本文關鍵詞： 腫瘤 Kras自發(fā)肺癌模型 Eos IL-5 肺轉移 血管通透性　出處：《浙江大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：腫瘤是嚴重危害人類生命健康的疾病之一,發(fā)病率逐年上升。雖然腫瘤發(fā)生、發(fā)展與轉移的機制尚未明確,但大量研究表明,腫瘤可能是一種諸如外因通過內(nèi)因發(fā)病的疾病,內(nèi)因包括原癌基因的活化或抑癌基因的失活,腫瘤細胞以及機體免疫細胞功能的失調(diào)等。長期以來免疫相關細胞以及細胞因子在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉移中起到了重要作用,如中性粒細胞,Th17細胞,Treg細胞,DC細胞等。其中一些研究提示嗜酸性粒細胞(Eosinophils,Eos)對于腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉移或許也存在調(diào)控作用。嗜酸性粒細胞是1879年Paul Ehrlich命名的一類白細胞,在健康個體外周血白細胞中占極低比例。嗜酸性粒細胞在生理條件下發(fā)揮著機體固有免疫以及適應性免疫的調(diào)節(jié),介導組織損傷修復,維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等多種功能。此外,嗜酸性粒細胞被視為多功能白細胞,最新研究證明有促進B細胞發(fā)育和增殖以及引起干細胞損傷等"新功能"。在某些病理條件如寄生蟲感染宿主或過敏性疾病如嗜酸性粒細胞性支氣管的患者中,嗜酸性粒細胞在外周血以及組織中的數(shù)目會顯著增多。近年來越來越多的臨床證據(jù)表明"腫瘤相關性嗜酸性粒細胞增多"現(xiàn)象,存在于結直腸癌,乳腺癌,卵巢癌宮頸癌,口腔鱗狀細胞癌,霍奇金淋巴瘤和前列腺癌等多種腫瘤,該現(xiàn)象多與患者良好的預后相關,提示著嗜酸性粒細胞可能存在潛在的抗腫瘤作用。另一方面,有觀點認為關于嗜酸性粒細胞浸潤為主的過敏性反應或炎癥能夠降低腫瘤發(fā)生風險,但也有動物實驗的證據(jù)表明過敏性炎癥能促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉移。此外,細胞因子在腫瘤微環(huán)境中是必需的,涉及腫瘤生長和進展的調(diào)節(jié)。嗜酸性粒細胞可以分泌多種細胞因子,一些相關的細胞因子的作用近年來越來越受到重視,例如白細胞介素5(IL-5)。IL-5由淋巴細胞,肥大細胞,Ⅱ型先天淋巴細胞,以及嗜酸性粒細胞產(chǎn)生并分泌。是嗜酸性粒細胞分化成熟和存活關聯(lián)最密切的重要因子。嗜酸性粒細胞表面高表達IL-5受體。IL-5的缺乏直接導致血液和外周組織中嗜酸性粒細胞水平明顯降低,而CD3+T細胞表達IL-5啟動子則導致機體嗜酸性粒細胞增多。很多研究提示IL-5涉及了腫瘤的病理過程,但結果存在爭議。因此,假設Eos對腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉移確切起關鍵作用的話,Eos將會成為癌癥治療的重要靶點。但目前絕大部分針對Eos對腫瘤的研究都停留在流行病學調(diào)查的基礎上,關于Eos在肺癌發(fā)生發(fā)展以及癌癥肺轉移過程中的作用和機制卻鮮有研究報導。本實驗分兩部分進行研究:(1)利用本實驗室豐富的與Eos相關的基因敲除和轉基因小鼠(如Phil、NJ1638)以及肺癌誘導模型小鼠(P53f/f/KrasG12D)資源,深入開展Eos在整體動物模型中對腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉移的研究,并分離嗜酸在移植瘤模型進行驗證。(2)利用Eos相關的基因敲除和轉基因小鼠(如Phil、NJ1638),并通過腫瘤轉移造模方案探究Eos在腫瘤肺轉移中的作用機制。第一部分Eos在Kras基因突變誘導的肺癌發(fā)生發(fā)展中的調(diào)控作用及機制目的研究Eos在Kras基因突變誘導的肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的調(diào)控作用及其機制。方法1.利用Eos相關的基因敲除和轉基因小鼠(Phil,NJ1638等)與肺癌誘導模型小鼠KrasG12D,P53f/f)的雜交鼠,通過腺病毒氣道滴注(Ade-Cre)的方式進行肺癌模型的構建。2.取以上造模小鼠在不同時間點腫瘤組織進行病理HE半定量分析,探究嗜酸性粒細胞過多,嗜酸性粒細胞正常,以及嗜酸性粒細胞缺失條件對肺癌的發(fā)生和發(fā)展是否有促進或抑制作用。3.檢測缺失了嗜酸性粒細胞的小鼠的肺癌組織與正常肺癌小鼠的組織先關免疫細胞類型的差異。探究嗜酸性粒細胞是否調(diào)控了肺癌局部的微環(huán)境。4.把嗜酸分離過繼到WT小鼠體內(nèi),構建移植瘤模型進一步驗證嗜酸對腫瘤的調(diào)控功能。結果1.NJ-P53/Kras腫瘤組織早期有大量嗜酸性粒細胞浸潤,但腫瘤組織的發(fā)生(早期生長數(shù)目)未受顯著影響。2.Phil-P53/Kras嗜酸性粒細胞缺失,但腫瘤的進展未受到顯著的影響。3.缺失了嗜酸的小鼠腫瘤組織T細胞比例未受到明顯影響。過繼嗜酸的移植瘤模型未體現(xiàn)出顯著差異。結論動物模型中Eos對Kras突變誘導的肺癌發(fā)生發(fā)展無顯著影響。第二部分Eos腫瘤肺轉移的調(diào)控作用及在機制研究目的研究Eos和(或)IL-5在腫瘤肺轉移的調(diào)控作用及相關機制。方法1.健康的NJ1638小鼠和同窩WT小鼠,肺轉移模型以尾靜脈注射小鼠肺腺癌細胞系LLC和小鼠黑色素瘤細胞系B16-F10構建。于12天后(B16-F10組)或21天后(LIC組)處理小鼠,檢測肺表面轉移灶個數(shù),肺組織HE及腫瘤增殖凋亡。2.建立早期腫瘤細胞肺轉移模型,將帶熒光的腫瘤細胞標記后注射到小鼠體內(nèi),觀察早期時間點腫瘤細胞在肺組織定殖是否有影響。3.檢測肺通透性對肺轉移的早期定殖的作用。結果1.NJ小鼠體內(nèi)明顯緩解腫瘤肺轉移,肺表明腫瘤數(shù)目明顯減少,肺轉移灶大小和增殖凋亡不受顯著影響。2.將熒光標記的腫瘤細胞注射到小鼠體內(nèi),NJ小鼠對腫瘤的早期轉移有明顯的的緩解作用;3.該結果與NJ小鼠體內(nèi)肺血管內(nèi)皮細胞通透性對腫瘤細胞的通透性改變較弱有關。并不完全依賴于Eos。結論動物模型中CD3+T細胞過表達IL-5能夠通過介導肺血管通透性改變阻斷腫瘤肺轉移,該現(xiàn)象不完全依賴于Eos的存在。
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【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R730.2
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本文編號：1473898