發(fā)布時(shí)間：2017-12-10 00:07

  本文關(guān)鍵詞：TrkB在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及功能研究

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【摘要】：目的：近來越來越多證據(jù)表明酪氨酸激酶受體B(Tyrosine kinase receptor B, TrkB)的異常表達(dá)與多種神經(jīng)源性和非神經(jīng)源性的腫瘤的惡性進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)。有研究報(bào)道TrkB在乳腺癌、胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌和甲狀腺髓樣癌等不同類型的腫瘤中表達(dá)異常,以不同的方式發(fā)揮作用。然而TrkB在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)如何,以及TrkB是以何種方式發(fā)揮作用,這些是我們還不了解的。本實(shí)驗(yàn)主要檢測TrkB在腎透明細(xì)胞癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)情況,并觀察過表達(dá)TrkB基因?qū)δI透明細(xì)胞癌細(xì)胞系生物學(xué)行為變化的影響。方法：①實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time PCR)檢測65對非轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌及癌旁組織和24例轉(zhuǎn)移性腎癌組織中TrkB的nRNA表達(dá)水平,蛋白免疫印跡(western-blot)以及免疫組化方法檢測TrkB蛋白在非轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌及其癌旁組織中的表達(dá)情況。②實(shí)時(shí)定量PCR和western-blot方法檢測TrkB在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN、Caki-1、769-P和786-O以及正常腎小管上皮細(xì)胞系HK2中的表達(dá)。③重組過表達(dá)TrkB的慢病毒質(zhì)粒,培養(yǎng)穩(wěn)定高表達(dá)TrkB的769-P和786-O腎癌細(xì)胞系。④MTS法檢測穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的增殖情況,劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果：①在mRNA水平,TrkB在非轉(zhuǎn)移性腎癌組織中的表達(dá)較其癌旁組織低(P=0.009),而在轉(zhuǎn)移性腎癌組織中其表達(dá)比癌旁組織高(P=0.03)。在蛋白水平,western-blot和免疫組化均提示非轉(zhuǎn)移性腎癌組織中TrkB表達(dá)較其癌旁組織低。②在mRNA和蛋白水平,非轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系(769-P、786-O)的TrkB表達(dá)低于正常腎小管上皮細(xì)胞系,轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系(ACHN、Caki-1)的TrkB表達(dá)高于正常腎小管上皮細(xì)胞系。③成功構(gòu)建了重組過表達(dá)TrkB質(zhì)粒,并進(jìn)行慢病毒包裝,成功培育了穩(wěn)定過表達(dá)TrkB的769-P和786-0腎癌細(xì)胞系。④在769-P和786-O的細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)中,與空載體對照組相比,MTS實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)TrkB的細(xì)胞增殖能力下降;劃痕實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)TrkB的遷移細(xì)胞數(shù)顯著增多；Transwell實(shí)驗(yàn)顯示過表達(dá)TrkB的穿膜細(xì)胞數(shù)顯著增多(P均0.05)。結(jié)論：TrkB在腎透明細(xì)胞癌組織中的異常表達(dá)可能與腫瘤的生長、侵襲能力有關(guān),在腎透明細(xì)胞癌的惡性進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
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本文編號：1272362