本文關(guān)鍵詞：miR-592在人結(jié)直腸癌的發(fā)生中靶向調(diào)控FOXO3A基因

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【摘要】：目的預(yù)測及確認(rèn)miR-592在人結(jié)腸癌中的靶基因,并通過調(diào)控靶基因發(fā)揮生物學(xué)功能。方法1、通過在線預(yù)測軟件,預(yù)測miR-592下游靶基因,篩選出與miR-592結(jié)構(gòu)重疊的FOXO3A基因作為本實(shí)驗(yàn)的目的基因。收集20對臨床結(jié)直腸癌病人的樣本,應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)和免疫組織蛋白技術(shù)檢測結(jié)直腸癌組織及其配對的正常腸組織中FOXO3A的表達(dá)量。2、構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng),將FOXO3A突變型及野生型3’UTR載體分別與miR-592 inhibitor、miR-592 mimic共轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中,計(jì)算相對熒光素酶活性。3、將慢病毒LV-miR592 inh和LV-miR592-NC載體分別轉(zhuǎn)染到結(jié)腸癌細(xì)胞系LS174T細(xì)胞中,通過免疫蛋白印跡法分析轉(zhuǎn)染了慢病毒載體后結(jié)直腸癌細(xì)胞中FOXO3A的表達(dá)量。結(jié)果1、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,在臨床收集的20例結(jié)直腸癌病例中,FOXO3A在結(jié)直腸癌組織與配對的正常腸組織中低表達(dá),免疫組織蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示同樣結(jié)果,符合miR-592對靶基因調(diào)控的猜想趨勢。2、雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果示,miR-592可以顯著降低FOXO3A的3’UTR報(bào)告基因載體的相對熒光素酶活性。3、Western blotting結(jié)果顯示在抑制了miR-592表達(dá)的結(jié)腸癌細(xì)胞系LS174T中,FOXO3A的表達(dá)量也隨之增加。結(jié)論FOXO3A可能是miR-592在人結(jié)直腸癌發(fā)生過程中存在的潛在靶基因。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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本文編號：1281928