本文關(guān)鍵詞：TrkB在腎透明細胞癌中的表達及功能研究

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【摘要】：目的：近來越來越多證據(jù)表明酪氨酸激酶受體B(Tyrosine kinase receptor B, TrkB)的異常表達與多種神經(jīng)源性和非神經(jīng)源性的腫瘤的惡性進展和預(yù)后密切相關(guān)。有研究報道TrkB在乳腺癌、胰腺癌、非小細胞肺癌、肝癌和甲狀腺髓樣癌等不同類型的腫瘤中表達異常,以不同的方式發(fā)揮作用。然而TrkB在腎透明細胞癌中的表達如何,以及TrkB是以何種方式發(fā)揮作用,這些是我們還不了解的。本實驗主要檢測TrkB在腎透明細胞癌組織和細胞系中的表達情況,并觀察過表達TrkB基因?qū)δI透明細胞癌細胞系生物學(xué)行為變化的影響。方法：①實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)(real-time PCR)檢測65對非轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌及癌旁組織和24例轉(zhuǎn)移性腎癌組織中TrkB的nRNA表達水平,蛋白免疫印跡(western-blot)以及免疫組化方法檢測TrkB蛋白在非轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌及其癌旁組織中的表達情況。②實時定量PCR和western-blot方法檢測TrkB在腎透明細胞癌細胞系A(chǔ)CHN、Caki-1、769-P和786-O以及正常腎小管上皮細胞系HK2中的表達。③重組過表達TrkB的慢病毒質(zhì)粒,培養(yǎng)穩(wěn)定高表達TrkB的769-P和786-O腎癌細胞系。④MTS法檢測穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的增殖情況,劃痕實驗和Transwell實驗驗證其遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果：①在mRNA水平,TrkB在非轉(zhuǎn)移性腎癌組織中的表達較其癌旁組織低(P=0.009),而在轉(zhuǎn)移性腎癌組織中其表達比癌旁組織高(P=0.03)。在蛋白水平,western-blot和免疫組化均提示非轉(zhuǎn)移性腎癌組織中TrkB表達較其癌旁組織低。②在mRNA和蛋白水平,非轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌細胞系(769-P、786-O)的TrkB表達低于正常腎小管上皮細胞系,轉(zhuǎn)移性腎透明細胞癌細胞系(ACHN、Caki-1)的TrkB表達高于正常腎小管上皮細胞系。③成功構(gòu)建了重組過表達TrkB質(zhì)粒,并進行慢病毒包裝,成功培育了穩(wěn)定過表達TrkB的769-P和786-0腎癌細胞系。④在769-P和786-O的細胞功能實驗中,與空載體對照組相比,MTS實驗顯示過表達TrkB的細胞增殖能力下降;劃痕實驗顯示過表達TrkB的遷移細胞數(shù)顯著增多；Transwell實驗顯示過表達TrkB的穿膜細胞數(shù)顯著增多(P均0.05)。結(jié)論：TrkB在腎透明細胞癌組織中的異常表達可能與腫瘤的生長、侵襲能力有關(guān),在腎透明細胞癌的惡性進展中發(fā)揮重要作用。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
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本文編號：1272362