本文關鍵詞：骨髓間充質干細胞分泌的exosomes在白血病細胞耐藥性中的作用研究　出處：《山東大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景：急性淋巴細胞白血病是兒童時期最常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,近年來,急性淋巴細胞白血病的治療已取得很大進展,但仍有部分患兒化療效果差或是緩解后復發(fā),造成該現(xiàn)象最重要的原因之一是白血病細胞對化療藥物產生耐藥性。Exosomes是活細胞分泌的微小囊泡,它在血液疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用,近年來已成為研究熱點。研究目的：1.提取骨髓間充質干細胞(BMSCs)分泌的exosomes、并對其進行形態(tài)和表面分子鑒定。2.將急性B系淋巴細胞白血病細胞系Nalm-6和exosomes共培養(yǎng),檢測exosomes對Nalm-6細胞增殖活性、凋亡以及細胞周期的影響,探討exosomes對白血病細胞耐藥性的影響及發(fā)揮作用的可能機制。研究方法：1.使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSCs,然后收集培養(yǎng)上清,采用超速離心方法(300g10min、2,000g20min、10,000g30min、100,000gl2h)提取BMSCs分泌的exosomes,采用透射電鏡對其進行形態(tài)和大小鑒定,使用western blot方法驗證其表面分子的表達,采用miRNA芯片方法檢測內含miRNA。2.使用CCK-8方法檢測BMSCs來源的exosomes對Nalm-6細胞增殖活性的影響。3.采用細胞凋亡試劑盒和流式細胞術檢測BMSCs來源的exosomes對Nalm-6細胞凋亡的影響。4.使用PI染色和流式細胞術檢測BMSCs來源的exosomes對Nalm-6細胞周期的影響。5. Western blot方法檢測BMSCs來源的exosomes對Nalm-6細胞中凋亡相關蛋白表達水平的影響。研究結果：1.采用超速離心方法,從BMSCs培養(yǎng)上清中提取出exosomes,透射電鏡下exosomes呈典型的杯狀小體,直徑在50-150 nm;; western blot結果顯示,exosomes表達CD63和HSP70；芯片結果顯示exosomes富含多種miRNA。2. Exosomes能夠增加Nalm-6細胞的增殖活性,減少VP16誘導的細胞凋亡,增加活細胞比例,促進細胞周期進程,進而誘導白血病細胞耐藥的產生。3. Exosomes能夠阻斷VP16引起的Nalm-6細胞中凋亡相關蛋白BCL-2、全長caspase-3和全長PARP的表達下降,降低BAX、cleaved caspase-3和cleaved PARP的表達。結論：1.采用超速離心方法成功從BMSCs條件培養(yǎng)基中提取出exosomes; 且 exosomes內含多種miRNA。2. Exosomes可能通過影響凋亡相關蛋白BCL-2、BAX、caspase-3和PARP等的表達來調節(jié)Nalm-6細胞的增殖活性、凋亡和周期,進而誘導白血病細胞產生耐藥性。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7

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