)通路的研究①分別提取穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞BGC-Vector和BGC-ZIC1的RNA,利用基因表達(dá)譜芯片技術(shù)檢測(cè)篩選出下游差異表達(dá)的基因,以表達(dá)升高或降低3倍以上作為有生物學(xué)統(tǒng)計(jì)意義,并對(duì)其中7個(gè)與侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)的候選基因進(jìn)行Q-PCR驗(yàn)證。② Q-PCR檢測(cè)胃癌細(xì)胞BGC823穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ZIC1后EPB41L3基因的表達(dá)水平。③ Q-PCR檢測(cè)不同胃癌細(xì)胞株和胃上皮正常細(xì)胞GES-1中EPB41L3基因的表達(dá)水平。研究結(jié)果1、過(guò)表達(dá)ZIC1對(duì)裸鼠皮下胃癌移植瘤的形成無(wú)明顯影響。①經(jīng)G418篩選后得到穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株SGC-Vector和SGC-ZIC1。②裸鼠胃癌皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)ZIC1對(duì)胃癌的形成無(wú)顯著影響。2、過(guò)表達(dá)ZIC1可以顯著抑制胃癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移和腹腔種植轉(zhuǎn)移。①經(jīng)慢病毒感染及嘌呤霉素篩選后,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株BGC-Vector和BGC-ZIC1。②裸鼠胃癌血行轉(zhuǎn)移模型發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)ZIC1可顯著抑制胃癌肺轉(zhuǎn)移,延長(zhǎng)裸鼠的生存周期(p0.05)。③裸鼠胃癌腹腔種植轉(zhuǎn)移模型發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)ZIC1可顯著抑制胃癌的腹腔種植轉(zhuǎn)移(p0.05).3、篩選和驗(yàn)證ZIC1調(diào)控與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的下游基因。①通過(guò)人類全基因組芯片篩選出ZIC1上調(diào)基因289個(gè),下調(diào)基因304個(gè),功能歸類分析顯示差異基因主要參與細(xì)胞周期、細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控等。挑選其中與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的7個(gè)基因進(jìn)行Q-PCR驗(yàn)證,結(jié)果與芯片檢測(cè)結(jié)果基本相符。其中以EPB41L3的上調(diào)改變最為顯著。② RT-PCR發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞BGC823過(guò)表達(dá)ZIC1后EPB41L3基因顯著升高。③ Q-PCR發(fā)現(xiàn)EPB41L3基因在系列胃癌細(xì)胞株中的表達(dá)顯著低于GES-1細(xì)胞。研究結(jié)論1、過(guò)表達(dá)ZIC1可顯著抑制胃癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移和腹腔種植轉(zhuǎn)移,延長(zhǎng)裸鼠生存周期。過(guò)表達(dá)ZIC1對(duì)裸鼠皮下胃癌移植瘤形成無(wú)顯著影響。2、篩選到ZIC1調(diào)控與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)下游基因,這些基因主要參與腫瘤細(xì)胞粘附、遷移侵襲等生物學(xué)過(guò)程。ZIC1可能調(diào)控關(guān)鍵靶基因EPB41L3,從而調(diào)控胃癌轉(zhuǎn)移。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

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