本文關(guān)鍵詞：miR-450a-5p在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及功能初步研究

  更多相關(guān)文章： 漿液性卵巢癌 輸卵管傘端組織 miR-450a-5p DUSP10

【摘要】：研究背景:上皮性卵巢癌是婦科最致命的惡性腫瘤,占所有卵巢癌75%~90%,其中漿液性卵巢癌又占全部上皮性卵巢癌的60%~70%。因早期階段的卵巢癌無明顯可察覺癥狀及體征,并且目前缺少有效的早期診斷及早期治療手段,故70%以上病人就診時已屬晚期,平均5年生存率低于30%,死亡率居所有女性生殖道癌癥的第一位。Micro RNAs(mi RNAs)是內(nèi)源性非編碼小RNA,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá),參與了正常細(xì)胞的增殖,細(xì)胞分化,細(xì)胞代謝及細(xì)胞凋亡等生物生理進(jìn)程,也與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。根據(jù)調(diào)控靶基因不同,mi RNAs可作為抑癌基因或癌基因參與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移、耐藥等病理進(jìn)程。目前mi RNAs與漿液性卵巢癌的研究也有報道,但作用機理尚不十分明確。目前國外研究人員認(rèn)為,漿液性卵巢癌主要起源于輸卵管上皮,且以傘端多見。本實驗組前期以正常輸卵管傘端組織為對照,經(jīng)mi RNA芯片篩選,發(fā)現(xiàn)mi R-450a-5p在漿液性卵巢癌組織中表達(dá)量顯著下調(diào),且其功能機制尚未在卵巢癌中研究報道。故本實驗組選取mi R-450a-5p為研究分子,以正常人輸卵管傘端為對照,通過初步科學(xué)研究,希望mi R-450a-5p能成為早期診斷、治療及預(yù)防漿液性卵巢癌的重要生物學(xué)分子�；谇捌谛酒Y(jié)果,本實驗組擬:(1)應(yīng)用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)技術(shù)檢測大樣本中mi R-450a-5p的表達(dá)差異情況,并分析mi R-450a-5p各組表達(dá)水平和漿液性卵巢癌臨床病理特征之間的相關(guān)性;(2)通過轉(zhuǎn)染mi R-450a-5p mimics構(gòu)建過表達(dá)mi R-450a-5p的漿液性卵巢癌SKOV3細(xì)胞系,通過細(xì)胞功能學(xué)實驗研究過表達(dá)的mi R-450a-5p對SKOV3細(xì)胞系腫瘤生物學(xué)行為的影響;(3)通過免疫印跡實驗(western blot)及雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?dual-luciferase reporter gene assay)驗證mi R-450a-5p的靶基因及調(diào)控漿液性卵巢癌發(fā)生發(fā)展的可能分子信號通路機制,為臨床治療卵巢癌提供新的理論依據(jù)。目的:1.檢測mi R-450a-5p在漿液性卵巢癌中的表達(dá)情況,并分析mi R-450a-5p的表達(dá)與漿液性卵巢癌臨床病理特征之間的關(guān)系。2.研究mi R-450a-5p對人漿液性卵巢癌SKOV3細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、周期、凋亡腫瘤生物學(xué)行為的影響。驗證mi R-450a-5p的靶基因,探討其在漿液性卵巢癌中發(fā)生發(fā)展的作用機制。方法:1.選取101例漿液性卵巢癌石蠟包埋組織及50例正常輸卵管傘端石蠟包埋組織。所有樣本的選取均由2位資深病理專家判讀完成。2.用q RT-PCR技術(shù)驗證芯片結(jié)果,并分析mi R-450a-5p表達(dá)水平和臨床病理特征分組之間相關(guān)性。3.用mi R-450a-5p mimics轉(zhuǎn)染人漿液性卵巢癌SKOV3細(xì)胞,構(gòu)建過表達(dá)mi R-450a-5p的細(xì)胞系,并設(shè)陰性對照組(NC)及空白對照組(Blank),通過MTT實驗檢測細(xì)胞增殖能力、Transwell遷移實驗和劃痕實驗檢測細(xì)胞遷移能力、Transwell侵襲實驗檢測細(xì)胞侵襲能力、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡。4.使用生物信息學(xué)軟件預(yù)測mi R-450a-5p可能調(diào)控的靶基因,查閱相關(guān)文獻(xiàn),選定靶基因。5.用western blot及dual-luciferase reporter gene assay驗證mi R-450a-5p可能的靶基因。6.結(jié)果采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,獨立樣本的t檢驗,P0.05差異認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.Mi R-450a-5p在漿液性卵巢癌組織中的表達(dá)水平顯著低于正常輸卵管傘端組織。2.Mi R-450a-5p的表達(dá)水平與漿液性卵巢癌臨床病理特征之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。3.MTT實驗:過表達(dá)mi R-450a-5p組細(xì)胞增殖活力與NC組、blank組無明顯差異,提示了mi R-450a-5p對SKOV3細(xì)胞系的增殖活力無明顯影響。Transwell遷移及侵襲實驗均顯示轉(zhuǎn)染mi R-450a-5p mimics后,細(xì)胞的遷移及侵襲能力明顯減弱,提示過表達(dá)的mi R-450a-5p不僅抑制了SKOV3細(xì)胞系的遷移能力,對其侵襲能力也有抑制。細(xì)胞劃痕實驗:Mi R-450a-5p mimics組細(xì)胞遷移能力較NC組、blank組降低,提示過表達(dá)的mi R-450a-5p抑制了SKOV3細(xì)胞系的遷移能力。流式細(xì)胞術(shù):過表達(dá)mi R-450a-5p后,mimics組細(xì)胞周期明顯被阻滯于G1期;Mi R-450a-5p mimics組、N C組、blank組凋亡結(jié)果無明顯差異。4.通過生物學(xué)軟件預(yù)測mi R-450a-5p靶基因并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),分析DUSP10可能為mi R-450a-5p的靶基因。5.通過western blot實驗發(fā)現(xiàn)mi R-450a-5p mimics組DUSP10蛋白表達(dá)水平顯著性降低;Dual-luciferase reporter gene assay實驗提示mi R-450a-5p的靶基因為DUSP10。結(jié)論:1.以正常輸卵管傘端為對照,經(jīng)大樣本驗證,mi R-450a-5p在漿液性卵巢癌中呈顯著性低表達(dá),提示mi R-450a-5p可能參與了漿液性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。2.過表達(dá)漿液性卵巢癌SKOV3細(xì)胞系mi R-450a-5p后,可降低SKOV3細(xì)胞侵襲及遷移能力,并將細(xì)胞周期阻滯于G1期。3.Mi R-450a-5p靶基因可能為DUSP10,通過mi R-450a-5p/DUSP10/MAPKs通路調(diào)節(jié)漿液性卵巢癌進(jìn)展。4.Mi R-450a-5p可能作為抑癌基因在漿液性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了作用,有望成為早期診斷及靶向治療漿液性卵巢癌的新的生物分子。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙文華;李景發(fā);;卵巢癌的高危因素與預(yù)防[J];哈爾濱醫(yī)藥;2005年06期

