本文關(guān)鍵詞：miR-17、20a介導(dǎo)的FBXO31下調(diào)在胃癌發(fā)生中的作用

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【摘要】：背景：胃癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。特別是在我國(guó),胃癌的發(fā)病率和死亡率均顯著高于世界平均水平。由于胃癌在早期難以被發(fā)現(xiàn),大多數(shù)病人一旦確診,已經(jīng)是晚期,傳統(tǒng)的治療方案,如手術(shù)、放射治療以及現(xiàn)存的藥物治療效果均不佳,因此深入了解胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,找出新的診療標(biāo)志物以及治療靶點(diǎn),對(duì)于提高胃癌病人的生存率是非常重要的。生物體內(nèi),泛素依賴(lài)的蛋白酶體降解途徑對(duì)于靶蛋白的降解起關(guān)鍵性的作用。泛素化過(guò)程需要泛素激活酶(E1)、泛素結(jié)合酶(E2)和泛素連接酶(E3)三種酶的參與。FBXO31參與了skpl-cullin-F-box(SCF) E3泛素連接酶的形成,在該途徑中發(fā)揮與底物識(shí)別、結(jié)合的重要作用,從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)靶蛋白的降解。FBXO31通過(guò)識(shí)別、結(jié)合靶蛋白,如CyclinD1, Cdt1, MKK6、Par6c等,并使之發(fā)生泛素化降解,從而參與細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷反應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、神經(jīng)元發(fā)育等過(guò)程。在癌癥方面,FBXO31在乳腺癌、肝癌中表達(dá)水平均顯著降低,因此被認(rèn)為是一種抑癌基因。然而在食管鱗狀細(xì)胞癌中,卻有相反的報(bào)道：FBXO31的高表達(dá)暗示著不良預(yù)后。因此,FBXO31所發(fā)揮的作用與不同的腫瘤類(lèi)型有關(guān)。本研究首先在胃癌和癌旁組織中檢測(cè)了FBXO31的表達(dá)水平,并分析了FBXO31表達(dá)水平與臨床病理學(xué)參數(shù)及病人存活期限的關(guān)系；然后在胃癌細(xì)胞中檢測(cè)了FBXO31對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程等的影響,并探討了FBXO31引起這些生物學(xué)效應(yīng)的分子機(jī)制；最后從miRNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控方面探討了FBXO31在胃癌中表達(dá)失調(diào)的分子機(jī)制。目的：探究FBXO31在胃癌發(fā)生中所起的作用及其分子調(diào)控機(jī)制,為胃癌的分子治療提供新的靶點(diǎn)。方法：1.用qRT-PCR、Western blot和免疫組化等方法檢測(cè)FBXO31在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)水平,并分析FBXO31表達(dá)水平與病人臨床病理學(xué)指標(biāo)及病人存活期限之間的關(guān)系。2. FBXO31真核表達(dá)載體及FBXO31特異siRNA分別轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞,用克隆形成實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)FBXO31對(duì)細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期進(jìn)程的影響,并用Western blot檢測(cè)FBXO31對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。3.利用裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞中FBXO31過(guò)表達(dá)后對(duì)裸鼠體內(nèi)成瘤能力的影響。4.用生物信息學(xué)軟件(pictar和TargetScan)分析可能靶向調(diào)控FBXO31的潛在的miRNAs,并通過(guò)miRNAs轉(zhuǎn)染、qRT-PCR、Western blot、雙熒光素酶活性檢測(cè)等方法在細(xì)胞水平檢測(cè)候選niRNAs對(duì)FBXO31表達(dá)的調(diào)控。5.用qRT-PCR方法檢測(cè)在胃癌及癌旁組織標(biāo)本中候選miRNAs勺表達(dá)水平,并分析候選miRNAs與FBXO31表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果：1.在53例胃癌及癌旁組織標(biāo)本中,有38例(71.7%)呈現(xiàn)FBXO31的mRNA在癌組織中顯著低表達(dá)；在52例胃癌及癌旁組織標(biāo)本中,有37例(71.2%)呈現(xiàn)FBXO31的蛋白水平在癌組織中顯著低表達(dá)。FBXO31的蛋白水平與胃癌病人臨床指標(biāo)具有相關(guān)性,低表達(dá)FBXO31的胃癌病人,生存期一般較短,往往暗示著不良的預(yù)后。2. FBXO31在胃癌細(xì)胞中高表達(dá)后可顯著抑制細(xì)胞的克隆形成能力,并使細(xì)胞周期停滯在G1期,而FBXO31 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞可促進(jìn)細(xì)胞的克隆形成能力,促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)程。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)FBXO31可顯著抑制細(xì)胞周期蛋白CyclinD1的表達(dá)。3.裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)顯示FBXO31高表達(dá)可顯著抑制胃癌細(xì)胞在裸鼠皮下的成瘤能力。4.在胃癌細(xì)胞內(nèi),miR-17和miR-20a可以直接與FBXO31的3’非翻譯區(qū)(UTR)相結(jié)合,從而抑制FBXO31的表達(dá)。5.miR-20a及miR-17均在胃癌組織中顯著高表達(dá),二者均與FBXO31的表達(dá)有明顯的負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論：FBXO31在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著降低,并且FBXO31的低表達(dá)與病人的存活期限縮短密切相關(guān)；胃癌細(xì)胞中FBXO31可顯著抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞周期停滯；并且FBXO31高表達(dá)可顯著抑制胃癌細(xì)胞在裸鼠皮下的成瘤能力。因此,FBXO31在胃癌中是一種候選腫瘤抑制因子。胃癌細(xì)胞中miR-20a及miR-17可以靶向抑制FBXO31的表達(dá),miR-20a及miR-17在胃癌組織中顯著高表達(dá),二者均與FBXO31呈顯著負(fù)相關(guān),因此,miR-20a及miR-17在胃癌中表達(dá)水平的顯著升高是導(dǎo)致FBXO31在胃癌中表達(dá)降低的分子機(jī)制之一。胃癌中,靶向miR-20a (miR-17)-FBXO31-CyclinD1通路可能作為抗腫瘤治療的策略之一
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1272278