發(fā)布時(shí)間：2017-12-17 22:03

  本文關(guān)鍵詞：激活素A通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡

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【摘要】：激活素A(activin A)最早是由卵巢中分離的糖蛋白,屬于轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor β,TGFβ)超家族成員,是一種多功能生長和分化因子,具有廣泛的生物學(xué)作用,在胚胎初期形成、造血細(xì)胞增殖和分化以及腫瘤細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮重要作用。細(xì)胞凋亡(apoptosis)又稱程序性細(xì)胞死亡(programmed celldeath, PCD),是機(jī)體在正常生長發(fā)育或病理狀態(tài)下由相關(guān)基因調(diào)控的一個(gè)復(fù)雜性細(xì)胞主動(dòng)性死亡方式,是機(jī)體清除老化、受損及突變細(xì)胞,維持機(jī)體正常發(fā)育所必需的一種重要機(jī)制,細(xì)胞凋亡異常與機(jī)體多種疾病有關(guān),如神經(jīng)性及神經(jīng)發(fā)育相關(guān)性疾病、各種腫瘤的發(fā)生等。細(xì)胞凋亡途徑主要分為三種：死亡受體途徑,線粒體途徑及近些年發(fā)現(xiàn)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑。有關(guān)研究顯示激活素A可通過線粒體途徑誘導(dǎo)B細(xì)胞凋亡,但激活素A能否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡仍缺乏相關(guān)研究報(bào)導(dǎo)。本研究以小鼠肺腺癌細(xì)胞系Lewis細(xì)胞和人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞為研究對(duì)象,探討激活素A對(duì)小鼠及人肺腺癌細(xì)胞增殖以及凋亡的影響；同時(shí)分析小鼠肺腺癌細(xì)胞系Lewis細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑相關(guān)蛋白Caspase12,Chop和GADD34的表達(dá)：并采用表達(dá)GADD34 shRNA慢病毒感染Lewis細(xì)胞,建立敲低GADD34基因表達(dá)的Lewis細(xì)胞系(shGADD34/Lewis),進(jìn)一步確定激活素A可否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡。研究首先采用MTT、BrdU法以及CSFE熒光標(biāo)記法檢測細(xì)胞增殖,通過Annexin-V/PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況,結(jié)果顯示,激活素A可以明顯抑制體外培養(yǎng)小鼠肺腺癌細(xì)胞系Lewis細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)Lewis細(xì)胞凋亡；研究還顯示激活素A也能抑制人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞增殖,并誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步采用RT-PCR檢測小鼠肺腺癌細(xì)胞系Lewis細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑相關(guān)蛋白Caspase12、Chop以及GADD34mRNA表達(dá),結(jié)果顯示激活素A作用Lewis細(xì)胞12h,可以明顯促進(jìn)Caspase12、Chop及GADD34 mRNA表達(dá)。最后,為了進(jìn)一步確定激活素A通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡,實(shí)驗(yàn)采用表達(dá)GADD34 shRNA慢病毒感染Lewis細(xì)胞,建立敲低GADD34基因表達(dá)的Lewis細(xì)胞系(shGADD34/Lewis)及對(duì)照病毒感染的Lewis細(xì)胞系(shcon/Lewis),研究發(fā)現(xiàn)敲低GADD34基因表達(dá)可以明顯削弱激活素A對(duì)Lewis細(xì)胞增殖的抑制作用及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。上述結(jié)果表明,激活素A具有抑制小鼠肺腺癌細(xì)胞系Lewis細(xì)胞和人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞增殖,以及誘導(dǎo)Lewis細(xì)胞及A549細(xì)胞凋亡作用；激活素A可以促進(jìn)小鼠肺腺癌細(xì)胞系Lewis細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)急途徑相關(guān)蛋白Caspas12、 Chop和GADD34 mRNA表達(dá)；敲低GADD34基因表達(dá)可以明顯削弱激活素A對(duì)Lewis細(xì)胞增殖的抑制作用及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。因此,激活素A可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞凋亡,提示激活素A具有進(jìn)一步開發(fā)成誘導(dǎo)肺腺癌凋亡的治療藥物的潛能。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳月橋;王麗;武建華;;細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑研究進(jìn)展[J];中國實(shí)用醫(yī)藥;2007年33期

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本文編號(hào)：1301698