2 漠上花開;;“卵巢保養(yǎng)”彌天大謊[J];婚育與健康;2011年19期

3 賀國麗,王海東;殘余卵巢癌[J];海南醫(yī)學(xué);2000年05期

4 高永良,孔北華;卵巢癌的預(yù)防[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展;2001年02期

5 范利華,朱廣友;卵巢切除是否妥當(dāng)糾紛分析[J];中國臨床醫(yī)生;2003年01期

6 侍立峰;有卵巢癌遺傳傾向婦女處理選擇的系統(tǒng)回顧[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;2005年03期

7 沈樹娜,李翠萍;卵巢癌的預(yù)防[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年01期

8 宋春陽;胡紹興;;手術(shù)治療卵巢癌臨床療效觀察[J];中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè);2011年13期

9 占義平;葉麗紅;;卵巢癌中醫(yī)藥研究近況[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2013年02期

10 雷貞武;;有關(guān)卵巢去留的幾個問題(綜述)[J];四川醫(yī)學(xué);1981年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭天珍;司金超;杜建海;李偉;瞿頌義;丁永輝;衛(wèi)玉玲;;麻黃對卵巢切除大鼠脂肪代謝的影響[A];中國生理學(xué)會肥胖的臨床與基礎(chǔ)暨神經(jīng)免疫內(nèi)分泌學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2003年

2 張躍輝;侯麗輝;吳效科;匡海學(xué);王勇;曲軍衛(wèi);Erkkola Risto;Strauss Jerome;;瘦素信號傳導(dǎo)系統(tǒng)對卵巢功能的影響[A];全國第七屆中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議論文及摘要集[C];2007年

3 孫元明;楊福軍;晁愛軍;李雨民;;去卵巢小鼠造血系統(tǒng)的改變對骨細(xì)胞的影響實驗研究[A];全國第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

4 張林;;運動干預(yù)對卵巢切除大鼠血、尿骨礦生化指標(biāo)的影響[A];第七屆全國體育科學(xué)大會論文摘要匯編（二）[C];2004年

5 田宗文;丁成縈;王喬;曾慶云;戴冀斌;周新華;;雌二醇對卵巢切除大鼠心房特殊顆粒及心房肽影響的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

