發(fā)布時(shí)間：2017-12-14 13:01

  本文關(guān)鍵詞：線粒體DNA8272位點(diǎn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定與非霍奇金淋巴瘤相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:淋巴瘤是血液系統(tǒng)的惡性腫瘤,根據(jù)組織病理學(xué)分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤兩大類,非霍奇金淋巴瘤又包括眾多亞型。每種亞型的預(yù)后各不相同,對(duì)預(yù)后的評(píng)價(jià)體系也有多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。目前主要采用國(guó)際預(yù)后指數(shù)(IPI評(píng)分)對(duì)非霍奇金淋巴瘤評(píng)價(jià)預(yù)后,但其有一定局限性,尚不能完全滿足臨床需求,需探索新的預(yù)后指標(biāo),指導(dǎo)個(gè)體化治療。微衛(wèi)星(Microsatellite)是廣泛存在于原核和真核生物基因組中具有高度多態(tài)性的、短的、串聯(lián)重復(fù)的核苷酸序列。微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(Microsatellite instability MSI)是指在短核苷酸序列在復(fù)制過(guò)程中發(fā)生的重復(fù)錯(cuò)誤,這種重復(fù)單位的插入或缺失造成的微衛(wèi)星長(zhǎng)度的改變,重復(fù)序列一般以1-6bp居多。MSI是遺傳不穩(wěn)定的一種表現(xiàn)形式,包括細(xì)胞核MSI(n MSI)和線粒體微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(mt MSI)。近年研究發(fā)現(xiàn),線粒體MSI在腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后評(píng)估中起重要作用。本研究組前期在有關(guān)腎癌的系列研究中,發(fā)現(xiàn)線粒體(mtDNA)non-D-loop(5892、8272、8280、8281、8289、9777)6個(gè)位點(diǎn)中,8272位點(diǎn)腎臟腫瘤的發(fā)生及預(yù)后有明顯相關(guān)性。此位點(diǎn)線粒體MSI與淋巴瘤關(guān)聯(lián)的研究目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)試圖研究mtDNAnon-D-loop區(qū)8272位點(diǎn)GGGGGTAGA9-bp插入/缺失造成的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與非霍奇金淋巴瘤的發(fā)病及臨床特征、預(yù)后的相關(guān)性,以探討非霍奇金淋巴瘤可能的預(yù)后指標(biāo)。方法:1標(biāo)本來(lái)源:病例組標(biāo)本均來(lái)自于2005年01月~2010年01月間就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院血液科的139例經(jīng)免疫組化確診的非霍奇金淋巴瘤的成人患者,年齡14-81歲,中位年齡49歲,其中T細(xì)胞性淋巴瘤患者占69例(49.6%),主要為ALK間變T細(xì)胞性、外周T細(xì)胞性(非特指型)、T淋母細(xì)胞淋巴瘤等類型。B細(xì)胞淋巴瘤患者占70例(50.4%),其中惰性淋巴瘤共28例,包括小淋巴細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、邊緣區(qū)淋巴瘤等;侵襲性淋巴瘤占42例(包括彌漫大B細(xì)胞性、套細(xì)胞淋巴瘤、B淋巴母細(xì)胞淋巴瘤等)。抽取治療前患者5ml外周靜脈血血液標(biāo)本。正常對(duì)照組標(biāo)本為河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院進(jìn)行體檢的98例身體健康的成人外周靜脈血標(biāo)本。2實(shí)驗(yàn)方法:2.1提取DNA:應(yīng)用GENMED試劑盒法提取實(shí)驗(yàn)組及正常對(duì)照組血標(biāo)本的DNA,提取后將其置于-80℃恒溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)、變性聚丙烯酰胺凝膠、測(cè)序:采用PCR擴(kuò)增(擴(kuò)增片段為200bp),經(jīng)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳證實(shí)目的基因的存在。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送往上海生工生物工程股份有限公司測(cè)序。獲得mtDNA non-D-loop(5892、8272、8280、8281、8289、9777)6個(gè)位點(diǎn)中測(cè)序結(jié)果,對(duì)照正常人類線粒體數(shù)據(jù)庫(kù)基因序列,得出插入/缺失序列病例,用作下一步分析。預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)是否存在mtDNAnonD-loop(5892、8280、8281、8289、9777)5個(gè)位點(diǎn)的插入/缺失與總體非霍奇金淋巴瘤淋巴瘤的預(yù)后及非霍奇金淋巴瘤亞型(T細(xì)胞性、B細(xì)胞性)的預(yù)后均無(wú)相關(guān)性。因此此實(shí)驗(yàn)對(duì)mtDNAnon-D-loop8272位點(diǎn)與淋巴瘤預(yù)后的關(guān)系行以下研究。2.3統(tǒng)計(jì)分析:所有數(shù)據(jù)結(jié)果分析應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件,P0.05,認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生存分析單因素分析,應(yīng)用Kaplan-Meier法;多因素生存分析應(yīng)用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型。應(yīng)用卡方檢驗(yàn)和Fisher’s確切概率法分析不同分組在mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失發(fā)生率的不同。