本文關(guān)鍵詞：前列腺癌核酸適配體的篩選及性質(zhì)考察　出處：《湖南大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 核酸適配體 Cell-SELEX 轉(zhuǎn)移潛能 DU145

【摘要】：前列腺癌在男性中是除肺癌外最常見(jiàn)的惡性腫瘤。目前,針對(duì)前列腺癌的早期篩查診斷的主要依據(jù)是前列腺癌特異性抗原(PSA)水平的變化,然而這種方法缺乏特異性且PSA在非癌變的前列腺細(xì)胞中也會(huì)變化。另外,目前臨床上治療癌癥時(shí)面臨的一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)是腫瘤的轉(zhuǎn)移性,其在癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)變過(guò)程中往往具有很大的危險(xiǎn)性。因此,尋找能特異性識(shí)別具有轉(zhuǎn)移潛能的前列腺癌的生物分子,用于早期檢測(cè)、分型及治療是目前前列腺癌生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的前沿課題。核酸適配體是20-80 nt的單鏈DNA或者RNA分子,通過(guò)形成三維結(jié)構(gòu)與靶標(biāo)分子特異性識(shí)別并結(jié)合。由于核酸適配體具有易于合成和修飾,特異性好,與靶標(biāo)結(jié)合親和力高等優(yōu)點(diǎn),近年來(lái)在生物醫(yī)學(xué),生物化學(xué)等領(lǐng)域有了飛速發(fā)展,成為研究腫瘤的一種新穎而高效的手段,在未來(lái)生物醫(yī)學(xué)和臨床研究中具有不可估量的應(yīng)用前景。在此背景下,我們利用核酸適配體篩選技術(shù)得到一條特異性針對(duì)前列腺癌的核酸適配體,為前列腺癌的早期診斷,分型和治療提供了新的線索和研究方向。本論文基于Cell-SELEX技術(shù),以雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株DU145為研究對(duì)象,開(kāi)展能特異識(shí)別前列腺癌的核酸適體篩選工作,對(duì)篩選得到的核酸適配體性質(zhì)進(jìn)行了多方面的考察,并對(duì)其靶標(biāo)類型進(jìn)行了初步鑒定,本論文所篩選出來(lái)的核酸適配體有望成為前列腺癌診斷和治療的新型標(biāo)記分子,并對(duì)日后發(fā)現(xiàn)前列腺癌的分子標(biāo)記物提供了重要線索。本論文主要研究?jī)?nèi)容包括：(1)前列腺癌細(xì)胞株DU145特異性核酸適配體的篩選本工作以雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株DU145為靶細(xì)胞,以人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞株WPMY-1為對(duì)照細(xì)胞,采用Cell-SELEX技術(shù)進(jìn)行核酸適配體的篩選。經(jīng)過(guò)18輪篩選后,通過(guò)高通量測(cè)序,挑選和驗(yàn)證,得到一條能與前列腺癌細(xì)胞株DU145特異結(jié)合的核酸適配體DML-7。(2)核酸適配體DML-7的性質(zhì)考察為了使得到的核酸適配體能更好地應(yīng)用于前列腺癌的檢測(cè)和治療,我們對(duì)核酸適配體DML-7的多方面性質(zhì)進(jìn)行了考察。通過(guò)核酸適配體的二級(jí)結(jié)構(gòu)模擬和流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)分析了該核酸適配體刪減后與靶細(xì)胞的結(jié)合情況,確定篩選所得到的核酸適配體兩端引物序列在結(jié)合靶標(biāo)上也起著重要的作用,是不可缺少的部分。通過(guò)親和力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)表明核酸適配體與靶細(xì)胞DU145的解離常數(shù)在納摩爾范圍內(nèi),為49.4nM+5.1。通過(guò)在血清中的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明,DML-7即使在未做任何修飾的情況下仍具有很高的穩(wěn)定性,具有應(yīng)用在活體中的潛能。并且,內(nèi)在化實(shí)驗(yàn)表明在生理情況下DML-7能進(jìn)入細(xì)胞,因而可以作為特異性的分子探針,為應(yīng)用于靶向給藥和靶向治療奠定了重要的基礎(chǔ)。進(jìn)一步通過(guò)用不同蛋白酶處理細(xì)胞膜表面蛋白的實(shí)驗(yàn)表明,該條核酸適配體可能與細(xì)胞膜上的某種可抵抗酶作用或者糖基化程度比較高的蛋白質(zhì)結(jié)合。另外,還考察了DML-7識(shí)別其他腫瘤細(xì)胞的能力,DML-7能與雄性激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞和部分貼壁細(xì)胞特異性的結(jié)合,而不能與懸浮細(xì)胞結(jié)合,推測(cè)DML-7與細(xì)胞結(jié)合的靶標(biāo)分子可能與細(xì)胞的粘附和轉(zhuǎn)移相關(guān)。通過(guò)組織芯片成像技術(shù)從臨床復(fù)雜樣品的組織水平考察了DML-7特異性識(shí)別腫瘤的能力,結(jié)果表明其在組織水平能很好的與前列腺癌結(jié)合,并且隨著轉(zhuǎn)移潛能的增加識(shí)別能力逐步提高。
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁紅茹;楊松濤;張濤;胡桂秋;夏咸柱;;核酸適配體及其在病原微生物學(xué)中的應(yīng)用[J];生物工程學(xué)報(bào);2011年05期

2 姚遠(yuǎn);張波;;核酸適配體及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2014年08期

3 甘龍杰;蘭小鵬;;適配體芯片技術(shù)及其應(yīng)用[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2009年06期

