本文關(guān)鍵詞：β-胡蘿卜素協(xié)同五氟尿嘧啶對食管鱗癌的抗腫瘤作用及機制研究　出處：《鄭州大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： β-胡蘿卜素 5-FU 食管鱗癌 增殖 凋亡

【摘要】：食管鱗癌是我國乃至世界范圍內(nèi)較為常見的惡性腫瘤,其致死率在我國高居第四位。據(jù)報道,接受手術(shù)治療的食管鱗癌病人總體五年生存率不足20%。目前,化學(xué)治療已成為腫瘤常規(guī)治療的主要方法之一。但是,長期使用化療藥物,如五氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU),會造成腫瘤細胞的耐藥性,并且正常細胞及組織也會受到相當(dāng)程度的損害,腫瘤患者不得不因為這些損害而放棄繼續(xù)化療。因此,如何在保證正常組織減輕或免受化療藥物毒副作用的前提下,提高腫瘤細胞對化療的敏感性,是目前惡性腫瘤基礎(chǔ)研究和臨床治療的一個亟需解決的難題。近期大量體內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),天然化合物協(xié)同化療藥物使用不僅可以減輕化療藥物對細胞的毒副作用,同時還能提高腫瘤細胞凋亡率。因此,尋找低毒高效且作用靶點廣泛的抗腫瘤天然化合物已成為抗腫瘤研究的熱點之一。β-胡蘿卜素是一種具有重要生理功能的共軛多烯烴類化合物,廣泛存在于綠色植物、水果、蔬菜中。β-胡蘿卜素作為維生素A的前體,在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為兩分子維生素A,在細胞生長和分化過程中發(fā)揮重要作用。流行病學(xué)研究證實,經(jīng)常食用富含β-胡蘿卜素的蔬菜及水果能夠有效降低各種癌癥的發(fā)生率。研究表明,β-胡蘿卜素具有抗氧化、清除活性氧自由基等功能,并且其抗腫瘤作用可能與其調(diào)節(jié)細胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)有關(guān)。近期研究表明,β-胡蘿卜素可以通過多種機制抑制不同腫瘤細胞的增殖,包括乳腺癌、結(jié)腸癌、黑色素瘤以及前列腺癌等。然而,目前有關(guān)β-胡蘿卜素對食管鱗癌作用的研究報道較少,此外,β-胡蘿卜素能否與5-FU發(fā)揮協(xié)同抗癌作用呢?針對以上問題,本課題探討β-胡蘿卜素單獨或聯(lián)合5-FU的體內(nèi)外抗食管鱗癌作用及其相關(guān)機制,為β-胡蘿卜素與5-FU聯(lián)合用藥治療食管鱗癌奠定理論基礎(chǔ)。本課題主要分為兩部分:第一部分:以食管鱗癌TE1、EC1、Eca109及正常食管上皮細胞Het-1A為研究對象,篩選β-胡蘿卜素作用于食管鱗癌細胞的最優(yōu)濃度及時間,并探討β-胡蘿卜素對食管鱗癌細胞增殖、凋亡、周期、遷移的影響及其分子機制;第二部分:以食管鱗癌Eca109細胞及其裸鼠體內(nèi)移植瘤為體內(nèi)外研究對象,探討β-胡蘿卜素與5-FU聯(lián)合的抗腫瘤作用及其相關(guān)機制研究。方法1.體外檢測藥物對食管鱗癌細胞增殖、凋亡、周期、遷移的影響及其機制探討CCK-8法檢測細胞增殖,篩選出藥物作用于食管鱗癌細胞的最佳濃度及時間。藥物處理后,通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期的變化,Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡的變化,利用Transwell小室法檢測細胞遷移能力的變化,實時熒光定量PCR檢測小窩蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)在m RNA水平表達,Western Blot方法檢測細胞粘附因子E-cadherin、細胞周期蛋白Cyclin D1及Cav-1/AKT/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白等的表達水平變化。2.β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU對裸鼠體內(nèi)移植瘤的抗腫瘤作用及機制研究皮下注射Eca109細胞建立食管鱗癌荷瘤裸鼠模型,待腫瘤體積至100~200mm3,將裸鼠隨機分為四組,即陰性對照組、β-胡蘿卜素治療組、5-FU治療組、聯(lián)合治療組,每兩天給藥一次連續(xù)治療三周,通過測量荷瘤鼠體重及腫瘤塊體積變化判斷β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU對荷瘤鼠的毒副作用以及對荷瘤鼠的治療效果。TUNEL法檢測腫瘤組織中Eca109細胞的凋亡水平,免疫組化檢測腫瘤中PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達水平,HE染色檢測裸鼠心肝脾肺腎等組織病理學(xué)變化。結(jié)果第一部分β-胡蘿卜素對食管鱗癌細胞的影響及其機制初步研究1.β-胡蘿卜素對食管鱗癌細胞增殖、凋亡、周期和遷移的影響β-胡蘿卜素能夠有效抑制食管鱗癌細胞的增殖,且具有時間及劑量依賴性。其中,30μMβ-胡蘿卜素作用TE1細胞48 h后,細胞生長抑制率達到50%以上,50μMβ-胡蘿卜素作用EC1和Eca109細胞48 h后,細胞生長抑制率均達到50%。而β-胡蘿卜素對正常食管上皮細胞Het-1A并無生長抑制作用。