本文關(guān)鍵詞：miR-17、20a介導(dǎo)的FBXO31下調(diào)在胃癌發(fā)生中的作用

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【摘要】：背景：胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一。特別是在我國,胃癌的發(fā)病率和死亡率均顯著高于世界平均水平。由于胃癌在早期難以被發(fā)現(xiàn),大多數(shù)病人一旦確診,已經(jīng)是晚期,傳統(tǒng)的治療方案,如手術(shù)、放射治療以及現(xiàn)存的藥物治療效果均不佳,因此深入了解胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,找出新的診療標(biāo)志物以及治療靶點,對于提高胃癌病人的生存率是非常重要的。生物體內(nèi),泛素依賴的蛋白酶體降解途徑對于靶蛋白的降解起關(guān)鍵性的作用。泛素化過程需要泛素激活酶(E1)、泛素結(jié)合酶(E2)和泛素連接酶(E3)三種酶的參與。FBXO31參與了skpl-cullin-F-box(SCF) E3泛素連接酶的形成,在該途徑中發(fā)揮與底物識別、結(jié)合的重要作用,從而實現(xiàn)了對靶蛋白的降解。FBXO31通過識別、結(jié)合靶蛋白,如CyclinD1, Cdt1, MKK6、Par6c等,并使之發(fā)生泛素化降解,從而參與細胞周期調(diào)控、DNA損傷反應(yīng)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、神經(jīng)元發(fā)育等過程。在癌癥方面,FBXO31在乳腺癌、肝癌中表達水平均顯著降低,因此被認為是一種抑癌基因。然而在食管鱗狀細胞癌中,卻有相反的報道：FBXO31的高表達暗示著不良預(yù)后。因此,FBXO31所發(fā)揮的作用與不同的腫瘤類型有關(guān)。本研究首先在胃癌和癌旁組織中檢測了FBXO31的表達水平,并分析了FBXO31表達水平與臨床病理學(xué)參數(shù)及病人存活期限的關(guān)系；然后在胃癌細胞中檢測了FBXO31對細胞增殖、細胞周期進程等的影響,并探討了FBXO31引起這些生物學(xué)效應(yīng)的分子機制；最后從miRNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控方面探討了FBXO31在胃癌中表達失調(diào)的分子機制。目的：探究FBXO31在胃癌發(fā)生中所起的作用及其分子調(diào)控機制,為胃癌的分子治療提供新的靶點。方法：1.用qRT-PCR、Western blot和免疫組化等方法檢測FBXO31在胃癌及癌旁組織中的表達水平,并分析FBXO31表達水平與病人臨床病理學(xué)指標(biāo)及病人存活期限之間的關(guān)系。2. FBXO31真核表達載體及FBXO31特異siRNA分別轉(zhuǎn)染胃癌細胞,用克隆形成實驗和流式細胞術(shù)分別檢測FBXO31對細胞增殖及細胞周期進程的影響,并用Western blot檢測FBXO31對細胞周期相關(guān)蛋白表達的影響。3.利用裸鼠體內(nèi)成瘤實驗檢測胃癌細胞中FBXO31過表達后對裸鼠體內(nèi)成瘤能力的影響。4.用生物信息學(xué)軟件(pictar和TargetScan)分析可能靶向調(diào)控FBXO31的潛在的miRNAs,并通過miRNAs轉(zhuǎn)染、qRT-PCR、Western blot、雙熒光素酶活性檢測等方法在細胞水平檢測候選niRNAs對FBXO31表達的調(diào)控。5.用qRT-PCR方法檢測在胃癌及癌旁組織標(biāo)本中候選miRNAs勺表達水平,并分析候選miRNAs與FBXO31表達的相關(guān)性。結(jié)果：1.在53例胃癌及癌旁組織標(biāo)本中,有38例(71.7%)呈現(xiàn)FBXO31的mRNA在癌組織中顯著低表達；在52例胃癌及癌旁組織標(biāo)本中,有37例(71.2%)呈現(xiàn)FBXO31的蛋白水平在癌組織中顯著低表達。FBXO31的蛋白水平與胃癌病人臨床指標(biāo)具有相關(guān)性,低表達FBXO31的胃癌病人,生存期一般較短,往往暗示著不良的預(yù)后。2. FBXO31在胃癌細胞中高表達后可顯著抑制細胞的克隆形成能力,并使細胞周期停滯在G1期,而FBXO31 siRNA轉(zhuǎn)染細胞可促進細胞的克隆形成能力,促進細胞周期的進程。進一步研究發(fā)現(xiàn)FBXO31可顯著抑制細胞周期蛋白CyclinD1的表達。3.裸鼠體內(nèi)成瘤實驗顯示FBXO31高表達可顯著抑制胃癌細胞在裸鼠皮下的成瘤能力。4.在胃癌細胞內(nèi),miR-17和miR-20a可以直接與FBXO31的3’非翻譯區(qū)(UTR)相結(jié)合,從而抑制FBXO31的表達。5.miR-20a及miR-17均在胃癌組織中顯著高表達,二者均與FBXO31的表達有明顯的負相關(guān)關(guān)系。結(jié)論：FBXO31在胃癌組織中的表達水平顯著降低,并且FBXO31的低表達與病人的存活期限縮短密切相關(guān)；胃癌細胞中FBXO31可顯著抑制細胞增殖、促進細胞周期停滯；并且FBXO31高表達可顯著抑制胃癌細胞在裸鼠皮下的成瘤能力。因此,FBXO31在胃癌中是一種候選腫瘤抑制因子。胃癌細胞中miR-20a及miR-17可以靶向抑制FBXO31的表達,miR-20a及miR-17在胃癌組織中顯著高表達,二者均與FBXO31呈顯著負相關(guān),因此,miR-20a及miR-17在胃癌中表達水平的顯著升高是導(dǎo)致FBXO31在胃癌中表達降低的分子機制之一。胃癌中,靶向miR-20a (miR-17)-FBXO31-CyclinD1通路可能作為抗腫瘤治療的策略之一
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：1272278