本文關(guān)鍵詞：BAG-1與乳腺癌TAM耐藥及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)性研究

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【摘要】：目的本文探討B(tài)AG-1基因與ER,AKT,ERK,p-AKT,p-ERK的相關(guān)性,明確降低BAG-1基因表達(dá)水平后乳腺癌細(xì)胞對(duì)他莫昔芬及AKT抑制劑哌立福新敏感性的變化,觀察BAG-1基因在乳腺癌內(nèi)分泌耐藥發(fā)生發(fā)展機(jī)制中及雌激素下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的調(diào)控作用,為乳腺癌內(nèi)分泌耐藥提供新的治療靶點(diǎn)。方法培養(yǎng)ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞株T47D,構(gòu)建si RNA干擾乳腺癌細(xì)胞BAG-1的表達(dá)水平,通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot等方法驗(yàn)證質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中ER,AKT,ERK,p-AKT,p-ERK表達(dá)水平。給予雌激素受體抑制劑他莫昔芬及AKT抑制劑哌立福新處理,通過(guò)MTT法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力的變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期情況的變化,觀察干擾細(xì)胞BAG-1表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞內(nèi)分泌藥物敏感性的影響。結(jié)果1.選取乳腺癌細(xì)胞株T47D細(xì)胞,使用si RNA-BAG-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染T47D細(xì)胞干擾BAG-1表達(dá),通過(guò)western blot和real-time PCR檢測(cè)證實(shí)降表達(dá)組BAG-1水平表達(dá)明顯低于空質(zhì)粒組(P0.05)。2.Real-time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入si RNA-BAG-1的T47D細(xì)胞ER表達(dá)量較空質(zhì)粒組顯著下降(P0.05),Western blot進(jìn)一步驗(yàn)證并發(fā)現(xiàn)BAG-1表達(dá)水平下降后T47D細(xì)胞ER蛋白表達(dá)量較空質(zhì)粒組亦明顯下降(P0.05),同時(shí),p-AKT表達(dá)量上升(P0.05),AKT,ERK,p-ERK蛋白表達(dá)均無(wú)顯著差異。3.分別使用不同濃度的4-OH TAM(1-9u M)和哌立福新(5-25u M)處理si RNA-BAG-1質(zhì)粒和陰性對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的T47D細(xì)胞48h,結(jié)果顯示與空質(zhì)粒組相比,降表達(dá)組細(xì)胞存活率明顯增高,其差異隨藥物濃度增加而增大(P0.05),而哌立福新處理后降表達(dá)組細(xì)胞存活率明顯降低,差異隨藥物濃度增加而增大(P0.05)。4.分別使用4-OH TAM(10u M)和哌立福新(25u M)處理si RNA-BAG-1質(zhì)粒和陰性對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的T47D細(xì)胞48h,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率發(fā)現(xiàn),4-OH TAM處理后,降表達(dá)組比空質(zhì)粒組細(xì)胞凋亡率更低(11.0±0.7%vs.20.3±1.0%,P0.05),哌立福新處理后,降表達(dá)組比空質(zhì)粒組細(xì)胞凋亡率更高(7.1±1.3%vs.4.7±0.8%,P0.05)。對(duì)si RNA-BAG-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行他莫昔芬單藥處理(10u M),哌立福新(25u M)和他莫昔芬(10u M)聯(lián)合哌立福新(25u M)處理48h,結(jié)果顯示與哌立福新單藥組及他莫昔芬單藥組相比,聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡率較高(7.1±1.3%vs 9.4±1.4%vs 11.5±0.9%,P0.05)。5.使用4-OH TAM(10u M)處理si RNA-BAG-1質(zhì)粒和陰性對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的T47D細(xì)胞48h,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn),與空質(zhì)粒組相比,降表達(dá)組分布在G1期的細(xì)胞比例減少(67.4±0.8%vs.77.6±1.2%,P0.05)。對(duì)si RNA-BAG-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行他莫昔芬單藥處理(10u M),哌立福新(25u M)和他莫昔芬(10u M)聯(lián)合哌立福新(25u M)處理48h,結(jié)果顯示與哌立福新單藥組及他莫昔芬單藥組相比,聯(lián)合用藥組細(xì)胞分布在G1期的細(xì)胞比例增加。聯(lián)合用藥組G1期細(xì)胞阻滯率為76.7±1.4%,而哌立福新單藥組細(xì)胞G1期為61.3±1.3%,他莫昔芬單藥組細(xì)胞G1期為67.4±0.8%(P0.05)。結(jié)論1.在乳腺癌細(xì)胞中,我們觀察到BAG-1的表達(dá)水平下降后乳腺癌細(xì)胞ER的表達(dá)水平也降低,提示BAG-1表達(dá)水平的變化或可影響ER的表達(dá)水平。同時(shí),BAG-1表達(dá)水平降低可減弱4-OH TAM對(duì)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制,導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)4-OH TAM敏感性降低。提示我們BAG-1可作為乳腺癌內(nèi)分泌耐藥機(jī)制的一個(gè)新的研究方向。2.通過(guò)基因干擾技術(shù)降低BAG-1表達(dá)可影響AKT的磷酸化水平。BAG-1的表達(dá)水平下降能使細(xì)胞AKT磷酸化水平升高,這可能是細(xì)胞中ER表達(dá)水平下降的原因。他莫昔芬聯(lián)合哌立福新可部分恢復(fù)BAG-1表達(dá)水平降低的細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的敏感性,可能原因?yàn)锽AG-1表達(dá)下調(diào)后引起ER表達(dá)下調(diào)和AKT磷酸化增加,從而導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)TAM耐藥,AKT抑制劑抑制了AKT磷酸化從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。干擾BAG-1表達(dá)后影響ER及P-AKT的表達(dá)的下游相關(guān)通路及其影響他莫昔芬耐藥的機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 方瓊英;吳瓊;張秀玲;馬小麗;;乳腺癌的流行現(xiàn)狀分析[J];中國(guó)社會(huì)醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

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本文編號(hào)：1276415