6 王莉;李秀榮;陳紅敏;;卵巢外腹膜漿液性乳頭狀癌與卵巢癌的臨床比較研究[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第七次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

7 趙詠芳;沈培芝;徐宇;石印玉;;補腎益精方對卵巢切除大鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)的影響[A];全國老年骨質(zhì)疏松專題學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2000年

8 劉仙(女當(dāng));蘭曉紅;;子宮及卵巢切除手術(shù)患者的心理護(hù)理[A];2005年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)暨計劃生育學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

9 李亞珍;楊欣;吳士良;商敏;吳瓊;;雌激素和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑對卵巢切除大鼠膀胱功能及結(jié)構(gòu)的影響[A];第二次全國絕經(jīng)相關(guān)問題高級學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

10 田艷紅;吳緒峰;;年輕宮頸癌患者保留卵巢功能的臨床研究進(jìn)展[A];湖北省抗癌協(xié)會第十八屆學(xué)術(shù)大會專刊[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊堤林;卵巢的秘密武器[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2003年

2 北京協(xié)和醫(yī)院 吳鳴;卵巢癌患者能保留生育功能嗎?[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

3 本報實習(xí)記者 孔璞 彭玉珊;卵巢切除后咋還痛？[N];健康時報;2003年

4 和小燕;是要“卵巢保養(yǎng)”,還是要“保住卵巢”[N];東方早報;2008年

5 劉晨;卵巢癌難發(fā)現(xiàn)，早期癥狀別忽視[N];中國醫(yī)藥報;2013年

6 ;世界首例移植冷凍卵巢者重獲生育能力[N];新華每日電訊;2004年

7 馮桃莉;子宮卵巢全切除會變性嗎[N];家庭醫(yī)生報;2008年

8 平安縣畜牧局干部 唐興太;淺談母豬閹割不全的再手術(shù)[N];西海農(nóng)民報;2011年

9 李亞蘭;乳腺癌與卵巢癌[N];中國醫(yī)藥報;2001年

10 李陽;乳腺癌與卵巢癌[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉天鳳;白蘞素對卵巢癌遷移和侵襲的影響及其機制的實驗研究[D];山東大學(xué);2015年

2 俞鳴;卵巢癌危險因素及其易感基因的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

3 胡曉霞;基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制劑與卵巢癌浸潤轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

4 戴哲浩;去卵巢、糖皮質(zhì)激素、降鈣素對雌性大鼠骨強度影響的實驗研究[D];中南大學(xué);2011年

5 范麗梅;GRP78在卵巢癌中的表達(dá)及其對卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥的影響[D];吉林大學(xué);2011年

6 葛喜珍;卵巢切除大鼠主動脈晚期糖化終末產(chǎn)物和血脂的變化及大豆異黃酮的干預(yù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

7 姜偉;銀杏內(nèi)酯B抑制血小板活化因子受體信號通路治療卵巢癌相關(guān)機制[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 張潔清;WWOX基因在卵巢癌浸潤轉(zhuǎn)移機制的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

9 李巧燕;miR-7與miR-218對卵巢癌中HoxB3及RASSF1A和Claudin-6影響的研究[D];中南大學(xué);2012年

10 李林;1、卵巢低級別、高級別漿液性腺癌分子標(biāo)志物的研究2、40歲以下子宮內(nèi)膜癌保留卵巢臨床分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 夏娜;FOXM1介導(dǎo)17β-雌二醇對卵巢癌細(xì)胞增殖侵襲作用的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 洪甲;miR-450a-5p在漿液性卵巢癌中的表達(dá)及功能初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 吳勃;玉米紫色植株色素對卵巢切除大鼠血脂水平的影響[D];吉林大學(xué);2011年

4 馮磊;卵巢癌研究進(jìn)展及87例卵巢癌臨床病例分析[D];吉林大學(xué);2006年

5 王莉;促性腺激素釋放激素類似物對化療患者卵巢功能保護(hù)有效性的系統(tǒng)分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

6 黃尹;年輕宮頸癌患者卵巢移位后卵巢功能的變化[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

7 陸雪強;體外沖擊波對雌兔卵巢的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

8 劉霞;山西省婦女卵巢癌危險因素的調(diào)查研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

9 凌丹;纖溶酶原激活因子及其抑制因子與卵巢癌的浸潤轉(zhuǎn)移[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2004年

10 古興仰;去卵巢對嚙齒動物學(xué)習(xí)記憶的影響及遠(yuǎn)志皂苷益智保護(hù)的作用[D];華南師范大學(xué);2007年

，

本文編號：1290407