本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的exosomes在白血病細(xì)胞耐藥性中的作用研究　出處：《山東大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 急性淋巴細(xì)胞白血病 Exosomes 細(xì)胞凋亡 耐藥

【摘要】：背景：急性淋巴細(xì)胞白血病是兒童時(shí)期最常見(jiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,近年來(lái),急性淋巴細(xì)胞白血病的治療已取得很大進(jìn)展,但仍有部分患兒化療效果差或是緩解后復(fù)發(fā),造成該現(xiàn)象最重要的原因之一是白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。Exosomes是活細(xì)胞分泌的微小囊泡,它在血液疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,近年來(lái)已成為研究熱點(diǎn)。研究目的：1.提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)分泌的exosomes、并對(duì)其進(jìn)行形態(tài)和表面分子鑒定。2.將急性B系淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系Nalm-6和exosomes共培養(yǎng),檢測(cè)exosomes對(duì)Nalm-6細(xì)胞增殖活性、凋亡以及細(xì)胞周期的影響,探討exosomes對(duì)白血病細(xì)胞耐藥性的影響及發(fā)揮作用的可能機(jī)制。研究方法：1.使用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSCs,然后收集培養(yǎng)上清,采用超速離心方法(300g10min、2,000g20min、10,000g30min、100,000gl2h)提取BMSCs分泌的exosomes,采用透射電鏡對(duì)其進(jìn)行形態(tài)和大小鑒定,使用western blot方法驗(yàn)證其表面分子的表達(dá),采用miRNA芯片方法檢測(cè)內(nèi)含miRNA。2.使用CCK-8方法檢測(cè)BMSCs來(lái)源的exosomes對(duì)Nalm-6細(xì)胞增殖活性的影響。3.采用細(xì)胞凋亡試劑盒和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMSCs來(lái)源的exosomes對(duì)Nalm-6細(xì)胞凋亡的影響。4.使用PI染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMSCs來(lái)源的exosomes對(duì)Nalm-6細(xì)胞周期的影響。5. Western blot方法檢測(cè)BMSCs來(lái)源的exosomes對(duì)Nalm-6細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響。研究結(jié)果：1.采用超速離心方法,從BMSCs培養(yǎng)上清中提取出exosomes,透射電鏡下exosomes呈典型的杯狀小體,直徑在50-150 nm;; western blot結(jié)果顯示,exosomes表達(dá)CD63和HSP70；芯片結(jié)果顯示exosomes富含多種miRNA。2. Exosomes能夠增加Nalm-6細(xì)胞的增殖活性,減少VP16誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,增加活細(xì)胞比例,促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程,進(jìn)而誘導(dǎo)白血病細(xì)胞耐藥的產(chǎn)生。3. Exosomes能夠阻斷VP16引起的Nalm-6細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白BCL-2、全長(zhǎng)caspase-3和全長(zhǎng)PARP的表達(dá)下降,降低BAX、cleaved caspase-3和cleaved PARP的表達(dá)。結(jié)論：1.采用超速離心方法成功從BMSCs條件培養(yǎng)基中提取出exosomes; 且 exosomes內(nèi)含多種miRNA。2. Exosomes可能通過(guò)影響凋亡相關(guān)蛋白BCL-2、BAX、caspase-3和PARP等的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)Nalm-6細(xì)胞的增殖活性、凋亡和周期,進(jìn)而誘導(dǎo)白血病細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R733.7

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