本文關(guān)鍵詞：BAG-1與乳腺癌TAM耐藥及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)性研究

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【摘要】：目的本文探討B(tài)AG-1基因與ER,AKT,ERK,p-AKT,p-ERK的相關(guān)性,明確降低BAG-1基因表達水平后乳腺癌細胞對他莫昔芬及AKT抑制劑哌立福新敏感性的變化,觀察BAG-1基因在乳腺癌內(nèi)分泌耐藥發(fā)生發(fā)展機制中及雌激素下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的調(diào)控作用,為乳腺癌內(nèi)分泌耐藥提供新的治療靶點。方法培養(yǎng)ER陽性乳腺癌細胞株T47D,構(gòu)建si RNA干擾乳腺癌細胞BAG-1的表達水平,通過實時定量PCR、Western blot等方法驗證質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后細胞中ER,AKT,ERK,p-AKT,p-ERK表達水平。給予雌激素受體抑制劑他莫昔芬及AKT抑制劑哌立福新處理,通過MTT法檢測乳腺癌細胞生長增殖能力的變化,流式細胞術(shù)檢測乳腺癌細胞凋亡率及細胞周期情況的變化,觀察干擾細胞BAG-1表達對乳腺癌細胞內(nèi)分泌藥物敏感性的影響。結(jié)果1.選取乳腺癌細胞株T47D細胞,使用si RNA-BAG-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染T47D細胞干擾BAG-1表達,通過western blot和real-time PCR檢測證實降表達組BAG-1水平表達明顯低于空質(zhì)粒組(P0.05)。2.Real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染入si RNA-BAG-1的T47D細胞ER表達量較空質(zhì)粒組顯著下降(P0.05),Western blot進一步驗證并發(fā)現(xiàn)BAG-1表達水平下降后T47D細胞ER蛋白表達量較空質(zhì)粒組亦明顯下降(P0.05),同時,p-AKT表達量上升(P0.05),AKT,ERK,p-ERK蛋白表達均無顯著差異。3.分別使用不同濃度的4-OH TAM(1-9u M)和哌立福新(5-25u M)處理si RNA-BAG-1質(zhì)粒和陰性對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的T47D細胞48h,結(jié)果顯示與空質(zhì)粒組相比,降表達組細胞存活率明顯增高,其差異隨藥物濃度增加而增大(P0.05),而哌立福新處理后降表達組細胞存活率明顯降低,差異隨藥物濃度增加而增大(P0.05)。4.分別使用4-OH TAM(10u M)和哌立福新(25u M)處理si RNA-BAG-1質(zhì)粒和陰性對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的T47D細胞48h,流式細胞儀檢測細胞凋亡率發(fā)現(xiàn),4-OH TAM處理后,降表達組比空質(zhì)粒組細胞凋亡率更低(11.0±0.7%vs.20.3±1.0%,P0.05),哌立福新處理后,降表達組比空質(zhì)粒組細胞凋亡率更高(7.1±1.3%vs.4.7±0.8%,P0.05)。對si RNA-BAG-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細胞進行他莫昔芬單藥處理(10u M),哌立福新(25u M)和他莫昔芬(10u M)聯(lián)合哌立福新(25u M)處理48h,結(jié)果顯示與哌立福新單藥組及他莫昔芬單藥組相比,聯(lián)合用藥組細胞凋亡率較高(7.1±1.3%vs 9.4±1.4%vs 11.5±0.9%,P0.05)。5.使用4-OH TAM(10u M)處理si RNA-BAG-1質(zhì)粒和陰性對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的T47D細胞48h,流式細胞儀檢測細胞周期發(fā)現(xiàn),與空質(zhì)粒組相比,降表達組分布在G1期的細胞比例減少(67.4±0.8%vs.77.6±1.2%,P0.05)。對si RNA-BAG-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的細胞進行他莫昔芬單藥處理(10u M),哌立福新(25u M)和他莫昔芬(10u M)聯(lián)合哌立福新(25u M)處理48h,結(jié)果顯示與哌立福新單藥組及他莫昔芬單藥組相比,聯(lián)合用藥組細胞分布在G1期的細胞比例增加。聯(lián)合用藥組G1期細胞阻滯率為76.7±1.4%,而哌立福新單藥組細胞G1期為61.3±1.3%,他莫昔芬單藥組細胞G1期為67.4±0.8%(P0.05)。結(jié)論1.在乳腺癌細胞中,我們觀察到BAG-1的表達水平下降后乳腺癌細胞ER的表達水平也降低,提示BAG-1表達水平的變化或可影響ER的表達水平。同時,BAG-1表達水平降低可減弱4-OH TAM對乳腺癌細胞的生長抑制,導(dǎo)致細胞對4-OH TAM敏感性降低。提示我們BAG-1可作為乳腺癌內(nèi)分泌耐藥機制的一個新的研究方向。2.通過基因干擾技術(shù)降低BAG-1表達可影響AKT的磷酸化水平。BAG-1的表達水平下降能使細胞AKT磷酸化水平升高,這可能是細胞中ER表達水平下降的原因。他莫昔芬聯(lián)合哌立福新可部分恢復(fù)BAG-1表達水平降低的細胞對他莫昔芬的敏感性,可能原因為BAG-1表達下調(diào)后引起ER表達下調(diào)和AKT磷酸化增加,從而導(dǎo)致細胞對TAM耐藥,AKT抑制劑抑制了AKT磷酸化從而抑制細胞生長。干擾BAG-1表達后影響ER及P-AKT的表達的下游相關(guān)通路及其影響他莫昔芬耐藥的機制尚需進一步研究。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 方瓊英;吳瓊;張秀玲;馬小麗;;乳腺癌的流行現(xiàn)狀分析[J];中國社會醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

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本文編號：1276415