本文關(guān)鍵詞： 樟芝 非小細胞肺癌 細胞凋亡 細胞自噬　出處：《石河子大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:肺癌在全球癌癥死亡率中占據(jù)第一位。非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)在所有類型肺癌中所占比例最大。目前主要用于治療NSCLC的方法是化療法,然而,臨床使用的化療藥物普遍具有較大的毒副作用,且容易產(chǎn)生耐藥性。食藥用真菌在東方有著獨特的經(jīng)濟和醫(yī)藥價值,其天然組分的活性研究更是深得廣大研究學者的青睞。因此,從食藥用真菌中提取高效低毒的抗腫瘤活性先導化合物,用以研發(fā)新藥將是生物醫(yī)藥界學者們研究的熱點和難點。樟芝是原產(chǎn)于我國臺灣的一種珍稀藥用菌,具有多種生理活性,尤其是它卓越的抗腫瘤活性。樟芝中的明星分子,安卓喹諾兒,對NSCLC有很好的抑制作用,目前已進入FDA批準的NSCLC二期臨床實驗。然而,安卓喹諾兒主要來源于樟芝子實體,由于樟芝依賴生長的牛樟樹是珍稀保護樹種,且子實體生長極其緩慢,使得其研究成本居高不下,不利于科研的順利進展。液態(tài)深層發(fā)酵具有原料來源廣泛、成本低廉、生長過程短、操作易控制等優(yōu)點,從液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物中分離純化得到與安卓喹諾兒類似的活性物質(zhì),就成為十分值得開發(fā)的途徑。方法:本研究首先以樟芝液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物的粗提物為材料,研究其對NSCLC的抑制作用,發(fā)現(xiàn)其對NSCLC有較好的抑制作用,可引起S期細胞周期阻滯,誘導細胞發(fā)生凋亡。然而,粗提物是混合物,包含著許多成分不明的活性物質(zhì),很難從中發(fā)現(xiàn)發(fā)揮主要作用的活性單體物質(zhì)。因此,后續(xù)研究采用實驗室前期分離得到的兩種單體化合物By-1和Antrodin C進行抗肺癌活性評價,并進一步探究其作用機制。其中,By-1主要來源于發(fā)酵液,Antrodin C主要來源于發(fā)酵菌絲體。通過對細胞遷移、細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白、細胞自噬等檢測來評價By-1和Antrodin C的抗肺癌活性,并探究自噬和凋亡的交互式調(diào)控是否參與抗肺癌活性中,進一步探究作用的信號通路。結(jié)果:實驗發(fā)現(xiàn),By-1和Antrodin C均對非小細胞肺癌SPCA-1細胞株有較好的抑制作用,其作用機制主要是由于引起S期細胞周期阻滯,上調(diào)P53蛋白,P53參與ROS和Bcl-2介導的線粒體細胞凋亡途徑,進一步引起Caspase家族的級聯(lián)反應,促進凋亡執(zhí)行因子Caspase-3的釋放,進而誘導細胞凋亡。通過檢測自噬性結(jié)構(gòu),自噬流的發(fā)生以及自噬標記蛋白LC3 II表達和LC3 I向LC3 II轉(zhuǎn)變,發(fā)現(xiàn)By-1和Antrodin C可誘導SPCA-1細胞發(fā)生自噬。并進一步發(fā)現(xiàn)自噬發(fā)生是通過下調(diào)Akt/mTOR通路來介導的。通過自噬抑制劑和自噬激活劑處理細胞,對細胞增殖的檢測,發(fā)現(xiàn)自噬在By-1和Antrodin C的抗肺癌活性中起保護性作用。將促凋亡化合物和抑制自噬化合物聯(lián)用,將明顯增加對腫瘤細胞的抑制能力,這可能為NSCLC治療提供一條新思路。肺癌細胞中存在多種類型的基因突變,其中EGFR突變占到了總突變類型的一半以上。有數(shù)據(jù)表明,對EGFR突變型肺癌,采用靶向性治療的方法,能達到更好的效果,且預后良好。通過對EGFR突變型細胞株HCC827細胞進行細胞增殖、細胞周期和細胞凋亡的相關(guān)檢測,發(fā)現(xiàn)By-1和Antrodin C可以抑制該細胞增殖,將細胞阻滯在S期,并能誘導細胞發(fā)生凋亡。本研究采用不同類型的人非小細胞肺癌細胞系探究By-1和Antrodin C的抗肺癌活性及其分子機制,發(fā)現(xiàn)By-1和Antrodin C對NSCLC有較好的抑制作用,其作用機制是由于凋亡和自噬的交互式調(diào)控所致。由此可見,By-1和Antrodin C都有可能發(fā)展成為潛在的抗肺癌治療的化療藥物,這也為后續(xù)的深入研究提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Objective : To study the antitumor activity of non - small cell lung cancer ( NSCLC ) in all types of lung cancer . It is found that By - 1 and Antrodin C can inhibit the proliferation of NSCLC and induce apoptosis . By detecting autophagy structure , cell cycle and apoptosis , it is found that By - 1 and Antrodin C can inhibit the proliferation of NSCLC and induce apoptosis . By detecting autophagy structure , cell cycle and cell apoptosis , it is found that By - 1 and Antrodin C can induce apoptosis . By detecting autophagy , By - 1 and Antrodin C , it has been found that By - 1 and Antrodin C can induce apoptosis . By means of autophagy , By - 1 and Antrodin C , it is possible to develop a chemotherapeutic agent for the treatment of lung cancer .

【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：1481818