本文關(guān)鍵詞：miR-495基因啟動(dòng)子甲基化對(duì)胃癌細(xì)胞的PRL-3基因表達(dá)影響研究

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【摘要】：目的:探討在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中靶向調(diào)控PRL-3的內(nèi)源性micro RNA分子mi R-495基因上游Cp G島甲基化對(duì)胃癌細(xì)胞的PRL-3基因表達(dá)影響。方法:培養(yǎng)2株正常胃黏膜上皮細(xì)胞系(GES-1和HFE-145)和4株轉(zhuǎn)移潛能不同的胃癌細(xì)胞系(MKN28,SGC7901,MKN45,BGC823),用Western Blot方法檢測(cè)細(xì)胞中PRL-3蛋白水平,用q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中mi R-495表達(dá)情況,通過甲基化特異性PCR(MSP)及亞硫酸氫鈉測(cè)序法(bisulfite genomic sequencing,BSP)檢測(cè)mi R-495基因啟動(dòng)子甲基化水平,Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)4種腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力。利用不同濃度(0u M、1u M、5u M、10u M)的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜胞苷-2’-脫氧胞苷(5-aza-2’-dc)處理后,37℃、5%CO2的孵箱繼續(xù)孵育48小時(shí),同樣利用以上方法測(cè)定PRL-3蛋白水平、mi R-495表達(dá)情況、mi R-495基因啟動(dòng)子甲基化水平以及腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力的變化。結(jié)果:胃癌細(xì)胞在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜胞苷-2’-脫氧胞苷去甲基化處理后,mi R-495表達(dá)均明顯增加,且明顯抑制了PRL-3蛋白及m RNA的表達(dá),Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)表明,胃癌細(xì)胞在去甲基化處理后,侵襲和遷移能力均明顯下降。結(jié)論:在胃癌腹膜侵襲轉(zhuǎn)移中靶向調(diào)控PRL-3的內(nèi)源性micro RNA分子mi R-495基因上游Cp G島甲基化使mi R-495表達(dá)下調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致胃癌腹膜轉(zhuǎn)移中PRL-3
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1299901