本文關(guān)鍵詞：線粒體D環(huán)區(qū)域單核苷酸多態(tài)性與脂肪肉瘤患病風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:線粒體DNA Displacement-loop(D-loop)區(qū)域的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)已被報(bào)道與多種類型的癌癥及惡性腫瘤的患病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。多種腫瘤細(xì)胞中線粒體D-環(huán)已成為基因突變和多態(tài)性研究熱點(diǎn),但對于mt DNA D-環(huán)與脂肪肉瘤的相關(guān)研究卻很少。在本實(shí)驗(yàn)中,我們共測序了82個(gè)脂肪肉瘤患者的D-loop區(qū)域基因排序并分析了它們在腫瘤風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)志物方面的預(yù)測性,以此來評估線粒體DNA D-loop SNPs與脂肪肉瘤患病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。方法:1收集2002年1月至2012年1月間在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院接受治療的脂肪肉瘤患者的血液樣本共105個(gè),選取能夠完善資料的共82個(gè),同時(shí)收集來自100個(gè)健康人的血液樣本作為對照。采集實(shí)驗(yàn)對象的相關(guān)臨床信息,完善臨床資料。2應(yīng)用GENMED全血線粒體DNA萃取試劑盒提取脂肪肉瘤患者及健康人的線粒體DNA,提取后將其置于-20℃恒溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?對目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列分析,上游引物序列為5'-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3'(核苷酸16,190-16,209)下游引物為5'-GCTTTGAGGAGGT AAGCTAC-3'(核苷酸602-583)。擴(kuò)增結(jié)束后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳提純,應(yīng)用循環(huán)測序法對合格的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測通測序。4通過電話方式對脂肪肉瘤患者進(jìn)行隨訪,同時(shí)收集患者住院期間的臨床表現(xiàn)及特征等。從已經(jīng)完成的脂肪肉瘤患者線粒體D環(huán)區(qū)的982bp序列中找出單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn),參照基因數(shù)據(jù)庫AC_000021號數(shù)據(jù),對不同單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)與脂肪肉瘤患者患病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系進(jìn)行分析。5統(tǒng)計(jì)分析:應(yīng)用四格表χ2檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有的數(shù)據(jù)處理均用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P0.05被認(rèn)為其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1在脂肪肉瘤組以及對照組的長為982bp的線粒體D環(huán)區(qū)域我們共發(fā)現(xiàn)78個(gè)線粒體單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn),其中的19個(gè)位點(diǎn)在患者或者對照組中的頻率≥5%,可以用來分析患者預(yù)后情況。2應(yīng)用χ2檢驗(yàn)在對單個(gè)SNPs進(jìn)行分析時(shí),在脂肪肉瘤患者中發(fā)現(xiàn)共有6個(gè)線粒體基因單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)與脂肪肉瘤患病風(fēng)險(xiǎn)之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性,P值0.05,這6個(gè)線粒體基因多態(tài)位點(diǎn)分別是73G,315C,523-524del,16290T,16319A,16356C。擁有單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)73G,523-524del,16290T,16319A,16356C的患者被證實(shí)患脂肪肉瘤的風(fēng)險(xiǎn)明顯增高。然而恰恰相反,擁有單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)315C的患者其患病風(fēng)險(xiǎn)較健康人反而低。3對不同的性別及年齡(以50歲為界)脂肪肉瘤患者的患病風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1線粒體D環(huán)區(qū)域是一個(gè)高度變異的多態(tài)性區(qū)域。2 73G,523-524del,16290T,16319A,16356C多態(tài)位點(diǎn)與脂肪肉瘤患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān),攜帶73G,523-524del,16290T,16319A,16356C等位基因可增加患脂肪肉瘤的風(fēng)險(xiǎn)。3 315C多態(tài)位點(diǎn)與脂肪肉瘤的患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān),攜帶315C等位基因可降低患脂肪肉瘤的風(fēng)險(xiǎn)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R738.6

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本文編號：1287030