本文關(guān)鍵詞：候選糖蛋白標(biāo)志物在食管鱗癌中表達(dá)的臨床意義

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【摘要】：背景食管癌(Esophageal Cancer,EC)是世界八大常見惡性腫瘤之一,預(yù)后很差,2008年全球共有407 000人死于EC,其中一半以上在中國。在全球范圍內(nèi),大多數(shù)EC組織學(xué)上屬食管鱗狀細(xì)胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。ESCC在全球不同的地理位置發(fā)病率也大不相同。眾所周知的高風(fēng)險地區(qū)從土耳其東部一直延伸至中國北部及西部地區(qū),即所謂的“亞洲食管癌地帶”,其他的主要高發(fā)地區(qū)包括香港、日本、非洲東南部、法國南部和南美的部分地區(qū)。在中國,EC是五大常見惡性腫瘤之一,也是第四大致死癌癥。2008年中國EC發(fā)病率為16.7/100000,共有259 235例新增病例和211 084例死亡病例。EC的重要特征之一是高死亡率,其五年生存率僅為15%-25%,大多數(shù)病人在臨床上確診之后的生存時間不超過一年。EC預(yù)后不良的主要原因是大多數(shù)早期食管癌由于沒有明顯癥狀而不易被發(fā)現(xiàn),直到中晚期擴(kuò)散才有臨床癥狀,然而此時已失去了最佳手術(shù)時期。因此,早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及早期治療是降低EC發(fā)病率及死亡率的有效手段之一。蛋白質(zhì)糖基化修飾是最為常見的一種翻譯后修飾,人體內(nèi)約有70%的蛋白發(fā)生了糖基化修飾。糖蛋白的寡糖側(cè)鏈在細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)間相互作用及識別等生物學(xué)過程中具有重要的調(diào)控作用,導(dǎo)致許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程均涉及了蛋白的異常糖基化。我們前期應(yīng)用二維電泳及質(zhì)譜技術(shù)已鑒定出22種高甘露糖型和23種唾液酸型差異表達(dá)的N-連接糖蛋白,本實驗進(jìn)一步驗證了其中的7種蛋白質(zhì)分子在ESCC組織及血清中的表達(dá)規(guī)律及臨床意義。目的本研究應(yīng)用Western blot技術(shù)驗證前期鑒定的7種蛋白在ESCC不同臨床分期組織及血清中的表達(dá)規(guī)律,探討這些蛋白質(zhì)分子診斷ESCC的臨床應(yīng)用價值及前景,為鑒定ESCC特異敏感的生物標(biāo)志物提供實驗依據(jù);此外,分析這些蛋白的表達(dá)異常與ESCC發(fā)生、發(fā)展及演進(jìn)過程的關(guān)系,更深入地理解ESCC發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。材料與方法1 ESCC及癌旁組織:選取標(biāo)本庫中年齡、性別匹配的TNM I-IV期(各期20例)ESCC及其癌旁組織標(biāo)本,用IP裂解液裂解提取組織蛋白,Bradford法測組織蛋白濃度;2血清標(biāo)本:選取ESCC血清72例、食管炎血清48例和上消化道不適但食管黏膜組織學(xué)正常血清24例。血清N-連接糖蛋白富集采用三種混合植物凝集素包括刀豆蛋白凝集素(Concanavalin A,Con A)、晶狀體凝集素(Lentil lectin,LCH)及雪花凝集素(Snowdrop lectin,GNA)組成的親和層析柱富集純化。3 Western blot:應(yīng)用12%分離膠、4%濃縮膠電泳分離蛋白、轉(zhuǎn)膜、牛奶封閉,孵育一抗、二抗,ECL顯色曝光。4半定量分析:采用Image Master軟件對Western blot條帶進(jìn)行掃描和灰度分析。5統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理,Western blot灰度分析結(jié)果采用t檢驗,P0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1本研究驗證了7種候選糖蛋白標(biāo)志物在ESCC中的差異表達(dá)。觸珠蛋白(Haptoglobin,HP)在ESCC的Ⅰ-Ⅲ期的癌組織中表達(dá)明顯低于正常組織(P0.05),HP在TNMⅠ期中表達(dá)最低,HP低表達(dá)與臨床TNM分期呈負(fù)相關(guān)(P0.05);2在TNMⅢ和Ⅳ期ESCC中組織蛋白酶原D(Procathepsin D,p CD)表達(dá)顯著高于癌旁組織學(xué)正常黏膜組織(P0.05),在TNMⅠ和Ⅱ期中亦升高但無統(tǒng)計學(xué)意義;3在TNMⅠ期ESCC組織中超氧化物歧化酶3(Superoxide dismutase 3,SOD3)表達(dá)明顯高于癌旁正常組織(P0.05),但TNMⅡ和Ⅲ期中具有升高趨勢;4 ESCC及癌旁組織中C3(Complement C3,C3)、人脯氨酸/精氨酸豐富端亮氨酸豐富蛋白(PRELP)和凝集素(Clusterin,CLU)的表達(dá)變化無明顯規(guī)律;5 ESCC血清中HP的表達(dá)明顯高于食管黏膜炎癥及食管黏膜組織學(xué)正常血清(P0.05),而ESCC血清中Clusterin表達(dá)與HP相反,明顯低于食管黏膜炎癥及食管黏膜組織學(xué)正常血清(P0.05);6對HP表達(dá)無明顯變化的ESCC血清中,N-糖基化HP血清表達(dá)明顯高于食管黏膜炎癥組和組織學(xué)正常組(P0.05)。結(jié)論1 HP表達(dá)異常可能參與了ESCC發(fā)生發(fā)展過程,血清HP或N-糖基化HP是潛在的ESCC血清標(biāo)志物,但尚需進(jìn)一步研究證實。2 p CD可能參與了中晚期ESCC浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性演進(jìn)過程。
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1

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本文編號：1273179