4 蘭小鵬;;適配體技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究中的作用[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2012年10期

5 李曉佩;楊良嶸;黃昆;李文松;孫西同;劉會(huì)洲;;核酸適配體在生化分離及檢測(cè)領(lǐng)域中的研究進(jìn)展[J];化工學(xué)報(bào);2013年01期

6 劉婷先;張娜;;適配體在腫瘤治療方面的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2013年05期

7 唐德平;張宇潔;毛愛(ài)紅;;適配體在體外細(xì)胞檢測(cè)中的應(yīng)用[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年13期

8 李紅玉;閻輝;;適配體與病毒性感染診斷及治療[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2013年05期

9 滿燕;呂雪飛;彭廣;宋達(dá);慶宏;;雙適配體夾心微陣列芯片在凝血酶檢測(cè)中的應(yīng)用[J];生命科學(xué)儀器;2014年Z1期

10 胡燕;楊先達(dá);;核酸適配體在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡圣;劉彩云;盧建忠;;基于核酸適配體和酶循環(huán)放大的腺苷化學(xué)發(fā)光檢測(cè)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)發(fā)光分析學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

2 陳巍;趙新穎;屈鋒;;毛細(xì)管電泳法篩選蛋白質(zhì)的核酸適配體的初步研究[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

3 楊曉娟;邴濤;梅宏成;上官棣華;;核酸適配體用于手性拆分L型和D型色氨酸[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

4 鄭冬梅;婁新徽;;一種基于結(jié)構(gòu)開(kāi)關(guān)型適配體的無(wú)標(biāo)記熒光傳感法[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第9分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

5 薛利云;周小明;邢達(dá);;基于核酸適配體探針和酶輔助熒光信號(hào)擴(kuò)增的等溫高靈敏度蛋白檢測(cè)方法[A];中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2011年

6 馬文韜;古力;屈鋒;;毛細(xì)管電泳篩選大腸桿菌適配體的初步研究[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

7 梁好均;徐華國(guó);鄧偉;;核酸適配體鏈構(gòu)象轉(zhuǎn)變的研究[A];2014年兩岸三地高分子液晶態(tài)與超分子有序結(jié)構(gòu)學(xué)術(shù)研討會(huì)摘要集[C];2014年

8 王曉芳;程琳;耿霞;趙強(qiáng);;基于適配體修飾的磁珠和量子點(diǎn)熒光法檢測(cè)凝血酶[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第9分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

9 汪海林;章大鵬;;單核苷水平核酸適配體與蛋白質(zhì)相互作用分析[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第9分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

10 溫桂清;范燕燕;梁愛(ài)惠;蔣治良;;核酸適配體納米金共振散射光譜檢測(cè)血清中鉀離子[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十五屆全國(guó)有機(jī)分析及生物分析學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 潘文;核酸適配體在醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

2 于洋　田野;蛋白質(zhì)檢測(cè)有了新方法[N];吉林日?qǐng)?bào);2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 黃玉坤;基于核酸適配體識(shí)別-時(shí)間分辨熒光納米探針的生物毒素檢測(cè)方法研究[D];江南大學(xué);2015年

2 陳霞;功能核酸的篩選及在分析檢測(cè)中的應(yīng)用[D];武漢大學(xué);2012年

3 林雪霞;微流控芯片與可控適配體技術(shù)用于細(xì)胞代謝物分析及其相互作用的研究[D];北京化工大學(xué);2015年

4 周慶同;生物相空間中的適配體和藥物虛擬篩選[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

5 郭業(yè)民;基于適配體傳感器的牛奶中抗生素殘留快速檢測(cè)技術(shù)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 李菁菁;適配體功能化的熒光納米探針用于蛋白和細(xì)胞傳感研究[D];南京大學(xué);2012年

7 于鴿;乙丙肝病毒相互干擾及適配體在肝癌診斷及靶向治療中的作用[D];吉林大學(xué);2016年

8 王成全;基于磁控適配體傳感體系的農(nóng)產(chǎn)品中典型霉菌毒素檢測(cè)研究[D];江蘇大學(xué);2016年

9 姜紅巖;自組裝RNA適配體納米傳感器[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

10 胡波;海洋聚醚類毒素基于適配體的檢測(cè)及生物合成的探索[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張?jiān)聜b;蛋白質(zhì)寡核苷酸適配體的篩選與應(yīng)用研究[D];山東師范大學(xué);2009年

2 李慧玲;BHL DNA適配體對(duì)銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)抑制作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉金釧;適配體納米金比色法靈敏度影響因素研究及其在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 于連元;核酸適配體修飾的納米顆粒在腫瘤靶向免疫治療及靶向熱療中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

5 趙變軍;基于適配體特異性作用的乳腺癌細(xì)胞表面多種腫瘤標(biāo)記物同時(shí)檢測(cè)的新方法研究[D];南京師范大學(xué);2015年

6 喬醴峰;基于核酸適配體的β-葡萄糖醛酸苷酶一步純化固定化研究及其應(yīng)用[D];石河子大學(xué);2015年

7 呂莉;基于適配體的酶聯(lián)吸光度法檢測(cè)血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB[D];山西大學(xué);2015年

8 陳艷霞;核酸適配體/小檗堿熒光體系的構(gòu)筑及分析應(yīng)用[D];山西大學(xué);2015年

9 呂琴;基于熒光標(biāo)記適配體的熒光各向異性法檢測(cè)小分子[D];山西大學(xué);2015年

10 朱志玲;基于核酸適配體的赭曲霉毒素A SPR檢測(cè)技術(shù)研究[D];北京化工大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1316774