發(fā)布時(shí)間：2017-12-25 04:11

  本文關(guān)鍵詞：GOLPH2的糖基化修飾對于其參與肝癌發(fā)生的影響　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： GOLPH2 糖基化位點(diǎn)突變 肝細(xì)胞癌 NF-κB 炎癥小體 脂筏

【摘要】：目的:本研究通過轉(zhuǎn)染GOLPH2及其糖基化缺失的重組質(zhì)粒進(jìn)入肝癌細(xì)胞HepG2,進(jìn)行體外功能學(xué)研究(細(xì)胞生長與細(xì)胞周期),探索GOLPH2的糖基化修飾對肝癌細(xì)胞的炎癥通路及膽固醇代謝通路的影響,從而揭示GOLPH2的糖基化修飾對于其功能發(fā)揮的影響。方法:構(gòu)建GOLPH2的109、144位糖基化位點(diǎn)雙突變質(zhì)粒,并命名為pcDNA3-Flag-GOLPH2(DM),用脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染GOLPH2 WT(野生型GOLPH2重組質(zhì)粒)或者DM到肝癌細(xì)胞HepG2中,進(jìn)行細(xì)胞生長與細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)、NF-κB報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)、炎癥小體及脂筏的免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:細(xì)胞生長與細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)表明,與野生型GOLPH2相比,糖基化位點(diǎn)突變GOLPH2會(huì)使細(xì)胞生長與細(xì)胞周期減慢。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明,野生型GOLPH2能夠激活HepG2細(xì)胞中NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性,而雙糖基化位點(diǎn)突變會(huì)使GOLPH2失去此激活作用。免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)野生型GOLPH2促使肝癌細(xì)胞HepG2的炎癥小體和脂筏累積,雙糖基化位點(diǎn)突變的GOLPH2則喪失此功能。結(jié)論:糖基化修飾對GOLPH2促進(jìn)肝癌細(xì)胞HepG2的生長是必須的;糖基化修飾對GOLPH2激活肝癌細(xì)胞HepG2的炎癥通路是必須的;糖基化修飾對GOLPH2誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2內(nèi)脂筏累積(膽固醇代謝)是必須的;GOLPH2的糖基化修飾對于其功能發(fā)揮不可或缺。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

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本文編號：1331284