本文關(guān)鍵詞： 腫瘤 Kras自發(fā)肺癌模型 Eos IL-5 肺轉(zhuǎn)移 血管通透性　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：腫瘤是嚴(yán)重危害人類生命健康的疾病之一,發(fā)病率逐年上升。雖然腫瘤發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚未明確,但大量研究表明,腫瘤可能是一種諸如外因通過(guò)內(nèi)因發(fā)病的疾病,內(nèi)因包括原癌基因的活化或抑癌基因的失活,腫瘤細(xì)胞以及機(jī)體免疫細(xì)胞功能的失調(diào)等。長(zhǎng)期以來(lái)免疫相關(guān)細(xì)胞以及細(xì)胞因子在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起到了重要作用,如中性粒細(xì)胞,Th17細(xì)胞,Treg細(xì)胞,DC細(xì)胞等。其中一些研究提示嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophils,Eos)對(duì)于腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移或許也存在調(diào)控作用。嗜酸性粒細(xì)胞是1879年P(guān)aul Ehrlich命名的一類白細(xì)胞,在健康個(gè)體外周血白細(xì)胞中占極低比例。嗜酸性粒細(xì)胞在生理?xiàng)l件下發(fā)揮著機(jī)體固有免疫以及適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié),介導(dǎo)組織損傷修復(fù),維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等多種功能。此外,嗜酸性粒細(xì)胞被視為多功能白細(xì)胞,最新研究證明有促進(jìn)B細(xì)胞發(fā)育和增殖以及引起干細(xì)胞損傷等"新功能"。在某些病理?xiàng)l件如寄生蟲感染宿主或過(guò)敏性疾病如嗜酸性粒細(xì)胞性支氣管的患者中,嗜酸性粒細(xì)胞在外周血以及組織中的數(shù)目會(huì)顯著增多。近年來(lái)越來(lái)越多的臨床證據(jù)表明"腫瘤相關(guān)性嗜酸性粒細(xì)胞增多"現(xiàn)象,存在于結(jié)直腸癌,乳腺癌,卵巢癌宮頸癌,口腔鱗狀細(xì)胞癌,霍奇金淋巴瘤和前列腺癌等多種腫瘤,該現(xiàn)象多與患者良好的預(yù)后相關(guān),提示著嗜酸性粒細(xì)胞可能存在潛在的抗腫瘤作用。另一方面,有觀點(diǎn)認(rèn)為關(guān)于嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的過(guò)敏性反應(yīng)或炎癥能夠降低腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),但也有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的證據(jù)表明過(guò)敏性炎癥能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移。此外,細(xì)胞因子在腫瘤微環(huán)境中是必需的,涉及腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展的調(diào)節(jié)。嗜酸性粒細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子,一些相關(guān)的細(xì)胞因子的作用近年來(lái)越來(lái)越受到重視,例如白細(xì)胞介素5(IL-5)。IL-5由淋巴細(xì)胞,肥大細(xì)胞,Ⅱ型先天淋巴細(xì)胞,以及嗜酸性粒細(xì)胞產(chǎn)生并分泌。是嗜酸性粒細(xì)胞分化成熟和存活關(guān)聯(lián)最密切的重要因子。嗜酸性粒細(xì)胞表面高表達(dá)IL-5受體。IL-5的缺乏直接導(dǎo)致血液和外周組織中嗜酸性粒細(xì)胞水平明顯降低,而CD3+T細(xì)胞表達(dá)IL-5啟動(dòng)子則導(dǎo)致機(jī)體嗜酸性粒細(xì)胞增多。很多研究提示IL-5涉及了腫瘤的病理過(guò)程,但結(jié)果存在爭(zhēng)議。因此,假設(shè)Eos對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移確切起關(guān)鍵作用的話,Eos將會(huì)成為癌癥治療的重要靶點(diǎn)。但目前絕大部分針對(duì)Eos對(duì)腫瘤的研究都停留在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上,關(guān)于Eos在肺癌發(fā)生發(fā)展以及癌癥肺轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用和機(jī)制卻鮮有研究報(bào)導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行研究:(1)利用本實(shí)驗(yàn)室豐富的與Eos相關(guān)的基因敲除和轉(zhuǎn)基因小鼠(如Phil、NJ1638)以及肺癌誘導(dǎo)模型小鼠(P53f/f/KrasG12D)資源,深入開展Eos在整體動(dòng)物模型中對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的研究,并分離嗜酸在移植瘤模型進(jìn)行驗(yàn)證。