與對照組相比,β-胡蘿卜素能夠顯著促進食管鱗癌細胞株TE1、EC1和Eca109的凋亡(P0.05),且將細胞周期阻滯在G0/G1期(P0.05),明顯降低周期蛋白Cyclin D1蛋白的表達(P0.05),并且能夠降低細胞的遷移能力(P0.05)。此外,粘附因子E-cadherin蛋白表達水平較對照組顯著提高。2.β-胡蘿卜素抑制食管鱗癌細胞增殖的機制探討實時熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn),Cav-1在m RNA水平表達下調(diào),Western Blot結(jié)果表明,Cav-1/AKT/NF-κB信號通路中Cav-1、p-AKT(Ser473)、p-NF-κBp65(Ser536)和Bcl-2蛋白表達水平降低,促凋亡因子Bax、Caspase-3表達上調(diào)。第二部分β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU對食管鱗癌細胞增殖的影響及其機制初步探討1.β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU對食管鱗癌Eca109細胞增殖、凋亡、周期和遷移的影響CCK-8法檢測細胞增殖發(fā)現(xiàn),30μM 5-FU聯(lián)合30μMβ-胡蘿卜素組合處理細胞36 h后對Eca109的協(xié)同抑制率為60%±3.17%,而二者單獨作用抑制率分別為40%±2.03%、22%±3.01%。β-胡蘿卜素單獨及聯(lián)合5-FU處理后,Eca109細胞的G0/G1期的細胞比例增加明顯增加,S期細胞比例減少,且差異顯著(P0.05)。同時,細胞明顯出現(xiàn)凋亡特征:體積皺縮,與周圍細胞分離,形態(tài)不規(guī)則或變圓,而藥物聯(lián)合組細胞凋亡率明顯高于單獨用藥組和對照組。此外,與單獨作用組相比,藥物聯(lián)合組能夠更有效地降低細胞遷移能力并提升粘附因子E-caherin的表達。2.β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU抑制食管鱗癌Eca109細胞增殖的機制初步探討Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),Cav-1/AKT/NF-κB信號通路中Cav-1、p-AKT(Ser473)、p-NF-κBp65(Ser536)和Bcl-2蛋白表達水平降低,促凋亡因子Bax、caspase-3表達上調(diào),且聯(lián)合處理組效果明顯高于β-胡蘿卜素或5-FU單獨作用組。3.β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU的體內(nèi)抗腫瘤作用治療三周后,測量的腫瘤體積大小及重量分別是:對照組,(1198±156)mm3(0.38±0.08)g;β-胡蘿卜素組,(949±92)mm3,(0.28±0.01)g;5-FU組,(652±88)mm3,(0.20±0.05)g;β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU組,(408±61)mm3,(0.12±0.03)g。與對照組相比,β-胡蘿卜素組或5-FU組腫瘤體積及重量均明顯減小,β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU組與單獨處理組相比差異顯著(P0.05)。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,β-胡蘿卜素組或5-FU組中Bax/Bcl-2比率、PCNA及Caspase-3表達水平較對照組差異性顯著(P0.01);而β-胡蘿卜素聯(lián)合5-FU組中Bax/Bcl-2比率、PCNA及Caspase-3表達水平較單獨處理組具有顯著性差異(P0.01)。TUNEL檢測結(jié)果顯示,與對照組(5.02±0.81%)相比,β-胡蘿卜素(12.15±1.44%)及5-FU單獨處理組(23.03±2.67%)中Eca109細胞凋亡率明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);而聯(lián)合組細胞凋亡率(38.61±2.45%)較單獨處理組明顯升高(P0.01)。HE染色檢測結(jié)果表明,連續(xù)治療裸鼠三周后,藥物并沒有引起裸鼠各組織病理學(xué)變化。結(jié)論:1.β-胡蘿卜素能夠抑制食管鱗癌細胞增殖,促進細胞凋亡,并將細胞阻滯在G0/G1期,初步分析其可能通過調(diào)節(jié)Cav-1/AKT/NF-κB信號通路的活性發(fā)揮其細胞增殖的抑制作用。2.體外研究表明,聯(lián)合使用β-胡蘿卜素能夠降低5-FU使用量,二者能夠發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤效應(yīng),且協(xié)同抑制Cav-1/AKT/NF-κB信號通路的活性。3.體內(nèi)研究表明,β-胡蘿卜素能夠增強5-FU對食管鱗癌移植瘤生長的抑制作用,促進癌細胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何永紅,王瑞淑,黃承鈺;β-胡蘿卜素與癌癥的研究進展[J];中國公共衛(wèi)生;2000年11期

2 白樸;過量β-胡蘿卜素可誘發(fā)吸煙者肺癌[J];今日科技;2000年02期

3 忻祥法;β-胡蘿卜素研究動態(tài)[J];上海醫(yī)藥;2000年09期

4 常峰;王忠彥;胡承;羅t，

本文編號：1317771