本文關(guān)鍵詞：HER-2在骨肉瘤中的表達(dá)及篩選其適配子方法的研究

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【摘要】：目的:研究人表皮生長因子受體2(Her-2)在骨肉瘤中的表達(dá)情況,探討其表達(dá)的臨床意義,并且利用SELEX(system evolution of Iigands by exponential enrichment)技術(shù)篩選與HER2蛋白特異性結(jié)合的適配子(aptamer)。方法:1.采用免疫組化SP法檢測80例骨肉瘤組織中HER-2的表達(dá),比較不同的臨床參數(shù)與HER-2表達(dá)的相關(guān)性。2.在證實(shí)了HER-2與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展有著關(guān)聯(lián)的條件下,體外合成78個(gè)長度的堿基,并且含有35個(gè)隨機(jī)寡核苷酸的ss DNA文庫,次級ss DNA文庫的制備是通過生物素-鏈親和素磁珠系統(tǒng)分離法得到的,且HER2蛋白的適配子是以微孔為介質(zhì)的SELEX正反篩法獲得。同時(shí),每輪ss DNA與靶蛋白HER2的親和力是通過生物素-鏈霉親和素-辣根過氧化物酶系統(tǒng)檢測,最后,將親和力最高的適配子群進(jìn)行克隆、測序。最后,適配體群的一級結(jié)構(gòu)和二級結(jié)構(gòu)要采用生物學(xué)軟件DNAMAN進(jìn)行分析,將親和性最高的適配子做了進(jìn)一步的特異性的檢驗(yàn)。結(jié)果:1.共80例病理標(biāo)本中,有61例骨肉瘤組織中HER-2呈陽性表達(dá),其陽性表達(dá)率為76.3%(61/80);其中不同性別、年齡階段,腫瘤發(fā)生部位、腫瘤直徑大小病理組織中HER-2的表達(dá)未見差異,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而在患者TNM分期高和發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中HER-2表達(dá)顯著,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.經(jīng)過12輪的篩選,得到了適配體9號與HER2蛋白具有極高親和力,其從從初始的0.18上升至0.86,提高了約5倍。特異性結(jié)果顯示:9號適配子具有針對性,只與HER2蛋白具有較高的特異性。結(jié)論:1.HER-2在骨肉瘤中表達(dá)異常,與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),可作為骨肉瘤早期檢測及評價(jià)預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的生物學(xué)指標(biāo)。2.經(jīng)過多輪的篩選成功獲得了特異性識別骨肉瘤HER2蛋白的單鏈DNA適配體,為骨肉瘤預(yù)后的診斷和治療奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R738.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1281892