(2)利用Eos相關(guān)的基因敲除和轉(zhuǎn)基因小鼠(如Phil、NJ1638),并通過(guò)腫瘤轉(zhuǎn)移造模方案探究Eos在腫瘤肺轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制。第一部分Eos在Kras基因突變誘導(dǎo)的肺癌發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控作用及機(jī)制目的研究Eos在Kras基因突變誘導(dǎo)的肺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的調(diào)控作用及其機(jī)制。方法1.利用Eos相關(guān)的基因敲除和轉(zhuǎn)基因小鼠(Phil,NJ1638等)與肺癌誘導(dǎo)模型小鼠KrasG12D,P53f/f)的雜交鼠,通過(guò)腺病毒氣道滴注(Ade-Cre)的方式進(jìn)行肺癌模型的構(gòu)建。2.取以上造模小鼠在不同時(shí)間點(diǎn)腫瘤組織進(jìn)行病理HE半定量分析,探究嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)多,嗜酸性粒細(xì)胞正常,以及嗜酸性粒細(xì)胞缺失條件對(duì)肺癌的發(fā)生和發(fā)展是否有促進(jìn)或抑制作用。3.檢測(cè)缺失了嗜酸性粒細(xì)胞的小鼠的肺癌組織與正常肺癌小鼠的組織先關(guān)免疫細(xì)胞類型的差異。探究嗜酸性粒細(xì)胞是否調(diào)控了肺癌局部的微環(huán)境。4.把嗜酸分離過(guò)繼到WT小鼠體內(nèi),構(gòu)建移植瘤模型進(jìn)一步驗(yàn)證嗜酸對(duì)腫瘤的調(diào)控功能。結(jié)果1.NJ-P53/Kras腫瘤組織早期有大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),但腫瘤組織的發(fā)生(早期生長(zhǎng)數(shù)目)未受顯著影響。2.Phil-P53/Kras嗜酸性粒細(xì)胞缺失,但腫瘤的進(jìn)展未受到顯著的影響。3.缺失了嗜酸的小鼠腫瘤組織T細(xì)胞比例未受到明顯影響。過(guò)繼嗜酸的移植瘤模型未體現(xiàn)出顯著差異。結(jié)論動(dòng)物模型中Eos對(duì)Kras突變誘導(dǎo)的肺癌發(fā)生發(fā)展無(wú)顯著影響。第二部分Eos腫瘤肺轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用及在機(jī)制研究目的研究Eos和(或)IL-5在腫瘤肺轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)制。方法1.健康的NJ1638小鼠和同窩WT小鼠,肺轉(zhuǎn)移模型以尾靜脈注射小鼠肺腺癌細(xì)胞系LLC和小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16-F10構(gòu)建。于12天后(B16-F10組)或21天后(LIC組)處理小鼠,檢測(cè)肺表面轉(zhuǎn)移灶個(gè)數(shù),肺組織HE及腫瘤增殖凋亡。2.建立早期腫瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移模型,將帶熒光的腫瘤細(xì)胞標(biāo)記后注射到小鼠體內(nèi),觀察早期時(shí)間點(diǎn)腫瘤細(xì)胞在肺組織定殖是否有影響。3.檢測(cè)肺通透性對(duì)肺轉(zhuǎn)移的早期定殖的作用。結(jié)果1.NJ小鼠體內(nèi)明顯緩解腫瘤肺轉(zhuǎn)移,肺表明腫瘤數(shù)目明顯減少,肺轉(zhuǎn)移灶大小和增殖凋亡不受顯著影響。2.將熒光標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi),NJ小鼠對(duì)腫瘤的早期轉(zhuǎn)移有明顯的的緩解作用;3.該結(jié)果與NJ小鼠體內(nèi)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性對(duì)腫瘤細(xì)胞的通透性改變較弱有關(guān)。并不完全依賴于Eos。結(jié)論動(dòng)物模型中CD3+T細(xì)胞過(guò)表達(dá)IL-5能夠通過(guò)介導(dǎo)肺血管通透性改變阻斷腫瘤肺轉(zhuǎn)移,該現(xiàn)象不完全依賴于Eos的存在。
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【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R730.2
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本文編號(hào)：1473898