本文關(guān)鍵詞：HBV通過上調(diào)miR-331-3p的表達(dá)從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖

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【摘要】：目的研究miR-331-3p在HBV相關(guān)肝癌發(fā)生發(fā)展中所起到的作用及其機(jī)制。方法1.通過基因芯片技術(shù)篩選在HepG2和HepG2.2.15細(xì)胞系中差異性表達(dá)的miRNA,用qRT-PCR的方法對差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行驗(yàn)證；選取在HepG2.2.15中表達(dá)穩(wěn)定上升的miR-331-3p作為研究對象,在穩(wěn)定和瞬時表達(dá)HBV的肝癌細(xì)胞系中檢測HBV對miR-331-3p的作用。2.構(gòu)建miR-331-3p啟動子表達(dá)質(zhì)粒,檢測HBV對miR-331-3p啟動子的作用,研究HBV調(diào)節(jié)miR-331-3p的機(jī)制。3.用MTS、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測miR-331-3p對SMMC7721細(xì)胞增殖的影響。4.通過生物信息學(xué)網(wǎng)站尋找miR-331-3p的靶基因。通過構(gòu)建靶基因3’-UTR表達(dá)質(zhì)粒,檢測miR-331-3p對靶基因3’-UTR活性的影響。用qRT-PCR和Western blot分別在mRNA水平和蛋白水平檢測miR-331-3p對靶基因的作用。5.用qRT-PCR和Western blot檢測HBV對靶基因的作用,并研究HBV、miR-331-3p和靶基因三者之間的關(guān)系。6.構(gòu)建靶基因ING5真核表達(dá)質(zhì)粒和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,MTS、平板克隆形成等實(shí)驗(yàn)檢測靶基因?qū)MMC7721細(xì)胞增殖的影響。7.用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測miR-331-3p和靶基因ING5對裸鼠體內(nèi)腫瘤增殖的影響。8.用Western blot的方法檢測伴隨HBV感染的肝癌病人標(biāo)本中靶基因ING5的表達(dá)量。結(jié)果1.MiR-331-3p在表達(dá)HBV的肝癌細(xì)胞系中表達(dá)上升。2.HBV通過上調(diào)miR-331-3p啟動子從而上調(diào)其表達(dá)。3.MiR-331-3p能夠促進(jìn)SMMC7721增殖。4.MiR-331-3p能夠通過結(jié)合VHL、ING53'-UTR從而抑制靶基因VHL、ING5的表達(dá)。VHL和ING5是miR-331-3p的靶基因。5.HBV能夠抑制靶基因ING5的表達(dá),并且其抑制作用是通過上調(diào)miR-331-3p的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。6.ING5能夠抑制SMMC7721細(xì)胞增殖。7.MiR-331-3p促進(jìn)裸鼠皮下腫瘤生長,ING5抑制腫瘤生長。8.伴隨HBV感染的肝癌病人標(biāo)本中ING5的表達(dá)量下降。結(jié)論HBV能夠通過上調(diào)niR-331-3p進(jìn)而抑制靶基因ING5的表達(dá),影響HCC的發(fā)生和發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

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5 周e，

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