本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-183在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及生物學(xué)功能研究

  更多相關(guān)文章： MicroRNA-183 非小細(xì)胞肺癌 細(xì)胞增殖 遷移 侵襲

【摘要】：目的:在全世界范圍內(nèi),肺癌是發(fā)病率及死亡率均高的惡性腫瘤之一,是導(dǎo)致癌癥致死的主要原因,其中非小細(xì)胞肺癌(non-smal1 cell lung cancer,NSCLC)約占肺癌的80%。研究表明,MicroRNA(mi RNA)對(duì)肺癌的發(fā)生、發(fā)展發(fā)揮著極其重要的作用。在實(shí)驗(yàn)中首先對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本與配對(duì)的癌旁正常組織標(biāo)本利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)技術(shù)檢測(cè)MicroRNA-183(miRNA-183)的表達(dá)水平;其次構(gòu)建miR-183穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞株和抑制mi R-183表達(dá)細(xì)胞株,觀察miR-183對(duì)非小細(xì)胞肺癌增殖、侵襲和遷移能力等生物學(xué)行為的影響,為肺癌的早期診斷,靶向治療和改善預(yù)后提供了新的理論依據(jù)。方法:1、通過qRT-PCR技術(shù)測(cè)定miR-183在21例非小細(xì)胞肺癌組織與癌旁正常組織中的差異表達(dá)。2、構(gòu)建miR-183慢病毒及陰性對(duì)照載體,分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞株,建立穩(wěn)定過表達(dá)miR-183的細(xì)胞株A549/miR-183 mimics,抑制miR-183表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株A549/miR-183 inhibitor以及陰性對(duì)照組A549/negative control,轉(zhuǎn)染48h后在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率并利用q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)mi R-183的表達(dá)水平,驗(yàn)證轉(zhuǎn)染細(xì)胞株是否成功建立。3、A549/mi R-183 mimics,549/miR-183inhibitor細(xì)胞株增值能力的觀察:對(duì)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞株應(yīng)用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(CCK-8)來檢測(cè)增值能力的變化情況。4、A549/miR-183 mimics,A549/miR-183 inhibitor細(xì)胞株遷移能力的觀察:應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)對(duì)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞株的遷移能力進(jìn)行檢測(cè)。5、a549/mir-183mimics,a549/mir-183inhibitor細(xì)胞株侵襲能力的觀察:應(yīng)用transwell侵襲實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞株侵襲能力的變化情況。結(jié)果:1、相對(duì)于癌旁正常組織,mir-183在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平呈顯著上調(diào)(p0.05),證明mir-183在nsclc組織中明顯升高;2、構(gòu)建mir-183慢病毒載體,轉(zhuǎn)染mir-183mimics48h后,qrt-pcr結(jié)果顯示mir-183表達(dá)水平較對(duì)照組相比呈顯著升高(18.23±0.68比1.0±0.29,p0.01),而轉(zhuǎn)染mir-183inhibitor表達(dá)水平較對(duì)照組相比呈顯著降低(0.06±0.01比1.0±0.29,p0.01),說明mir-183慢病毒過表達(dá)載體和抑制mir-183表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建成功,實(shí)驗(yàn)證明慢病毒轉(zhuǎn)染有效;3、cck-8實(shí)驗(yàn)表明,與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染mir-183mimics的肺癌a549細(xì)胞株增殖速度明顯增強(qiáng),而轉(zhuǎn)染mir-183inhibitor的肺癌a549細(xì)胞株的增殖速度明顯降低,證明過表達(dá)mir-183能增強(qiáng)a549細(xì)胞株增殖能力;4、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,mir-183mimics轉(zhuǎn)染的a549細(xì)胞株遷移率明顯大于對(duì)照組,證明mir-183mimics可增強(qiáng)a549細(xì)胞株的遷移能力;而mir-183inhibitor轉(zhuǎn)染的a549細(xì)胞株遷移率明顯小于對(duì)照組,證明mir-183inhibitor降低a549細(xì)胞株的遷移能力,證明過表達(dá)mir-183能增強(qiáng)a549細(xì)胞株遷移能力;5、transwell侵襲實(shí)驗(yàn)中,與空白對(duì)照組(55.72±3.326)和陰性對(duì)照組(47.64±3.571)相比,轉(zhuǎn)染mir-183mimics后的a549細(xì)胞株24h后的侵襲穿膜的細(xì)胞數(shù)(154.29±4.735)明顯升高(p0.01),而mir-183inhibitor的a549細(xì)胞株24h后的侵襲穿膜的細(xì)胞數(shù)(22.35±2.752)明顯低于對(duì)照組(p0.01),證明過表達(dá)mir-183能增強(qiáng)a549細(xì)胞株侵襲能力。結(jié)論:1、mir-183在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平與癌旁正常組織相比明顯升高。2、成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株A549/miR-183mimics,A549/mi R-183 inhibitor以及對(duì)照組A549/negative control。3、過表達(dá)miR-183能促進(jìn)A549肺腺癌細(xì)胞株的增殖、侵襲和遷移的能力,證明miR-183能增強(qiáng)肺癌增殖、遷移及侵襲的功能,提示miR-183為肺癌的診治提供了新的靶點(diǎn),使其為肺癌的診斷治療和預(yù)后監(jiān)測(cè)提供了新的指導(dǎo)方向。
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 許運(yùn)龍,郭昭揚(yáng),張?jiān)婆d,許賢榮;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在人非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床研究[J];中華腫瘤雜志;2000年05期

