本文關(guān)鍵詞：Hiwi基因在肝癌發(fā)生中的機(jī)制研究

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【摘要】：目的：Hiwi蛋白,又稱為Piwi11蛋白,是人類Piwi蛋白家族中的一員。Hiwi基因已被報道在食管癌、胃癌、胰腺癌、肝癌等多種癌癥組織中表達(dá)增高,但在肝癌中Hiwi的表達(dá)改變是肝癌發(fā)生的原因還是結(jié)果目前并不明確。本研究著重探討Hiwi基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的增殖、遷移和凋亡的影響,并對其作用的分子機(jī)制進(jìn)行初步探索。方法：1.首先克隆人Hiwi基因,構(gòu)建了Hiwi表達(dá)質(zhì)粒。用Hiwi表達(dá)質(zhì)粒及對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人肝癌HepG2細(xì)胞株。采用MTT實驗檢測細(xì)胞活性變化,碘化丙啶染色方法進(jìn)行細(xì)胞周期分析,同時通過Edu染色鑒定細(xì)胞增殖。采用transwell遷移實驗檢測Hiwi對細(xì)胞遷移能力的影響。采用realtime PCR的方法檢測了EMT相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平。2.建立了小鼠原代肝細(xì)胞的培養(yǎng),構(gòu)建了帶有GFP標(biāo)記的表達(dá)人Hiwi的重組腺病毒,感染HepG2細(xì)胞和原代肝細(xì)胞,再用periforsine或?qū)σ阴０被?APAP)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,采用MTT方法檢測細(xì)胞活性變化,同時對APAP處理的HepG2細(xì)胞進(jìn)行TUNEL染色鑒定細(xì)胞凋亡情況。3.通過小鼠尾靜脈注射腺病毒構(gòu)建肝臟過表達(dá)Hiwi的在體模型,病毒注射后5d檢測肝臟組織中Hiwi的表達(dá)、凋亡相關(guān)基因和EMT相關(guān)基因的mRNA水平。小鼠尾靜脈注射腺病毒后,再腹腔注射APAP建立急性肝損傷模型,檢測Hiwi的表達(dá)對APAP引起的小鼠肝損傷的影響,同時檢測過表達(dá)Hiwi的小鼠肝臟和原代肝細(xì)胞中DNA甲基化的水平。結(jié)果：1.成功克隆了人Hiwi基因,構(gòu)建了Hiwi表達(dá)質(zhì)粒和腺病毒。通過MTT、細(xì)胞周期檢測和EdU標(biāo)記方法,發(fā)現(xiàn)Hiwi基因的表達(dá)不能促進(jìn)HepG2肝癌細(xì)胞和原代肝細(xì)胞的增殖。過表達(dá)Hiwi細(xì)胞的遷移能力和上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)基因的表達(dá)也無明顯改變。2.我們觀察了Hiwi的表達(dá)對肝細(xì)胞凋亡的影響,發(fā)現(xiàn)Hiwi對periforsine或?qū)σ阴０被?APAP)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡無抑制作用。3.成功構(gòu)建了Hiwi表達(dá)的腺病毒,用尾靜脈注入腺病毒方法建立了肝臟高表達(dá)Hiwi的小鼠模型,realtime PCR檢測結(jié)果,Hiwi組和對照組小鼠的肝臟組織中凋亡相關(guān)基因BcL2、BAX、MCL1、p53和EMT相關(guān)基因E-cadherin、N-cadherin的mRNA水平無明顯差別。Hiwi的表達(dá)對APAP引起的小鼠肝損傷無明顯影響。Hiwi的表達(dá)對小鼠肝臟和原代肝細(xì)胞中的DNA甲基化水平也無明顯影響。結(jié)論：雖然Hiwi基因的表達(dá)水平與肝癌的臨床特點相關(guān),但Hiwi可能并不是導(dǎo)致肝癌發(fā)生的癌基因,其表達(dá)的改變很可能是肝癌引起的繼發(fā)變化。Hiwi在肝癌中作用尚需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉志良;石磊芝;杜亞明;;HIWI在食管癌細(xì)胞系Eca-109中的表達(dá)及意義[J];山東醫(yī)藥;2012年32期

2 何煒;解智慧;王峰;秦艷茹;樊青霞;;干細(xì)胞因子HIWI在食管鱗癌中的表達(dá)及其與臨床預(yù)后的關(guān)系[J];中國腫瘤臨床;2012年19期

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本文編號：1290421