本文關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌無線粒體DNA細(xì)胞株的建立及其生物學(xué)行為的觀察　出處：《成都醫(yī)學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：結(jié)直腸癌(CRC)在發(fā)達(dá)國家中腫瘤發(fā)病率排名第四,死亡率居第二。我國CRC的發(fā)病率和死亡率均以每年3%-5%的速度遞增,且發(fā)病人群有明顯的年輕化趨勢。結(jié)直腸癌早期癥狀不典型,診斷率很低,尤其是結(jié)直腸癌的術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,成為導(dǎo)致結(jié)直腸癌患者預(yù)后不理想甚至死亡的主要原因。因此探索結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制,尋找更為有效的檢測指標(biāo)進(jìn)行早期診斷,以及探索新的有效治療方法有著十分重要的意義。目的流行病學(xué)研究表明結(jié)直腸癌細(xì)胞線粒體DNA(mt DNA)拷貝數(shù)變異與患者預(yù)后具有顯著相關(guān)性,但因缺乏相關(guān)體外細(xì)胞模型導(dǎo)致其細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)及具體分子機(jī)制尚不明確。因此建立結(jié)直腸癌ρ0細(xì)胞株(無mt DNA),并初步研究拷貝數(shù)變異對細(xì)胞生物學(xué)行為的改變及其作用機(jī)制,為尋找結(jié)直腸癌新的治療方法提供研究平臺。方法(1)在含有丙酮酸、尿苷及不同濃度溴化乙錠的培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸癌細(xì)胞株SW480、HCT 116、HCT-8,以不加溴化乙錠的細(xì)胞為對照,利用實(shí)時定量PCR技術(shù)監(jiān)測不同處理組mt DNA拷貝數(shù)的變化;(2)光鏡下觀察觀察結(jié)直腸癌ρ0細(xì)胞形態(tài)的變化;(3)ρ0細(xì)胞及其親本細(xì)胞經(jīng)mito-tracker染色后用激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體數(shù)量的變化;(4)細(xì)胞計數(shù)法繪制構(gòu)建ρ0細(xì)胞及其親本細(xì)胞的生長曲線;(5)利用流式細(xì)胞儀檢測上述3對細(xì)胞的細(xì)胞周期變化;(6)以Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)計數(shù)穿膜細(xì)胞數(shù)來比較上述3對細(xì)胞的侵襲能力;(7)流式細(xì)胞儀檢測這上述3對細(xì)胞活性氧(ROS)的生成。結(jié)果(1)SW480細(xì)胞用50 ng/m L EB處理25代后,再以100 ng/m L EB處理14代可成功構(gòu)建SW480ρ0細(xì)胞株;HCT116細(xì)胞加用EB 100 ng/m L培養(yǎng)32代,繼續(xù)用EB 200 ng/m L培養(yǎng)10代,再用EB 500 ng/m L培養(yǎng)3代,可成功獲得HCT 116ρ0細(xì)胞株;HCT-8細(xì)胞用200 ng/m L EB培養(yǎng)24代,可成功獲得HCT-8ρ0細(xì)胞株。(2)在光鏡下觀察,3株ρ0細(xì)胞均較其親本細(xì)胞變大變長。(3)Mito-tracker染色后經(jīng)激光共聚焦顯微鏡觀察ρ0細(xì)胞線粒體均較其親本細(xì)胞線粒體的個數(shù)增多。(4)SW480ρ0、HCT 116ρ0、HCT-8ρ0生長速度明顯慢于其親本細(xì)胞,呈較為平緩的生長曲線。(5)在細(xì)胞周期的各個階段里,3株ρ0細(xì)胞與其親本細(xì)胞的百分比相似,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(6)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,3株ρ0細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)均較其親本細(xì)胞顯著減少(P0.01)。(7)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)ROS生成顯示,3株ρ0細(xì)胞胞內(nèi)ROS生成均較其親本細(xì)胞顯著減少(P0.01)。結(jié)論利用EB處理法可成功構(gòu)建結(jié)直腸癌ρ0細(xì)胞株,但不同細(xì)胞構(gòu)建方法不盡相同。此種方法構(gòu)建的無mt DNA細(xì)胞可在含尿嘧啶、丙酮酸和10%胎牛血清的培養(yǎng)基中連續(xù)傳代、穩(wěn)定生長。mt DNA拷貝數(shù)的降低可顯著影響結(jié)直腸癌細(xì)胞形態(tài)及其線粒體數(shù)量。結(jié)直腸癌線粒體電子傳遞鏈功能缺失細(xì)胞抑制細(xì)胞周期進(jìn)程,增殖、侵襲能力明顯減弱,但是并不影響細(xì)胞周期各個階段的百分比,可能與細(xì)胞內(nèi)ROS的生成減少有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34

【引證文獻(xiàn)】

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1 石菊芳;張s，

本文編號：1315076