本文關(guān)鍵詞：CIK細(xì)胞體外殺傷人肝癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討CIK細(xì)胞的培養(yǎng)及體外增值方法,觀察CIK細(xì)胞體外增值的規(guī)律并對其進(jìn)行表型分析。方法從健康志愿者肘靜脈抽取外周血,密度梯度離心,分離出單個核細(xì)胞(PBMC),將該細(xì)胞種植于CD3單克隆抗體及包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。然后在培養(yǎng)基里加入重組人IFN-γ、IL-1α和IL-2。第0天、第3天、第6天、第9天、第12天、第15、第18天和第21天時分別用抗人CD3-FITC,抗人CD56-PE標(biāo)記CIK細(xì)胞,然后上流式細(xì)胞儀進(jìn)行測定CD3+、CD56+細(xì)胞比例結(jié)果CIK細(xì)胞在最初的三天增殖相對緩慢,至第15天增殖速度達(dá)到頂峰,隨著培養(yǎng)時間的延長,CD3CD56雙陽性的比例逐漸升高。結(jié)論CIK細(xì)胞體外培養(yǎng)方法可靠,具有明顯的活性,隨著時間的延長,CIK細(xì)胞的倍增明顯。目的:將培養(yǎng)成功的CIK細(xì)胞與人肝癌細(xì)胞共培養(yǎng),分析CIK細(xì)胞對人肝癌細(xì)胞增殖、凋亡以及克隆形成的影響,更好地為臨床治療HCC提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將CIK細(xì)胞分別與三種人肝癌細(xì)胞系(Hep G2,Hep3B和Huh7細(xì)胞)在同一培養(yǎng)體系內(nèi)共同培養(yǎng)24h及48 h。采用流式細(xì)胞術(shù)對CIK細(xì)胞的表型進(jìn)行分析,CCK-8法檢測人肝癌細(xì)胞的增殖情況。通過軟瓊脂平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)分析人肝癌細(xì)胞的克隆形成能力,使用Annexin V-PI雙染法檢測肝癌細(xì)胞的凋亡情況。RT-PCR法和Westen blotting法分別檢測凋亡分子Bax和Caspase-3的m RNA及蛋白水平表達(dá)情況。結(jié)果:體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞可明顯抑制三種肝癌細(xì)胞系的生長,克隆形成能力減弱,導(dǎo)致肝癌細(xì)胞系的凋亡(凋亡細(xì)胞比例增加,凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表達(dá)水平升高),并且對Hep G2肝癌細(xì)胞系的抑制效果較Hep3B和Huh7兩種肝癌細(xì)胞系更加明顯。結(jié)論:在體外,CIK細(xì)胞能明顯抑制肝癌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡,且該細(xì)胞增殖與凋亡誘導(dǎo)具時間依賴性。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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本文編號：1275294