本文關(guān)鍵詞：CIK聯(lián)合黃芪多糖對(duì)Hela細(xì)胞體內(nèi)外殺傷效應(yīng)的研究

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【摘要】：目的:伴隨著生物技術(shù)的不斷進(jìn)展,大量的新型生物治療療法及相應(yīng)的制劑陸續(xù)進(jìn)入臨床前實(shí)驗(yàn)階段或直接臨床使用,過(guò)繼性免疫細(xì)胞療法已經(jīng)成為了繼手術(shù)治療、放射治療和化學(xué)治療后的第4種腫瘤治療手段,對(duì)于機(jī)體殘存的轉(zhuǎn)移腫瘤病灶的治療效果尤其顯著,是防治腫瘤復(fù)發(fā)的有效手段�；诂F(xiàn)代生命科學(xué)和生物技術(shù)的發(fā)展,細(xì)胞免疫療法不僅可以作為前三種治療的補(bǔ)充手段,甚至對(duì)于前三種方法治療無(wú)效的腫瘤患者,細(xì)胞免疫治療也顯示出延長(zhǎng)患者生命、改善生存質(zhì)量,甚至扭轉(zhuǎn)腫瘤病情發(fā)展的作用。過(guò)繼細(xì)胞免疫療法是腫瘤生物治療的一種手段,最近十年來(lái)應(yīng)用細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine induced killer,CIK細(xì)胞)是新一代過(guò)繼細(xì)胞治療腫瘤的新型選擇之一。技術(shù)成熟的CIK細(xì)胞是將患者或者健康人采集來(lái)的外周血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)多種細(xì)胞因子在體外共同培養(yǎng)特定時(shí)間后收獲而來(lái)的多樣性的異質(zhì)免疫細(xì)胞。其中的CIK細(xì)胞由于同時(shí)表達(dá)人CD3+和CD56+兩種細(xì)胞表面蛋白分子,因此又被稱(chēng)為NK細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞,兼具有人體內(nèi)適應(yīng)性免疫應(yīng)答中T淋巴細(xì)胞的腫瘤殺傷活性和自然殺傷細(xì)胞的非MHC限制性。這意味著CIK在增強(qiáng)機(jī)體自身的免疫監(jiān)視和免疫殺傷功能,殺傷微小癌灶,抑制原發(fā)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等方面具備獨(dú)特的治療優(yōu)勢(shì)。經(jīng)過(guò)多年臨床統(tǒng)計(jì)顯示,CIK細(xì)胞對(duì)消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的多種惡性腫瘤均有不錯(cuò)的治療效果。然而,如何評(píng)價(jià)CIK的療效,尤其是對(duì)于腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制效果,以及如何監(jiān)控殘存腫瘤的復(fù)發(fā),是當(dāng)前腫瘤生物治療研究的一個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題。黃芪多糖是蒙古黃芪或膜莢黃芪的主要有效成分,其干燥根經(jīng)提取后可獲得多成分的水溶性雜多糖,由己糖醛酸、葡萄糖、果糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸等組成,是有效地多特異性和分特異性的免疫促進(jìn)劑或調(diào)節(jié)劑。黃芪多糖口服進(jìn)入人體內(nèi)后,能逆轉(zhuǎn)化療藥物引起的人體免疫抑制作用嗎,增強(qiáng)人單核巨噬細(xì)胞的吞噬活性,對(duì)人固有免疫系統(tǒng)的自然殺傷細(xì)胞釋放多種活性物質(zhì),例如黃芪多糖可提高創(chuàng)傷后活化T淋巴細(xì)胞內(nèi)白介素2基因轉(zhuǎn)錄表達(dá),從而部分調(diào)節(jié)化療后或手術(shù)后腫瘤患者細(xì)胞免疫功能低下。此外,黃芪多糖經(jīng)由誘導(dǎo)人外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生干擾素等免疫活性蛋白或多肽來(lái)提高的自然殺傷細(xì)胞抗腫瘤活性和殺傷效力。研究表明,黃芪多糖自身有一定的抗腫瘤的作用,且與臨床應(yīng)用的生物制劑白介素-2的作用相似,聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)白介素-2抗腫瘤效應(yīng)有顯著的增強(qiáng)作用�；趪�(guó)內(nèi)外對(duì)于CIK細(xì)胞和黃芪多糖在抗腫瘤研究中的最近進(jìn)展,本論文重點(diǎn)探討細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞聯(lián)合中草藥制劑黃芪多糖對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞株的體內(nèi)和體外殺傷效應(yīng)。方法:清晨采集10名健康人空腹外周靜脈血,使用人淋巴細(xì)胞分離液和密度梯度離心法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞后進(jìn)入體外培養(yǎng)階段,在實(shí)驗(yàn)室使用序貫的重組人細(xì)胞因子和抗人單克隆抗體定向誘導(dǎo)和增殖CIK細(xì)胞,大約在體外培養(yǎng)的第14天,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),具備CIK細(xì)胞表型的細(xì)胞比例從0.19%上升到35.2%。首先在體外檢測(cè)CIK細(xì)胞和黃芪多糖本身對(duì)Hela細(xì)胞株的殺傷活性,分別檢測(cè)應(yīng)用不同效靶比的CIK細(xì)胞與體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞來(lái)檢測(cè)CIK細(xì)胞的殺傷活性,不同濃度的黃芪多糖對(duì)Hela細(xì)胞的直接作用,以及不同效靶比的CIK細(xì)胞與最大濃度的黃芪多糖聯(lián)合作用的殺傷活性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,在Balb/c小鼠皮下接種宮頸癌Hela細(xì)胞株,實(shí)驗(yàn)共四組:生理鹽水對(duì)照組,單獨(dú)黃芪多糖組,單獨(dú)CIK組和黃芪多糖聯(lián)合CIK組,細(xì)胞和黃芪多糖經(jīng)尾靜脈注射進(jìn)入實(shí)驗(yàn)小鼠,觀察小鼠腫瘤的生長(zhǎng)情況以及各組對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤作用。結(jié)果:10位健康人外周血,在提取外周血單個(gè)核細(xì)胞后,通過(guò)實(shí)驗(yàn)室體外誘導(dǎo)分化和擴(kuò)增,細(xì)胞總數(shù)顯著擴(kuò)增,經(jīng)體外流式細(xì)胞儀檢測(cè),CD3+CD56+雙陽(yáng)性的CIK細(xì)胞比例不斷上升。人源性的CIK細(xì)胞在不同效靶比下對(duì)Hela細(xì)胞都顯示出有殺傷活性,且殺傷活性隨細(xì)胞濃度提高而不斷增強(qiáng);黃芪多糖在不同濃度(0.25、0.5和1mg/m L)下對(duì)于Hela細(xì)胞均無(wú)體外直接殺傷活性;三種效靶比的人源性CIK細(xì)胞聯(lián)合黃芪多糖后,其對(duì)Hela細(xì)胞的體外殺傷活力較相同效靶比的CIK細(xì)胞并無(wú)明顯提高。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,黃芪多糖聯(lián)合CIK能夠顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng),部分小鼠的移植腫瘤完全消失,其抑瘤率可達(dá)80.6%,與單獨(dú)CIK細(xì)胞治療組和單獨(dú)黃芪多糖治療組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:黃芪多糖能提高CIK細(xì)胞在體內(nèi)抗宮頸癌細(xì)胞活性,可用于臨床上宮頸癌的過(guò)繼性免疫治療。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R730.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1304920