2 王繼營(yíng),高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌37例[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年02期

3 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細(xì)胞肺癌的化療:一種新趨勢(shì)[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

4 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細(xì)胞肺癌[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

5 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細(xì)胞肺癌病人的一項(xiàng)預(yù)后因素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2000年11期

6 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

7 朱建英;預(yù)計(jì)2009年非小細(xì)胞肺癌藥物市場(chǎng)將達(dá)20億美元[J];國(guó)外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊(cè));2001年02期

8 張利偉,劉樹秋,陳海英,萬錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細(xì)胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2001年05期

9 王肇炎;晚期非小細(xì)胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

10 朱堯武,楊宇飛;非小細(xì)胞肺癌的術(shù)后輔助治療[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2001年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張新民;唐蜜;李代強(qiáng);;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國(guó)仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀察非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國(guó)腫瘤核醫(yī)學(xué)新技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛;邊海蓉;盧振國(guó);楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復(fù)發(fā)非小細(xì)胞肺癌[A];2007第六屆全國(guó)放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

4 馮耘;萬歡英;高蓓莉;項(xiàng)軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶二在非小細(xì)胞肺癌腫瘤生長(zhǎng)和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療及一線治療[A];天津市抗癌協(xié)會(huì)肺癌專業(yè)委員會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細(xì)胞肺癌患者多因素預(yù)后分析[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

7 張華;;術(shù)前中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比值對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細(xì)胞肺癌治療思考[A];第三屆中國(guó)腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細(xì)胞肺癌臨床觀察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 李穎;特羅凱對(duì)中國(guó)非小細(xì)胞肺癌患者效果佳[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 曉白;非小細(xì)胞肺癌研究獲重大進(jìn)展[N];人民日?qǐng)?bào);2008年

3 記者 張文天;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進(jìn)展順利[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

5 記者高新軍;專家提出 建非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 上海長(zhǎng)海醫(yī)院呼吸科 夏陽(yáng) 整理 邱志濤;非小細(xì)胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報(bào);2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細(xì)胞肺癌發(fā)生機(jī)制[N];健康報(bào);2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細(xì)胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

9 白京麗;非小細(xì)胞肺癌最佳治療方案[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

10 ;表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑在治療非小細(xì)胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測(cè)用于非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達(dá)影響非小細(xì)胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 洪專;木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細(xì)胞肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2014年

4 張沛;ILT4在非小細(xì)胞肺癌中的作用及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 王世坤;RBP2誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌和食管鱗癌表皮間質(zhì)化[D];山東大學(xué);2015年

6 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細(xì)胞肺癌預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 邱晨;影響非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后遠(yuǎn)期生存的相關(guān)因素分析[D];山東大學(xué);2015年

8 姜遠(yuǎn)矚;術(shù)前血液學(xué)指標(biāo)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌生物學(xué)行為調(diào)控機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

10 周菊;HPV-16感染對(duì)非小細(xì)胞肺癌和A549細(xì)胞的影響及miRNAs表達(dá)改變的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王勇;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床意義[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

2 陳婷;非小細(xì)胞肺癌調(diào)強(qiáng)放射治療預(yù)后因素分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王波;單向式全胸腔鏡下解剖性肺葉切除術(shù)治療早期非小細(xì)胞肺癌的學(xué)習(xí)曲線[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 施桂清;血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合放化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效及安全性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王靜;Eg5、Ki-67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 覃建穎;IL-21和Tc1細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 張瑞;ⅢA-N2期非小細(xì)胞肺癌手術(shù)治療和放射治療的療效對(duì)比及相關(guān)預(yù)后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 石姣姣;基于多肽構(gòu)建抗腫瘤靶向藥物的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

9 胡世霖;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)辨證分型與Napsin A、TTF-1在肺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 王婷婷;細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞治療非小細(xì)胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1301253