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)組、正常對(duì)照組發(fā)生mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失率關(guān)系的比較.實(shí)驗(yàn)組共139例非霍奇金淋巴瘤患者,有16例發(fā)生mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失,占11.5%。正常對(duì)照組共98例,發(fā)生5例mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失,占5.1%。兩者比較P=0.087,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失現(xiàn)象發(fā)生率在T細(xì)胞淋巴瘤為9例,占13.0%;在B細(xì)胞淋巴瘤7例,占10%,兩組比較,P=0.574,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失發(fā)現(xiàn)3例,占7.9%,惰性B細(xì)胞淋巴瘤mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失發(fā)生4例,占12.5%。兩組比較,P=0.403,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4有無(wú)mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失與總體非霍奇金淋巴瘤預(yù)后之間的關(guān)系,5年生存率分別是33.3%、26.7%,單因素分析P0.05,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5 T細(xì)胞淋巴瘤及B細(xì)胞淋巴瘤的臨床特征與mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失現(xiàn)象發(fā)生率關(guān)系的研究(Fisher’s確切概率法)依據(jù)患者臨床特征[年齡、性別、IPI評(píng)分、LDH(乳酸脫氫酶lacate dehydrogenas)、HBDH(α-羥丁酸脫氫酶alpha-hydroxybutyric dehydrogenase)、分期、病理類型、β2微球蛋白、骨髓浸潤(rùn)]分組,比較有無(wú)mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失現(xiàn)象與T細(xì)胞淋巴瘤及B細(xì)胞淋各臨床特征無(wú)相關(guān)性,P值均0.05。6 T細(xì)胞淋巴瘤中發(fā)生mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失5年生存率55.6%,mtDNA8272GGGGGTAGA序列正常的5年生存率16.4%,P=0.046,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B細(xì)胞淋巴瘤中發(fā)生mtDNA8272位點(diǎn)9-bp插入/缺失5年生存率42.9%,mtDNA8272GGGGGTAGA序列正常的5年生存率36.8%,P=0.672,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7 T細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后多因素分析將T細(xì)胞淋巴瘤患者的mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失、IPI評(píng)分、LDH、HBDH、分期、分型、β2微球蛋白、骨髓浸潤(rùn)納入多因素COX回歸模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,顯示mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失和LDH升高對(duì)5年生存率的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。結(jié)論:1有無(wú)mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失與非霍奇金淋巴瘤淋巴瘤總體發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)。2 mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失與非霍奇金淋巴瘤的分型及不同亞型淋巴瘤患者臨床特征無(wú)關(guān)。3有無(wú)mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失與總體非霍奇金淋巴瘤淋巴瘤及B細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后無(wú)關(guān)。與T細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后有一定相關(guān)性。4 mtDNA 8272GGGGGTAGA插入/缺失及LDH增高是T細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。mtDNA8272GGGGGTAG插入/缺失陽(yáng)性病例及LDH正常者預(yù)后好。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 張相國(guó);李警鋒;何宗師;徐達(dá);黃偉;廖衛(wèi)堅(jiān);;鼻咽癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與其預(yù)后相關(guān)性的臨床研究[J];實(shí)用癌癥雜志;2014年12期

2 羅春英;鄧飛;黃照權(quán);盧運(yùn)龍;黃永秩;;T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及hMSH2、hMLH1蛋白表達(dá)研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年04期

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本文編號(hào)：1287968